TIMP4基因的克隆、原核表达及活性测定
6页1、TIMP-4基因的克隆、原核表达及活性测定【摘要】目的:采用RT-PR法获取TIP-4基因,并通过原核表达获取具有生物活性的TIP-4交融蛋白。方法:从SD大鼠心肌组织中提取总RNA,利用RT-PR法扩增出TIP-4基因,经基因序列分析后构建表达载体PET-28a(+)-TIP-4,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导TIP-4的表达。利用N2+-NTA纯化和复性后,根据其骨肉瘤细胞迁移才能的影响检测其活性。结果:克隆到编码序列完全正确的大鼠TIP-4基因,能在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物占全菌总蛋白的23.5%,N2+-NTA纯化和复性后,纯度达90%以上。纯化后的交融蛋白使骨肉瘤细胞株的迁移才能得到显著抑制。结论:通过基因克隆和原核表达的方式可以大量获得具有生物活性的TIP-4交融蛋白。【关键词】TIP-4基因克隆基因表达免疫活性Abstrat:bjetive:TextratthegenefTIP-4ithRT-PRethdsandbtainthebiativeratTIP-4fusinprtEinexpressedinE.li.ethds:TtalRNAasextratedfr
2、ardiauslefSDrat.TIP-4geneasbtainedandaplifiedithRT-PRethd.Theislatedfragentassequened,rebinedithplasidpET-28a(+)atERIandHindsitesandtransfredintE.liells.TheexpressinfTIP-4asinduedbyIPTG.TIP-4prteinaspurifiedandrenaturalizedbyN2+-NTA.Theapabilityfinhibitingigratinfstesaraelllineasusedasaeasuretassayitsviability.Results:TheTIP-4geneftherat,hihaslnedandrretlyded,uldbehighlyexpressedintheE.listrain.TheexpressedprdutftheTIP-4auntedfr23.5%fthettalbaterialprtein.TheTIP-4auntedfratleast90%afterN2+-NTApu
3、rifiatin.ThepurifiedTIP-4prteinuldsignifiantlyinhibittheigratinfstesaraellline.nlusin:TIP-4fusinprteinithbiativityanbebtainedprfuselybygenelningandexpressininE.li.Keyrds:TIP-4;genelne;expressin;viabilityassay目前对恶性肿瘤的治疗尚缺乏非常有效的措施,其主要原因在于肿瘤具有侵袭、转移和基因变异等特性,对肿瘤侵袭转移机制方面的研究成为肿瘤治疗的关键。组织基质构造的破坏和肿瘤新生血管的形成是肿瘤生长、转移得以实现的先决条件。基质金属蛋白酶atrixetallprteinase,P为一类蛋白水解酶家族,它能降解多种胶原蛋白、纤维连接蛋白和弹性蛋白等血管基膜和基质构造,为肿瘤的生长、转移创造适宜的环境。金属蛋白酶组织抑制剂tissueinhibitrfatrixetallprteinase,TIP的发现是肿瘤研究上的一大打破,它是P的天然抑制剂,目前根据发现的时间顺序分别称为TIP14。国内
4、外对于TIP-4的功能已经有了一些研究,但结果有所差异。Jiang等1的研究发现,TIP-4可以抑制乳腺癌细胞的凋亡,而更多的实验说明TIP-4为肿瘤生长的抑制因素2,3。为进一步开展对TIP-4在骨肉瘤和软骨肉瘤方面的作用及其机制的研究,以及对其在其他领域的功能,本实验采用分子生物学的基因克垄表达和纯化等手段,力求获取具有生物活性的TIP-4交融蛋白,为以后的研究打下基矗1资料和方法1.1材料1.1.1组织来源:成熟SD大鼠由第二军医大学实验动物中心提供。1.1.2菌种、质粒和细胞:大肠杆菌TG1、BL21(DE3)、pBluesriptSK(+)质粒、表达质粒pET-28a(+)均由第二军医大学神经生物学教研室提供。骨肉瘤细胞株购自中国科学院上海细胞生化研究所。1.1.3试剂:RNA抽提试剂盒为上海化舜生物工程产品。RT-PR试剂盒为Qiagen公司产品。PyrbestDNA聚合酶为Takara公司产品。限制性核酸内切酶、T4DNA连接酶为BI公司产品。质粒抽提和胶回收试剂盒为Vigene公司产品。异丙基-D-硫代半乳糖苷酶IPTG为上海生工公司产品。Ni2+-NTA柱为Siga公
《TIMP4基因的克隆、原核表达及活性测定》由会员卢****6分享,可在线阅读,更多相关《TIMP4基因的克隆、原核表达及活性测定》请在金锄头文库上搜索。
部编道德与法治四年级上册:【全册】教案教学设计(38页)
天地人优秀获奖教案8篇
市政工程量清单案例教程
唐文化史 对外文化交流编(四)
欧钻珠宝在中国发展战略
从角落到头版:19852022人民日报艾滋报道的框架研究
持续质量改进在病区药品管理中的应用
护理干预对腰椎管狭窄症手术后腹胀的影响
健脾益气、养阴清热法辅治2型糖尿病
F90对胶质母细胞瘤细胞的作用及机制研究
64例原发性胆囊癌中PTEN和cerbB2基因表达
会计电算化和企业管理电算化(1)
持续提高医疗质量 切实保障病人安全
护理干预对临产未婚产妇焦虑的影响
TIMP4基因的克隆、原核表达及活性测定
RPHPLC测定肿瘤Ⅰ号胶囊中芦荟大黄素、大黄素与大黄酚的含量
壳聚糖生产废液的化处理
加味真武汤对充血性心力衰竭患者NTpro BNP的影响
基于人岗匹配的人力优化配置模型研究
中学生高效作文的建议
2023-01-07 23页
2024-02-12 13页
2023-10-09 25页
2023-02-14 9页
2023-08-13 10页
2023-06-05 9页
2022-11-03 41页
2023-03-07 27页
2023-06-13 36页
2023-01-13 18页