实验室经常使用缓冲盐配制.docx

实验室经常使用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl ,,组份浓度:1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方式：1 .称量12L1 g Tris置于1 L烧杯中°2 .加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解3 .按下表里加入浓盐酸调剂所需要的pH值PH值浓HC1约 70nd约 60ml约 42ml4 .将溶液定容至1 Lc5 .高温高乐灭菌后，室温保留注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的转变不同专门大，温度每升高 溶液的pH值大约降低个单位2)10XTE Buffer ,,组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方式：1.量取以下溶液，置于1 L烧杯中IM Tris-HCl Buffer 3,)100ml500eM EDTA20ml2,向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合3 .将溶液定容至1 L后,高温高乐灭菌4 .室温保留3)1. 5 M Tris-HCl组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方式：1 .称量18L7 g Tris置于1 L烧杯中°2 .加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3 .用浓盐酸调剂pH值至4 .将溶液定容至1 L5 .高温高压灭菌后，室温保留注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的转变不同专门大，温度每升高1C，溶液的pH值大约降低个胞位4)3 M醋酸钠组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方式：1.称量40.8g NaAc • 3H20置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2,加入冰醋酸调剂pH值至3.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保留5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2. 7 mM KC1, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2P01配制量：1 L配制方式：1.称量以下试剂，置于1 L烧杯中XaCl3gKC10.2gXa2HP011. 12gKH2P010. 27g2,向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解,3 .滴加浓盐酸将pH值调剂至，然后加入去离子水将溶液定容至1 Lo4 .高温庙乐灭菌后，室温保留注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要，可在配方中补充1 mM CaC12和0.5 mM MgC12。

6)10 M醋酸钱 组份浓度：10 M醋酸核配制殳：100 ml配制方式：1.称量77.1 g醋酸核置于100〜200 ml烧杯中，加入约SO ml的去离子水搅拌溶解2,加去离子水将溶液定容至100 mlo3 .利用0.22 mm滤膜过滤除菌4 .密封瓶口于室温保留注意：醋酸钺受热易分解，因此不能府温而乐灭菌7)苯酚/氯仿/异戊醇(25 ： 24 ： 1)配制方式：L说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常利用苯酚/氯仿/异戊醉(25 : 24 : l)o规仿可使蛋白质变性并 有助于液相与有机相的分离，而异戊醇那么有助于排除抽提进程中显现的气泡2.配制方式：将Tris-HCl平稳苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24 ： 1)混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4C 保留8)10% (W/V) SDS组份浓度:10% (W/V)SDS配制量:100ml配制方式：L称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68c加入溶解2.滴加浓盐酸调剂pH值至3,将溶液定容至100ml后，室温保留9) 2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方式：1 .量取SO ml去离子水置于100〜200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解进程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。

2 .称取8 g NaOH警惕地慢慢加入到烧杯中，边加边搅拌3,待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml.4.将溶液转移至塑料容器中后,室温保留10) N HC1组份浓度：N HC1配制殳：100 ml配制方式：1 .在ml的去离子水中加入ml的浓盐酸(N),均匀混合2 .室温保留11) 5 M NaCl组份浓度：5 M NaCl配制量：1 L配制方式：1 .称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解2 .加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份3 .高温高压灭菌后，4C保留11) 20% (W/V) Glucose组份浓度：20% (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方式：1.称取20 g Glucose置于100〜200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解2,加去离子水将溶液定容至100 mlo3.高温高乐灭菌后，4C保留12) Solution I物粒提取用)组份浓度：25 mM Tris-HCl (, 10 mM EDTA, 50 mM Glucose配制量：1 L配制方式：1 .量取以下溶液，置于1 L烧杯中。

IM Tris-HCl ()25ml0. 5M EDTA ()20ml20%Glucose(1. 11M)15mldH20910ml2 .高温高乐灭菌后，4C保留3,利用前每50 ml 的 Solution I 中加入2 ml 的 RNase A (20 mg/ml) c13)Solution H (质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH. 1%(W/V)SDS配制量：500ml配制方式：L型取以下溶液，置于500ml烧杯中10% SDS 50ml2N NaOH 50ml2,加灭菌水定容至500ml,充分混匀3,室温保留，此溶液保留时刻最好不要超过一个月注意：SDS易产动气泡，不要猛烈搅拌14) Solution 111(质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3C00H配制量：500 ml配制方式：1 .称量以下试剂，置于500 nli烧杯中KOAc117gCH3C00H2 .加入300 ml去离子水后搅拌溶解3 .加去离子水将溶液定容至500 mlo4 .高温高乐灭菌后，4C保留15) 0.5 M EDTA组份浓度：0.5 M EDTA配制量：1 L配制方式：称取186.1 g Na2EDTA • 2H20,置于1 L烧杯中、2,加入约800 ml的去离子水,充分搅拌,3,用NaOH倜剂pH值至（约20 g NaOH）。

注意：pH值至时，EDTA才能完全溶解4,加去离子水将溶液定容至1 Lo5 .适量分成小份后，高温高压灭菌6 .室温保留16）1 M DTT组份浓度：1 M DTT配制量：20 ml配制方式：1 .称取3.09 g DTT,加入到60 ml限料离心管内.2 .加20 ml的0.01 M NaOAc （,溶解后利用0.22皿流器过滤除菌•3,适量分成小份后，-20C保留17） 10 mH ATP组份浓度：10 mM ATP配制量:20 ml配制方式：1 .称取121 mg Na2ATP - 3H20,加入到50 ml塑料离心管内2 .加20 ml 的25 mM Tris-HCl （,搅拌溶解3 .适量分成小份后，-20t保留一,经常使用贮液与溶液lmol/L亚精胺（Spermidine）：溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml分装成小份贮存于-20Clniol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精股于足量的水中，使终体积为10ml分装成小份贮存于-20℃10mol/L乙酸胺（ammoniw acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用孔径的漉膜过灌 除菌。

lOmg/ml牛血清蛋白（BSA）加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级,无DNA酹）于水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止不要涡 旋混合°加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20Clniol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加水，分成小份贮存于-20C或转移100mg的二 硫苏糖醇至微量离心管，加的水配制成lmol/L二硫苏糖静溶液,8moi/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100mLImol/L氯化钾（KC1）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml3moi/L乙酸钠（sodium acetate）溶解40.8g的三水乙酸钠于约90nli水中,用冰乙酸调溶液的pH至,再 加水定容到100mLLEDTA：配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（L）,混合后形成EDTA的三钠盐或称取186. 1g的M2EDTA • 2H20 和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1Llmol/L HEPES：将溶于约90ml的水中，用NaOH调pHO,然后用水定容至100mLImol/L HC1：加的浓盐酸至的水中。

25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT （异丙基硫代-B-D-半乳糖甘）于10ml水中，分成小份贮存于-20C lmol/LMgC12：溶解20.3g MgC12 • 6H20于足量的水中，定容到100mllOOmmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中,定容到10ml分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20C20mg/ml蛋白筋K （proteinase K）：将200mg的蛋白酹L加入到水中,轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解不要涡旋混合加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20ClOmg/mlRnase （无 DXase） （DNase -free RNase ）：溶解lOmg 的胰蛋白 RNA 前于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水 溶液中（pH ）o溶解后于水浴中煮沸15min,使aA醉失活用lmol/L的Tris-HC1调pH至,于-20C贮 存配制进程中要戴手套）5moi/L氯化钠（XaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml10、氢氧化钠（MaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶 解后用水定容至1L。

10%SDS （十二烷基硫酸钠）：称取lOOgSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完 全溶解c用水定容至1L2mol/L山梨（糖】醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖】醇于足量水中使终体积为100mL100%三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解稀释 液应在临用前配制）% X-gal （5-溟-4-氯-3FI噪一 B-半乳糖昔）：溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF），用铝箔包爽装液管，贮存于-20ClOOX。