内毒素LAL检测使用说明(中文版).docx

Page1前协议定量检测协议ToxinSensor?显色LAL内毒素检测试剂盒执行所有的测试步骤，在室温下操作前请使用认证的内毒素免费产品样品制备所有材料或稀释剂用于标本收集和准备，测试试剂必须无内毒素在任何时候都使用无菌技术待测样品必须存储在所有细菌活动受阻的方式中例如，样品之前使用，24小时内可以存储在2.8°C,但长期使用需要冻结PH溶解或稀释试样用LAL试剂水由于LAL内毒素反应是依赖ph的，故样品的pH值应为6-8，确保良好的线性度因此，如有需要，我们推荐使用氢氧化钠（0.1N，溶解在LAL试剂水中）或盐酸（0.1N，LAL试剂水稀释）调pH值I.试剂制备、邕试剂溶解物（LAL）再造冻干裂解液加1.7毫升LAL试剂水轻轻打旋每个组成30秒，避免起泡再造裂解液如果存储在.20°C,可以保持稳定一周，不推荐tonger存储避免反复冻融Page2继续ToxinSensor?显色LAL内毒素检测试剂盒显色底物重建衬底加入1.7毫升LAL试剂水浓度至62mM一旦重建，底物溶液存储在2-8可以保持稳定一个月防止底物溶液长时间直接接触光终止液重组颜色稳定剂#1（终止液）用10毫升的缓冲液重组终止液如果存储在2-8°c可以保持稳定一周。

重组颜色稳定剂#2和#3:每个添加10mlLAL水每个重组液在2-8°下可以保持稳定一周标准内毒素的溶液此试剂盒中提供的冻干的内毒素标准量应参考内毒素标准液瓶上的标签加2ml的LAL试剂水溶解冻干的内毒素涡漩充分混匀15分钟以获得内毒素贮备液重组后的内毒素贮备液若存储在2-8℃可保持稳定一周请不要冻结内毒素贮备液Page3II试剂制备,继续准备1EU/ml内毒素溶液，使标准系列稀释在每个实验中，至少四个覆盖所需浓度范围的内毒素标准溶液以备生成的标准曲线即如果试验样品的内毒素浓度预计范围内在0.01・01EU/ml,系列内毒素标准溶液可分别是、0.05、0.025和0.01EU/mL下图概述了示例系列内毒素标准溶液的制备每份溶液应该彻底的30秒内涡流混合0.3毫升0.2毫升1试齐］BB8B0.1EU/ml0力5EU/ml0.025EU/ml0.01EU/mt最后内毒素浓度三测试程序1小心地分配100pl标准品、样品和LAL水到不同无内毒素viais上并标记它们作为标准1,2，3，4，样品1.2等和空白组样品应用旋涡混合器彻底混合30秒避免起泡Page4三测试程序，继续的2 .添加100pl重组LAL到每个瓶子。

通过打旋盖住Qsntlywals和tnixwsli3 .如果样品的预期的内毒素浓度范围为EU/ml，水浴或加热封闭至T1，在37℃±"C下，孵育架子上所有瓶如果内毒素浓度范围内的EU/ml，使用水浴或加热封闭至T2，在370c士℃孵化注：T1范围从40到60分钟和T2范围从8至16分钟「和T2的最优值应该参考瓶上的标签4 .经过适当的孵化，添加100pt的重组底物显色液到每个小瓶通过漩涡轻轻混匀不要动摇或反转涡以避免起泡，然后在37°C±°C，使用水浴或加热封闭，孵育6分钟5 .添加500Pl的重组终止液（颜色稳定剂#1）到每个小瓶和轻轻地漩涡搅拌均匀不要动摇或反转涡以避免起泡然后添加500pl的颜色-稳定剂#2，到每个小瓶,混合均匀最后将500pl重组颜色■稳定剂#3添加到每个小瓶每小瓶轻轻地漩涡混合均匀3秒避免起泡6 .读的每个反应在545nm的吸光度以蒸播水为空白对照，调整光度计到零吸光度Page51协议，继续定量检测协议，继续ToxinSensor?显色LAL内毒素检测试剂盒，继续整个测试过程概述于下表：标准样品标准样品（毫升）1（毫升）LAL试剂水（毫升）LAL（毫升）0.10.1混合贴边和孵化在37℃±.0CT1或T2Tl或T2基板解决方案（毫升）0.10.1混合贴边和孵化在37°C±1.0C（min）6停止解决方案（毫升）0.50.5颜色.稳定齐］#2（ml）0.50.5颜色稳定剂#3（毫升）0.50.5空白0.10.1T1orT20.160.50.50.5混合贴边并读取吸光度在545nm：四。

浓度计算：在标准条件下的，545nm处的吸光度显示与浓度成线性关系，在0.01-0.1EU/ml和0.1-1EU/ml两个范围内绘制x轴上的四个标准及在y轴上相应的内毒素浓度的吸光度点绘制这些点之间的最佳拟合的直线和图形计算样品的内毒素浓度示例使用下面的数据：样品吸光度在545nm&吸光度LAL试剂水（空白）……如果样品的平均吸光度是x，样品的内毒素浓度将为0.2618X-0.0012EU/mt.所有孵化进行45分钟以上的图是只示例曲线，标准的OD值随不同的检测方法而不同注意：稀释标准和孵化温度将是可以影响的吸收值的关键的因素，它是重要的是确保内毒素充分溶解的标准，而且孵化温度须严格保持在37℃±C5 .性能特征线性用于测量内毒素值浓度范围内的标准曲线的线性度必须验证至少4个超过预期的浓度范围的内毒素标准品，应与一个空白组同检测，一式两份标准个体平均吸光度绝对值系数（r）与他们相应的内毒素浓度的标准应该是相关的、Page7产生废品的原因？检测试剂盒，产生废品的原因？复制样品应该用于建立良好的技术和低变异系数变异系数（C.V.）等于100倍的一组数据的标准差除以平均值的标准偏差，以百分比表示。

C.V.吸光度应小于10%6 .疑难解答”可能因为没有线性内毒素标准品没有混匀充分内毒素可能附着于玻璃的表面我们建议用2毫升LAL试剂水溶解冻干的内毒素标准品，如议定书中所述（步骤1中的“测试程序”），及用旋涡混合器混合标准内毒素稀释物15分钟样品的ph值不适合测定调整样品的pH值到6-8，如议定书中所述的阴性空白组显示比标准品图材料（例如提示、瓶等）可能被污染试剂准备在室温下的层流柜（通风橱？）进行戴上一次性手套和使用无内毒素的材料，避免污染。