F90对胶质母细胞瘤细胞的作用及机制研究
5页1、F90对胶质母细胞瘤细胞的作用及机制研究【摘要】目的讨论表皮生长因子受体egfr抑制剂f90对胶质母细胞瘤gb细胞的抑制作用及其机制。方法采用tt法检测f90对gb细胞的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和免疫印迹法esternblt检测蛋白表达。结果f90能明显抑制u251和shg-44细胞的生长,半数抑制浓度i50分别为5.81.3和5.11.2l/l,且呈一定的剂量相关性。f90可以诱导u251细胞的凋亡,抑制u251细胞egfr的磷酸化及其丝裂原活化的蛋白激酶apk通路下游信号的活化,下调bl-2蛋白的表达,上调p53蛋白的表达。结论f90能有效抑制某些gb细胞在体外的生长,与iressa作用强度相当,有可能成为一种新的治疗gb的药物。【关键词】胶质母细胞瘤受体表皮生长因子effetandantiturehanisff90ngliblastaellsliufangjun1,guisngbai2,sunzelin1,etal.1.beijingneursurgialinstitute,beijing100050,hina;2.departentfneursurgery,beijin
2、gtiantanhspital,apitaluniversityfedialsienes,beijing100050,hinaabstrat:bjetivetinvestigatetheantitureffetsandantiturehanisff90,akindfinhibitrfepideralgrthfatrreeptr(egfr)ngliblasta(gb)ells.ethdsantiturativityff90asdetetedbyttassay.theantiturehanisasinvestigatedbyflytetryandesternbltassay.resultsu251andshg-44ellsereinhibitedbyf90inadse-dependentannerinvitr.the50%inhibitrynentratin(i50)ftheas5.81.3and5.11.2l/l,respetively.f90inhibitedphsphrylatinfegfranddnstreasignalingprteinsfitgen-ativatedprtein
3、kinase(apk)pathay,up-regulatedp53prteinanddn-regulatedbl-2prtein,induedellapptsisnfiredbyflytetry.nlusinf90iseffetivefrgrthinhibitinfsegbellsinvitrandhasasiilareffettiressa,therefreaybeanvelptentagentfrgb.keyrds:gliblasta;reeptr,epideralgrthfatr;在高度恶性的胶质瘤,尤其是胶质母细胞瘤gb中经常能见到表皮生长因子受体egfr的过表达1。由英国阿斯利康研发的iressagefitinib,zd1839是一种选择性的egfr酪氨酸激酶抑制剂,在体外对高表达egfr或转染egfr基因的gb有抑制生长及抗侵袭作用2。f90是中国医学科学院药物研究所自主研制开发的一种iressa前药,在体外经脂酶孵育或体内经胃酸作用后可以转化为有活性的iressa,已经申请了中国专利与国际专利。本实验旨在观察f90对gb细胞的抑制作用及其机制。1对象与方法1.1药品与试剂
4、f90由中国医学科学院药物研究所化学合成室提供,经脂酶孵育24h后用于体外实验,对照药物iressa购自英国阿斯利康公司。两种药物均采用二甲基亚砜ds配制,对照组参加一样剂量的ds浓度不超过0.1%。一抗购自美国santaruz公司,辣根过氧化物酶标记的二抗购自美国prega公司。1.2细胞株人gb细胞株shg-44、tj899和tj905由中国医学科学院药物研究所药理室惠赠,bt325和u251由北京市神经外科研究所细胞室提供。均采用含10%胎牛血清fbs、100u/l青霉素和100g/l链霉素的de培养基,0.25%胰酶-乙二胺四乙酸edta消化,在含5%2的37培养箱中培养传代。1.3tt法测定肿瘤细胞存活率按1000个细胞/孔接种于96孔板,次日加含不同浓度药物及相应溶剂对照的新颖培养基,每组设3个平行孔,培养96h后,每孔加用无血清培养基新颖配制的5g/ltt100l,继续培养4h,然后每孔加200lds溶解甲臜颗粒,振荡混匀后,k3型酶标仪labsystes,dragn,finland测定光密度值d,参考波长450n,检测波长570n;抑制率%=给药组d值-对照组d值/对照
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