64例原发性胆囊癌中PTEN和cerbB2基因表达

1、64例原发性胆囊癌中PTEN和c-erbB-2基因表达摘要】目的研究pten和-erbb-2基因在原发性胆囊癌pg中的表达及其意义。方法应用原位杂交dna-rna技术与免疫组化sp法分别检测64例pg中ptenrna、pten蛋白和-erbb-2蛋白的表达。以22例胆囊腺瘤及10例慢性胆囊炎作为对照。结果ptenrna和蛋白在pg组织中的阳性表达率(56.3%，59.4%)均明显低于胆囊腺瘤组织81.8%，90.8%和慢性胆囊炎组织(100%，100%)(p0.05)。-erbb-2蛋白在pg组织中的阳性表达率(46.8%)均明显高于胆囊腺瘤组织(9.1%)和慢性胆囊炎组织(0)p0.05。结论pten低表达和-erbb-2高表达共同参与了pg的发生开展，其蛋白可作为判断pg预后的指标。【关键词】胆囊肿瘤expressinfptenand-erbb-2in64asesithpriarygallbladderarinahuangying1,anhui-bin2,zhenghang-li31.thepriarydepartentfedialinhangdevaatinaltehnialll

2、ege,hangde415000,hina;2.thehspitalfensprisninhang-bei,nanhang330038,hina;3.thepathlgydepartentinxiangyahspitalfentre-suthuniversity,hangsha410000,hina)abstrat:purpsetstudytheexpressinfptenand-erbb-2inpriarygallbladderarina(pg)anditssignifiane.ethdstheexpressinfptenrna,ptenprteinand-erbb-2prteineredetetedbyinsituhybridizatin(dna-rna)andiunheistry(spethd)in64asesithpg,22asesithgallbladderadenaand10asesithhrnihleystitisasntrls.resultsthepsitiveexpressinratesfptenrnaandptenprteininpg(56.3%,59.4%)ere

3、signifiantlylerthanthseingallbladderadena(81.8%,90.8%)andhrnihleystitis(100%,100%)(p0.05.thepsitiveexpressinratef-erbb-2prteininpg(46.8%)assignifiantlyhigherthanthatingallbladderadena(9.1%)andhrnihleystitis(0)(p0.05.nlusinlexpressinfptenandhighexpressinf-erbb-2bthplayaniprtantrleinngenesisfpg.theyaybeusesasarkersfrprgnsisevaluatin.keyrds:gallbladderneplas；-erbb-2；pten；iunheistry；insituhybridizatin近年来,与原发性胆囊癌priarygallbladderarina，pg发生有关的癌基因、抑癌基因不断被发现1。抑癌基因-10号染色体上缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因phsphataseandten

4、sinhlgydeletednhrseten，pten，于1997年由li等2发现。目前研究发现pten蛋白主要有以下功能：pten促进细胞阻滞在g1期3，pten诱导细胞凋亡4，pten抑制细胞的迁移与黏附5。假设pten发生突变或缺失,那么失去抑癌作用，且在恶性肿瘤中有低程度表达。突变的-erbb-2与多种肿瘤的发生开展亲密相关。本文有关胆囊癌中pten基因与-erbb-2基因的研究，旨在讨论pten基因和-erbb-2基因与pg发生开展的关系。1材料与方法11研究对象64例原发性胆囊癌、22例胆囊腺瘤及10例慢性胆囊炎组织均为1996年2022年中南大学湘雅医院附一院外科手术切除标本，均有完好的临床及病理资料，所有标本经10%fralin固定，石蜡包埋，5连续切片，病理诊断分别为原发性胆囊癌pg、胆囊腺瘤及慢性胆囊炎。64例原发性pg根据nevin标准6病理分级：其中s级28例级10例，级18例，s级36例级14例，级22例；远处转移36例，淋巴结转移34例；男性24例，女性40例。2949岁14例，5059岁24例，60岁26例，平均年龄552981岁。12主要试剂免疫组化试剂

5、：兔抗pten及兔抗-erbb-2单克隆抗体为福州迈新生物技术，sp试剂盒通用型为福州迈新生物技术。原位杂交试剂：pten原位杂交试剂盒为武汉博士德生物工程产品。13方法13.1免疫组化sp法甲醇阻断，微波处理进展抗原修复，滴加一抗，4孵育过夜，滴加二抗，孵育，滴加streptavidin-peraxidase，溶液显色，苏木素复染，镜下观察。阴性对照：用pbs缓冲液分别代替pten、-erbb-2一抗或二抗，其它步骤同实验组。阳性对照：pten、-erbb-2用抗pten抗体、抗-erbb-2抗体阳性的乳腺癌组织作为阳性对照。13.2原位杂交dna-rna方法甲醇阻断，胃蛋白酶消化，双蒸水洗，加预杂交液，402h，加杂交液，40，过夜，梯度ss液洗，加生物素化鼠抗地高辛，滴加sab，加生物素化过氧化物酶，dab溶液显色，苏木素复染，镜下观察。阴性对照：用不含探针的预杂交液替代含pten寡核苷酸探针杂交液，其他步骤同实验组。阳性对照：用ptenrna阳性的乳腺癌组织作为阳性对照。133结果判断标准ptenrna和pten蛋白表达均以细胞质内出现棕黄色颗粒为阳性，-erbb-2蛋白以胞膜

6、或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性，并参照fritz等7提出的方法，稍加改良作半定量分析：每张切片随机观察5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，各视野中阳性细胞数的平均百分数作为该切片的阳性细胞百分比进展计分。5%计为0分；5%25%计为1分；26%50%计为2分；51%75%计为3分；75%计为4分。染色强度以多数阳性细胞呈现的染色特征为标准计分。细胞未着色为0分，染色呈淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。最后以阳性细胞的百分比和染色强度计分之和所得的总分进展结果断定。01分为阴性-，23分为弱阳性+，45分为中度阳性+，67分为强阳性+。1.4统计学分析采用2检验，以p0.05确定差异有显著意义。数据用spss统计软件包进展处理。2结果21pten蛋白表达pten蛋白阳性信号呈棕黄色、棕褐色，以胞质型为主，少数核阳性。pg组织中阳性细胞呈片状分布，呈弱阳性全浆型、膜下型表达图1，阳性率59.4%38/64；慢性胆囊炎组织中pten蛋白呈弥漫性强阳性全浆型表达，阳性率100%10/10，而胆囊腺瘤组织呈阳性全浆型表达，阳性率90.820/22。表1所示，pg组织中pten蛋白阳性表达

7、率明显低于腺瘤组织和炎症组织p0.05。22ptenrna表达ptenrna表达形式和表达强度均与pten蛋白相似图2。pg癌组织中ptenrna阳性率为56.3%36/64，胆囊腺瘤组织中阳性率为81.8%18/22，后者显著高于前者p0.05。慢性胆囊炎组织阳性率为100%10/10。23-erbb-2蛋白表达pg中-erbb-2阳性信号主要定位于胞膜和胞浆，呈强阳性表达；胆囊腺瘤中主要定位于胞浆，呈弱阳性表达图3，慢性胆囊炎组织未见着色。64例pg癌组织中-erbb-2蛋白阳性为30例，阳性率为46.8%30/64，22例胆囊腺瘤-erbb-2蛋白阳性2例，阳性率为9.1%2/22，前者显著高于后者p0.05。10例慢性胆囊炎组织中未见阳性表达。3讨论pten是具有磷酸脂酶活性的抑癌基因。其基因序列分析说明，pten第5外显子是其重要的功能域，它编码的序列与酪氨酸磷酸酶催化区的核心基因和双特异性的保守区高度同源，其编码的双特异性磷酸酶可使丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基去磷酸化8。pten的磷酸酶活性是其抑制细胞生长的前提和条件9，该编码区基因的突变可能与肿瘤的发生亲密相关。hang等

8、10发现ptenrna在前列腺癌、乳腺癌、子宫内膜癌等表达下调。li等11发现肿瘤细胞中ptenrna表达程度显著降低。本研究显示pg中ptenrna和pten蛋白的阳性表达率和阳性信号均明显低于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织。本研究结果显示ptenrna和pten蛋白的表达呈现逐渐下调，提示pten基因的突变或/和缺失可能与pg发生开展有关。癌基因-erbb-2又称neu或her-2基因。其构造和功能与表皮生长因子受体egfr有高度的相似性。通过-erbb-2基因对一系列激活因子的应答，细胞和组织生长、分化得到一定的调节。在体内外某些致癌因子作用下，-erbb-2基因被激活，主要表现为基因扩增及其蛋白产物的过度表达。突变后的-erbb-2蛋白，在细胞膜上以凝聚形式存在，增加与细胞转化有关的酪氨酸激酶活性，刺激细胞生长，促进癌瘤的发生。kael等12研究结果提示-erbb-2基因扩增和蛋白产物高表达是胆囊癌晚期表现，与肿瘤的浸润有关。h等13报道胆囊癌中-erbb-2过度表达率达63.6%。本组64例胆囊癌中-erbb-2蛋白阳性率为46.8%，胆囊腺瘤组织中阳性率仅为9.1%，慢性胆囊炎组

9、织中那么均为阴性，提示原癌基因-erbb-2的扩增参与胆囊癌发生过程。故-erbb-2蛋白过度表达对判断预后有重要的临床意义。【参考文献】1吴辉,陈训如.胆囊癌相关基因研究进展j.肿瘤,1999,86:286-289.2lij,yen,liad,etal.pten,aputativepteintyrsinephsphatasegeneutatedinhuanbrain,breast,andprstateanerj.siene,1997,2755308:1943-1947.3ur,lix,shntha1ah.transriptinalativatinfp21af1bypten/a1tursuppressrj.lellbihe,2002,2031-2:59-71.4arsnjp,kulikg,eberj.antiappttisignalinginprstateanerells:asurvivalsignalingpathay,independentfphsphatidylinsitl3-kinaseandakt/prteinkinasebj.anerres,1999,59(7):1449-1453.5杨海伟,霍霞,徐锡金.pten基因和肿瘤j.国外医学生理病理科学与临床分册,2001,212:117-119.6吴阶平,裘法祖.黄家驷外科学.第6版.北京:人民卫生出版社,1991.78-79.

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