细胞工程主要技术教材
99页1、细胞工程主要技术 2 动物细胞工程动物细胞工程主要主要技术技术 l第一章 动物细胞转化(诱变) l第二章 细胞融合技术 l第三章 哺乳动物克隆技术 l第四章 哺乳动物胚胎培养与移植 l利用杂交瘤制备单克隆抗体技术 l干细胞技术 3 第一章第一章 动动动动物物细细细细胞的胞的转转转转化(化(诱变诱变诱变诱变 ) 通过细胞培养,世界上已建立了大量细胞株,我国业已通过细胞培养,世界上已建立了大量细胞株,我国业已 建立了上百个细胞株,为细胞生物学和医学做出了重大贡献建立了上百个细胞株,为细胞生物学和医学做出了重大贡献 。 正常组织的初级培养物,在传代培养过程中,细胞的寿正常组织的初级培养物,在传代培养过程中,细胞的寿 命有一定的限度,只有命有一定的限度,只有癌细胞癌细胞和和发生转化的细胞发生转化的细胞才能无限增才能无限增 殖下去。殖下去。 所谓所谓转化即是即是指正常细胞在某种因子的作用下发生突变 而成为具有癌特性的细胞。 4 建立无限细胞系的关键建立无限细胞系的关键就是要就是要千方百计千方百计 地使培养细胞发生转化,地使培养细胞发生转化,即用某种因子刺激即用某种因子刺激 正常细胞发生突变而具有
2、癌特性。正常细胞发生突变而具有癌特性。 目前目前,使正常培养细胞发生转化的,使正常培养细胞发生转化的刺激刺激 因子因子主要有主要有三大类三大类:物理因子、化学因子和物理因子、化学因子和 生物因子生物因子。 5 (一)物理因子 能使培养能使培养细细细细胞胞发发发发生生转转转转化的化的物理因子主要是指物理因子主要是指 一些一些电电电电离离辐辐辐辐射:射: 放射性同位素的射放射性同位素的射线线线线:60 60Co Co、14 14C C、 、 131131I I、 、32 32P P、 、 3 3 H H X 射线射线 紫外线照射紫外线照射 物 理 致 癌 剂 6 (二)化学因子 对细对细对细对细 胞具有胞具有转转转转化作用的化作用的化学因子达数千种之化学因子达数千种之 多,其中有无机物,也有有机物。多,其中有无机物,也有有机物。 无机物:砷、石棉、砷、石棉、铬铬铬铬化合物、化合物、镍镍 镍镍化合物、化合物、镉镉镉镉化化 合物合物 有机物:苯、苯、联联联联苯胺、苯胺、杂环烃杂环烃杂环烃杂环烃 、煤焦油、黄曲霉 、煤焦油、黄曲霉 素素(aflatoxin)(aflatoxin)、亚亚亚亚硝胺、
3、烟碱硝胺、烟碱 (nicotine)(nicotine) 化 学 致 癌 剂 7 (三)生物因子 对细对细对细对细 胞具有胞具有转转转转化作用的生物因子化作用的生物因子为为为为肿瘤病肿瘤病 毒毒(tumor (tumor virus)virus),又称,又称致癌病毒致癌病毒(oncogenic (oncogenic virus)virus)。 现现现现已已发现发现发现发现 有有许许许许多种病毒可引起多种病毒可引起动动动动物或植物物或植物 发发发发生生肿肿肿肿瘤。瘤。肿肿肿肿瘤病毒中有瘤病毒中有DNADNA病毒,也有病毒,也有RNARNA 病毒。病毒。 8 Rous肉瘤病毒(Rous (Rous sarcoma sarcoma virus)virus):一种一种 RNARNA病毒,其基因病毒,其基因组组组组含有一个含有一个癌基因癌基因srcsrc,编码编码编码编码 产产产产物物为为为为具有具有蛋白蛋白质质质质激激酶酶活性的活性的pp60pp60src src蛋白 蛋白,可使,可使 许许许许多蛋白多蛋白质质质质磷酸化,通磷酸化,通过级联过级联过级联过级联 反反应应应应,诱发细诱发细诱发细诱
4、发细 胞癌胞癌 变变变变。 pp60pp60src src蛋白 蛋白是一种膜蛋白,是一种膜蛋白,结结结结合在合在质质质质膜的内膜的内 表面,它表面,它可催化磷酸根可催化磷酸根转转转转移到一些蛋白移到一些蛋白质质质质的酪氨的酪氨 酸残基酸残基上,使磷酸上,使磷酸化酪氨酸在化酪氨酸在细细细细胞中的含量提高胞中的含量提高 了了1010倍。倍。 9 (Src(Src蛋白蛋白, Tyr, Tyr激酶激酶) ) P P TyrTyr 蛋白质磷酸化蛋白质磷酸化 细胞癌变 无活性无活性 pp60pp60src src RSV病毒中v-src基因的致癌机制图解 质膜质膜 跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白 细胞外配体细胞外配体 活性活性p pp60p60src src 质膜质膜 跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白 磷酸化酪氨酸两种作用 : 一是使细胞的正常调节 机制失调,细胞增殖失去 控制; 二是使细胞的粘着性丧 失,易发生扩散和转移。 10 虽然虽然动物细胞动物细胞在培养皿、培养瓶、培养板中均可生在培养皿、培养瓶、培养板中均可生 长,但长,但在体外利用培养罐进行大量培养就不象培养细菌在体外利用培养罐进行大量培养就不象培养
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