塞来昔布对胰腺癌的放疗增敏作用及其机制研究_徐刚.pdf

中华消化指志20 06年 1 1月第26卷第 1 1期 eh ln J l ) 19 , No v embe r , 20 06 , v ol . 26 , No . 1 1 丁匕不犷 塞来昔布对胰腺癌的放疗增敏作用及其 机制研究 徐刚 王兴鹏 赵国旗吴 恺赵藉 I摘 要】目的 研究环 氧合酶 一 2选 择 性抑制剂塞来 昔 布 联合放射 治疗 对 胰 腺 癌 的作 用 , 并探 讨其 作用机制 方法克隆 形 成 实验和裸 鼠 移 植 瘤 模型观察塞来 昔 布 、 放疗和两者 联合对 胰腺 癌细胞 Sw19 9 ( ) 体 内外 增殖的 影响 we s te m印 迹 法 检 测 细胞增殖相关蛋 白表达 原 位 缺 口末端 标记 法 (TUNE I)研究 胰 腺 癌细胞凋亡 R T 一P c R 检测 凋 亡相 关 基因表达的变化 体外血 管生成和体外侵袭 力 测定 方社 、 检测塞来昔布 、 放疗及 两 者 联 合 对胰 腺 癌细胞 新生 血管生成和细胞侵袭力的影 响 , RT 一P C R 、 明 胶 酶谱和反 式 酶谱方 法 检测基质金属蛋 白酶(MM) P 一2 、 M MP 一9 及其组织抑 制剂( T IM) P 一 1 、 T IMP 一2 的 表达 。

结果 塞来昔布在体内 外均 有 放射增 敏作用 胰腺 癌细胞增 殖 细 胞 核抗原(PC N A )蛋白表 达 水 平 在 塞来昔 布组和联 合 放 疗 组 均降低 , 联合组较塞 来 昔 布组有 进一步降低塞 来 昔 布诱导胰 腺 癌 细胞 凋亡 , 单独放疗并 不 能诱导 SW1 99 0 细胞发 生 凋亡 , 两者 联 合凋亡细胞数明 显增 加 塞 来 昔布下 调 b c l 一2 mR习A表达 , 而放疗诱导b c l 一2 mR NA表 达上调 , 联 合组b c l 一2 的表达最 低 单剂 量 放 疗时 , 裸鼠胰 腺 癌移植 瘤的生长 延迟时间为2 2 d , 联合塞来昔布为 38d 单独放疗并不能 抑 制体外胰腺 癌 细 胞 的新生 血管生 成和侵袭 , 塞 来昔布 在体外 抑 制胰腺 癌 新生血 管形成和侵袭 , 塞来 昔 布 与放疗 联合其抑 制 作用较 单用 塞来昔 布无明显增强 塞来昔布抑 制胰 腺 癌细胞 合成 、 分泌 和激活MMP 一2 、 MM P 一9, 但对I TM P - 1 、 TIM卜2的合 成 、 分 泌和激活无明显影 响 结论 C ( ) X 一2 选择 性抑制剂 塞来 昔 布对胰 腺 癌 放疗有 增 敏作用 . 其机制 涉及诱导细胞凋亡 , 并 通 过 抑 制 胰 腺 癌 细 胞新生血管生成和细 胞侵袭 , 间接对 胰 腺 癌 的 放疗起增敏作用 。

【 关键词 】环 氧合酶 一2; 胰 腺 癌 ; 放疗 增敏作用 ; 细胞凋亡 ; 新生血 管 形成 ; 细胞侵袭 R ad i韶ensitizin g ef f eetofc ele eo xi bon h u m an P an ere atiec areino m a X UG ang ’ , WANG Xi儿g 一Pe n g , Z月Ao( ;u o一g￡, ta z .` D e户a;tme nz f 阮 szro e nte r ozo g夕 , s人a ng人 1Fir sz 尸e o户z `、 月 、Pizaz , J :aoto n g U元iv e r、;z夕, Sha ng hai200080 , Chi ,`a C orre、 户 `,,d ing author : W改 、9 Xing 一 P e 、g , E m azl: 一之 一 Pw `n@ P ub li〔 7 . sta . , ,ez . n [ A一 ,、tra etl o b j e etive T o in v e stlgatethesen、itizingef fe etsandthe m e ehanismso f s ele etive eyelooxv拜ena s e一2 ( C OX 一2 ) inhibit ore e le e oxi论)onr adiothc r a p y o f Pa n ere atiee ane er . M ethods R adios en - sitizatio:o f e e l e eoxib inpa ne r o atieeane ere e llSW19 9 oi nvivoan din v it ro w e r e in v e stigated by eo l o ny f orming Ls s a y an d xenogr a ft tu m or m ode l . Exp r e s sl onsof p ro lif er atinge e l l nu e le a r antigen (P C NA) a n d Cy e lin l)1w e r ea s s e s s ed byW e ste r n Blot . Effe et o na p optos i、w a sstudied by f UN E L . E xpre s siono f b el一2ar ol ba x w asa s s ayed by R T 一 P C R . Expr e s sionands eeretiono f m atrix m eta l lop roteina s e s (M MPs) an d tis s日。

inhibitor s o fm eta llop r oteina ses (T IMP s )w ereasse s s e dby RT 一P C R an d zy m ogr a phy . Re s ults C e le 〔)x ib en h ane ed the e f f e eto f r adiothe rapyo n p ane re atiee ane erInvitroand in v iv o . TUNE L d e m onstratedas ignifie a nt in ere a seo f a p optotlee e lls in vitroa ft e r tre atme ntw ith e e l e eoxiba lo neoreo m - bin e dw :thr a dia tion , but noehan g ea ft erra di ation . E xl) re s s io no f bel 一 2 w a s d e e r e a s e d by e ele eoxib;rad i- ation in ol以 e edtheexpr e ssl ono f b el一2;eo mbi natl ono f e e l eeoxiban d ra dia tlon sign ifie a ntlys u P Pr e s s e d th。

ex Pr es s 一〔no fb e l 一 2 . In vitro , angiogenes i、 ande e ll I n va sio n p otentia l o fp anereatieeane e re e l ls w e r e in - hibit e dI ve e le e o xlb , an d e e le e o x ib eo m b一n ed with r adl atl o n , b ut with outs一gnifie ante ha n g e in r a dia tion g ro u P ern Pa r ed w ith the eontro lg roup . E xpr e s sio iran d 、e e retiono fM MP 一 2 an dMMP 一9 w ereelos e ly 作者唯位 : 2 七海交通大学附属第一人民医院消化科(徐刚 、 王兴鹏 、 吴恺)肿瘤科(赵国旗) 通讯作者 : 王兴鹏 , E m a il :x pw en @ p u bli e7 · Sta · ,l et · cn 中华消化杂志20 06年 11月第2 6卷第1 1期ChinJD ig , No v em be r , 20 06 , V ol . 26 , N o . 1 1 re la tedtthe e ha n g e s in an giog e ne sisan d ee l li nvasion p otentia l , while the ex P re s sionso fT IMP 一1 an dT IMI ’ 一2 did nota lt e rsignifieantly in a l lg r oups . C on elusions Th ese l e etiveeye lo ox yg ena s e Z inhibito re l eeoxi b p otentlyen h ane es the e f f e eto f radiat io non thetr e atmen t o f p ane re atiee anee r . Ind uetio l . o f apoptosis , inhibitio n o f an giog e ne sisand in vasiona r e in vo lv e di n the m eehanis m o f e e l e - eox ib tro .LI _ m ent . IK ey wod r sl P anereatiee ane er; Cy e lo o xygenas e 一2; Ap o pto sis; R a di os ensitiz atio n; A n giog ene sis; C e lli nva、l) n 既刹的实 验研究揭 示 , 环 氧 合 酶 一2 (( C) X 一 2 )在 人胰腺癌组织和细胞 中 均有高表 达 , 且表 达强度 与 胰 腺癌的临 床分 期 密切 相关川 。

进一步的研 究 表 明 , C OXZ 参 与 胰 腺 癌 细 胞 分 化和新生血 管生 成川 ( ’ Ox 一 2选择 性 抑 制 剂 不 仅 能 抑制胰 腺 癌细 胞生长 , 还能增 强吉 西 他 滨对 胰 腺 癌细胞的杀 伤 作 用川 本研究进 一 步 探讨塞来 昔 布在体内外 对 胰 腺 癌 的放疗 增敏作用及其可能 机制 材 料与方法 1 . 咦腺 癌 荷 瘤裸鼠模 型 : 收 集 SW199o 细 胞 (购 自美国组织 培养库) , ZX 1 0 “ /只接种于裸 小 鼠 (购自上海肿瘤研究所)背部 靠近后肢部 位 皮下 , 当 肿瘤生长至 平均 直径 ) 6m m 时 , 分为空白对照组 ( n = 10 ) 、 塞来 昔布绷 n ~ 10) 、 放疗组( n = 10) 和 联合组 ( ,, 一 1 2) 塞来 昔布(购 自美国辉 瑞公司)采 用灌胃给药 , 剂量为 20 0 m g · kg一 ` · d一` , 共1 0 d , 对照组和放疗组 予 灭 菌 蒸 馏 水 当肿瘤 直 径 达到 8m m 时 . 联 合组和放疗组 室 温 下 “ 放 射 源单次 10Gy 照射局 部肿瘤 。

每 周 2 次游 标 卡尺测量 肿瘤 结节直径 , 肿瘤 直 径 达1 6 m m时 , 处死 动 物 按 公 式计算肿瘤 生长 延 迟 、 校正的肿瘤生长延 迟和增 敏 系数川 2 . 集落形 成试验检测 细胞 增殖 : 细 胞 接种 贴壁 后 , 加 人含5 0 拼mo l /L塞 来昔布 或无药 物的培 养 基 , 继续 37℃培养 箱 中培养 2 4 、 4 8 和7 2。