沙门氏菌的检测鉴定[特选材料]
34页1、沙门氏菌的检测及鉴定,杨淑霞,1,优选内容,设备和材料,除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下: 2.1 冰箱:2 5 。 2.2 恒温培养箱:36 1 ,42 1 。 2.3 均质器。 2.4 振荡器。 2.5 电子天平:感量0.1 g。 2.6 无菌锥形瓶:容量500 mL,250 mL。 2.7 无菌吸管:1 mL(具0.01 mL刻度)、10 mL(具0.1 mL刻度)或微量移液器及吸头。 2.8 无菌培养皿:直径90 mm。 2.9 无菌试管:3 mm50 mm、10 mm75 mm。 2.10 无菌毛细管。 2.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.12 全自动微生物生化鉴定系统。,2,优选内容,3 培养基和试剂,3.1 缓冲蛋白胨水(BPW)。 3.2 四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液。 3.3 亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液。 3.4 亚硫酸铋(BS)琼脂。 3.5 HE琼脂:见附录A中A.5。 3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂。 3.7 沙门氏菌属显色培养基。 3.8 三糖铁(TSI)琼脂。 3.9 蛋白胨水、靛基质试剂。 3.10 尿素琼
2、脂(pH 7.2)。 3.11 氰化钾 (KCN) 培养基。 3.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基。 3.13 糖发酵管。 3.14 邻硝基酚-D半乳糖苷(ONPG)培养基。 3.15 半固体琼脂。 3.16 丙二酸钠培养基。 3.17 沙门氏菌O和H诊断血清。 3.18 生化鉴定试剂盒。,3,优选内容,A.1 缓冲蛋白胨水(BPW) A.1.1成分 蛋白胨10.0 g 氯化钠5.0 g 磷酸氢二钠(含12个结晶水)9.0 g 磷酸二氢钾1.5 g 蒸馏水1 000 mL pH 7.20.2 A.1.2 制法 将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约10 min,煮沸溶解,调节pH,高压灭菌121 ,15 min。,4,优选内容,A.2 四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液 A.2.1基础液 蛋白胨10.0 g、牛肉膏5.0 g、氯化钠3.0 g、碳酸钙45.0 g、蒸馏水1 000 mL、pH 7.00.2 除碳酸钙外,将各成分加入蒸馏水中,煮沸溶解,再加入碳酸钙,调节pH,高压灭菌121 ,20 min。 A.2.2硫代硫酸钠溶液 硫代硫酸钠(含5个结晶水)50.0 g,馏水 加至100 mL
3、,高压灭菌121 ,20 min。 A.2.3碘溶液 碘 片20.0 g、碘化钾25.0 g、蒸馏水 加至100 mL,将碘化钾充分溶解于少量的蒸馏水中,再投入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解为止,然后加蒸馏水至规定的总量,贮存于棕色瓶内,塞紧瓶盖备用。 A.2.4 0.5煌绿水溶液 煌绿0.5 g、蒸馏水100 mL 溶解后,存放暗处,不少于1d,使其自然灭菌。 A.2.5牛胆盐溶液 牛胆盐10.0 g,蒸馏水100 mL加热煮沸至完全溶解,高压灭菌121 ,20 min。 A.2.6 制法 基础液900 mL、硫代硫酸钠溶液100 mL、碘溶液20.0 mL、煌绿水溶液2.0 mL 牛胆盐溶液50.0 mL 临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分。,5,优选内容,A.3 亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液 A.3.1成分 蛋白胨5.0 g 乳糖4.0 g 磷酸氢二钠10.0 g 亚硒酸氢钠4.0 g L-胱氨酸0.01 g 蒸馏水1 000 mL pH 7.00.2 A.3.2 制法 除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外,将各成分加入蒸馏水中,煮沸溶
4、解,冷至55 以下,以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1 g/L L-胱氨酸溶液10 mL(称取0.1 g L-胱氨酸,加1 mol/L氢氧化钠溶液15 mL,使溶解,再加无菌蒸馏水至100 mL即成,如为DL-胱氨酸,用量应加倍)。摇匀,调节pH。,6,优选内容,A.4 亚硫酸铋(BS)琼脂 A.4.1成分 蛋白胨10.0 g 牛肉膏5.0 g 葡萄糖5.0 g 硫酸亚铁0.3 g 磷酸氢二钠4.0 g 煌 绿0.025 g或5.0gL水溶液5.0mL 柠檬酸铋铵2.0 g 亚硫酸钠6.0 g 琼 脂18.0 g20 g 蒸馏水1 000 mL pH 7.50.2 A.4.2 制法 将前三种成分加入300 mL蒸馏水(制作基础液),硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 mL和30 mL蒸馏水中,柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20 mL和30 mL蒸馏水中,琼脂加入600 mL蒸馏水中。然后分别搅拌均匀,煮沸溶解。冷至80 左右时,先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀,倒入基础液中,混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀,倒入基础液中,再混匀。调节pH,随即倾入琼脂液中,混合均匀,冷至50 55 。加入煌绿溶
5、液,充分混匀后立即倾注平皿。,注:本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性,贮于室温暗处,超过48 h会降低其选择性,本培养基宜于当天制备,第二天使用。,7,优选内容,注:本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性,贮于室温暗处,超过48 h会降低其选择性,本培养基宜于当天制备,第二天使用。,A.5 HE 琼脂(Hektoen Enteric Agar) A.5.1成分 蛋白胨 12.0 g 牛肉膏3.0 g 乳糖12.0 g 蔗糖12.0 g 水杨素 2 .0 g 胆盐20.0 g 氯化钠5.0 g 琼脂18.0 g20.0 g 蒸馏水1 000 mL 0.4溴麝香草酚蓝溶液16.0 mL Andrade指示剂20.0 mL 甲液20.0 mL 乙液20.0 mL pH 7.50.2,8,优选内容,A.5.2 制法 将前面七种成分溶解于400 mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600 mL蒸馏水内。然后分别搅拌均匀,煮沸溶解。加入甲液和乙液于基础液内,调节pH。再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50 55 倾注平皿。 注:本培养基
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