软琼脂克隆形成实验.ppt

软琼脂克隆形成实验 （Soft Agar Assay）,软琼脂克隆形成实验,一、实验原理 某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆能力反映其恶性增殖程度，这种方法可用于细胞分化的基础研究和临床肿瘤治疗检验等方面 让细胞处于不贴壁以及单细胞状态，模拟体内细胞处于半固液的情况，在此情况下检测细胞的增殖能力单细胞处于软琼脂中，就如同胰酶消化后的状态，此后，细胞继续增殖分裂，形成单克隆 软琼脂培养法常用来检测肿瘤细胞和转化细胞的增殖能力 克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强软琼脂克隆形成实验,二、实验方法 配制1.2%和0.7%的琼脂糖，高压灭菌后置于55℃的水浴锅中，目的是为了使其保持融化状态 配制含20%FBS、2X双抗PS的2X1640培养基，用0.2微米的滤器过滤除菌 铺下层胶：1.2%的琼脂糖胶与2X培养基1:1混合，加入到6孔板中，每孔1.5mL,室温等其凝固 细胞计数：将细胞用PBS的洗一遍，用胰酶消化终止后离心，加入新的培养基混匀稀释，调整细胞浓度为5X104/mL,每孔加入100uL的细胞悬液。

软琼脂克隆形成实验,铺上层胶：0.7%的琼脂糖胶与2X培养基1:1混合，加入100uL的细胞悬液，即5000个细胞，混合均匀后，每孔加入1.5mL 放入37℃，CO2培养箱培养，隔三天后补加培养基，约3周后收细胞计数比较对照组与实验组的细胞数量，最后进行分析，计算单克隆形成率软琼脂克隆形成实验,三、注意事项 软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系 试验中琼脂与细胞相混时，琼脂温度不宜超过40℃ 接种细胞的密度每平方厘米不超过35个，一般6cm的平皿接种1000个细胞 软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞，某些细胞（如正常成纤维细胞）在悬浮状态下不能增殖，不适用此种方法THANKS,。