抗体保存.doc

抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃如储存的抗体中蛋白浓度很低（10-100Mg/L），就应另加隔离蛋白以减少容器对抗体蛋白的吸附，隔离蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白 绝大多数已稀释的抗体应存在4℃-8℃条件下，以免冻融对抗体蛋白产生有害效应抗体原液和已分离的免疫球蛋白组分应保存于-20℃条件下，并避免反复冻融冷冻的抗体溶液应置于室温中缓慢地解冻，应绝对避免用高温快速解冻被细菌污染的抗体常会出现假阳性结果，应将污染的抗体溶液及其他试剂弃之为防止细菌污染，可于抗体溶液中加入0.01%叠氮钠抗体经真空冷冻干燥后置-20℃以下可保存3-5年 保存稀释后的单抗应加入0.1%叠氮钠浓度大多数稀释抗体可进行冷冻保存，少数抗体可能会丢失抗原活性大多数单抗，只要蛋白浓度适当，可在4℃下保存数月其他注意事项：分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性 分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10ul每份因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响 复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4oC，避免再冻起来！ 抗体工作液应该当天配制当天用完，在4oC 尽量不要超过1天。

绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上无论是保存还是运输，绝对避免反复冻融！ 反复冻融会导致抗体变性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力！蛋白在高浓度时更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），这就是为什么在抗体中加入BSA之类作为稳定剂的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物为了防止微生物污染，叠氮化钠经常被加入到抗体中（终浓度0.02% (w/v)） 叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联，因此在进行偶联之前，应将叠氮化钠去除偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存，但是浓度只能是0.01％对于需要偶联的抗体，thimerosal (merthiolate)可以替代叠氮化钠作为保护剂！注：叠氮化钠的去除方式： 可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除！IgG的分子量是150kDa (IgM 是~ 600kDa); 叠氮化钠的分子量只有65Da使用cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除纯化IgG: 不要保存稀释的抗体,高浓度有利于保存。

IgG会粘附于玻璃或塑料，低于0.1mg/ml的蛋白会很快被吸收并变性失去活性1. 收到抗体后请务必在12000rpm离心1分钟后再打开管盖进行分装和保存(如果抗体体积小于50ul，请延长离心时间至5分钟，以保证全部抗体均离心下来）！ Abcam的抗体使用非常特殊的储存管，只有在12000rpm离心1分钟才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来即使是在10000rpm离心也会导致离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象！2. 对于Abcam大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在 -20oC or -80oC 对绝大多数抗体来说，保存在-20oC是完全足够了没有任何证据显示保存在-80oC 会有更多的好处！ 分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性 分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10ul每份因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响 复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4oC，避免再冻起来！ 抗体工作液应该当天配制当天用完，在4oC 尽量不要超过1天 绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。

尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上 3. 大部分抗体收到后4oC短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的如果抗体很快（1-2周）会使用，推荐在4oC保存，这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害如果要长期保存则最好是在-20oC or -80oC最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体！但是，腹水形式的产品请在收到后立即冻起来！因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在4oC保存会导致抗体的降解！大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1-2周的时间，所以是在4oC的条件下来完成的4oC运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻这就多了一次冻融的过程）所以运输过程中绝对避免干冰运输！特殊抗体的保存条件： 酶联抗体：永远保存在4oC，避免冻起来否则会导致酶活性的下降或者丧失 偶联抗体：所有偶联抗体都需要在棕色管中或使用锡箔纸避光4oC保存尤其是荧光抗体，对光极为敏感，因此在所有的实验阶段也是要避光操作的！ IgG3的同型对照：永远保存在4oC，避免冻起来因为如果出现冻融过程，该抗体非常容易形成多聚体 无论是保存还是运输，绝对避免反复冻融！ 反复冻融会导致抗体变性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力！抗体保存其它相关信息： 关于加入甘油保存： 有些人会加50%的甘油到抗体中来避免反复冻融，甘油在-20oC 会降低冰点。

这对很多抗体可能是可行的但是abcam仅对非常小的一部分抗体检测过其在这种条件下的稳定性；而Abcam只对按照推荐条件保存的抗体提供质量保证！加入甘油的溶液不建议在-80oC保存，因为这已经超过了甘油的冰点如果您要加入甘油来保存抗体的话，请谨慎注意无菌操作，避免污染！关于蛋白保护剂： 蛋白在高浓度时更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），这就是为什么在抗体中加入BSA之类作为稳定剂的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物关于叠氮化钠（sodium azide）的使用： 为了防止微生物污染，叠氮化钠经常被加入到抗体中（终浓度0.02% (w/v)）Abcam的很多抗体已经含有了0.02％-0.05%的叠氮化钠，在说明书的“Storage buffer”中有标明的在下述情况中不能使用叠氮化钠：如果抗体用于染色或处理活细胞，用于体内研究： 叠氮化钠在抵抗微生物的同时，对其它大部分有机物也是有毒的，因为它阻断了线粒体的cytochrome electron transport system.要偶联带有氨基基团的抗体： 叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联，因此在进行偶联之前，应将叠氮化钠去除。

偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存，但是浓度只能是0.01％对于需要偶联的抗体，thimerosal (merthiolate)可以替代叠氮化钠作为保护剂！注：叠氮化钠的去除方式： 可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除！IgG的分子量是150kDa (IgM 是~ 600kDa); 叠氮化钠的分子量只有65Da使用cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除。