围产期窒息幼兔多器官功能损伤的观察.doc

围产期窒息幼兔多器官功围产期窒息幼兔多器官功 能损伤的观察能损伤的观察中华妇产科杂志 2000 年第 1 期第 35 卷 论著摘要作者：冯亦军 刘新质 陈敏 支育齐单位：冯亦军(广州, 解放军第一七七医院 510317)；支育齐(广州, 解放军第一七七医院 510317)；刘新质(山医科大学孙逸仙纪念医院)；陈敏中(山医科大学孙逸仙纪念医院)围产儿窒息是造成围产儿死亡的主要原因之一为探讨围产儿窒息时，其心、脑、肝、肾等重要器官的病理学改变，以及病变程度与窒息程度的关系，我们对新西兰白兔围产期新生幼兔窒息模型进行了研究，现报道如下一、材料与方法1. 实验动物：足月妊娠新西兰白兔 8 只（由中山医科大学动物实验中心提供） ，体重(4 500±500)g，每只孕兔产幼兔6～8 只，只留用 24 只体重 60～80g 幼兔作为实验观察对象，并分正常组、轻度窒息组、重度窒息组 3 组，每组各 8 只幼兔新生幼兔窒息模型标准，见表 1表 1 新生幼兔窒息模型的6 项生理指标分类皮肤颜色呼吸(次)心率(次)反应肌张力 pH 值轻度窒息青紫≤30≤200 有减弱≤7.20 重度窒息青紫或苍白消失或喘息样≤100 或不规则无消失≤7.0 2.新生幼兔窒息模型的制作：轻度窒息模型为观测各项生理指标正常的孕兔，经氯胺酮静脉麻醉后实施剖腹手术，间断、部分钳夹和中断孕兔双侧子宫主要供血血管，人为造成胎兔宫内窘迫，此时行一侧子宫剖宫取胎并维持未复苏状态 3～5 min，随即观察皮肤颜色、对刺激的反应、肌张力、呼吸、心率改变（采用日本光电公司单导 6151型心电图机） ，并抽取心脏血急送血气分析，符合上述轻度窒息标准，则作为轻度窒息组。

重度窒息模型为在宫内轻度窒息基础上，继续延长另侧宫内胎兔缺血、缺氧时间，然后剖宫取胎，并维持未复苏状态 6～10 min 后，观测 6 项生理指标，符合重度窒息标准，作为重度窒息组3.组织标本的处理：(1)病理标本处理：3 组共 24 只幼兔分别取心、脑、肝、肾组织标本共 96 份，经 10％甲醛液固定后取材，常规脱水、浸蜡、包埋、切片、HE 染色，低、高倍光镜观察2)电镜标本处理：3 组各取 1 只幼兔，取心、脑、肝、肾组织标本共 12 份，离体后即用 4％缓冲戊二醛溶液固定、漂洗、常规脱水、浸透与包埋、超薄切片，于日立 H-600 型透射电镜下观察3)组化标本处理：3 组共 24 只幼兔分别取心、脑、肝、肾新鲜组织标本共 96 份，采用硝基蓝四唑法［1］处理，低温恒冷切片，孵育液孵育 30 min，10％甲醛钙固定，流水冲洗，脱水透明，中性树胶封固，高倍光镜下观察4.琥珀酸脱氢酶（SDH）活性强度的分级：弱阳性（＋）为随机观察 5 个高倍镜视野下，组织细胞内仅可见稀少、细小深蓝色颗粒；强阳性（＋＋＋）为 5 个高倍镜视野下见密集、粗大深蓝色颗粒；阳性（＋＋）为镜下所见介于弱阳性和强阳性之间；阴性（－）指 5 个高倍镜视野下无阳性颗粒出现。

所得计数资料采用 χ2 检验分析二、结果1.光镜下观察结果：轻度窒息组：心、脑、肝、肾组织偶见局灶性轻度瘀血、水肿样改变 2 例，其余与正常组比较无明显改变重度窒息组：心肌结构疏松、模糊，心肌纤维可出现颗粒样变性、空泡变性；脑组织水肿，神经元细胞、胶质细胞及血管周围间隙明显增宽；肝脏瘀血较显著，也见部分肝细胞空泡变性；肾小球瘀血扩大，近曲小管上皮部分混浊肿胀，远曲小管上皮不同程度空泡变性2.电镜下观察结果：轻度窒息组与正常组比较，细胞异常结构改变不明显重度窒息组：心、脑、肝、肾组织细胞内明显线粒体肿胀、嵴变短或脱落消失、空泡化部分脑神经元细胞核周间隙增宽，肝细胞轻度内质网扩张、结构模糊等3.组织细胞 SDH 活性检测结果：3 组心、脑、肝、肾组织SDH 活性表达结果比较，差异有显著性(P＜0.05)，轻、重度窒息组组织 SDH 活性均有不同程度的减弱或消失，且随窒息的加重 SDH 活性减弱，甚至消失，无一例呈强阳性表达；而正常组心、脑、肝、肾组织 SDH 活性几乎全部呈阳性或强阳性表达，见表 2表 2 3 组新生幼兔心、脑、肝、肾组织 SDH 活性检测结果(例数)组别总例数心脑-++++++-++++++正常组 801341340 轻度窒息组82510530 0 重度窒息组 862008000 组别总例数肝肾-++++++-++++++正常组 802420125 轻度窒息组 816103320 重度窒息组843105300 三、讨论1.围产期窒息多器官损伤的病理特点:通常认为心、脑、肝、肾器官的实质细胞，是机体对缺氧较敏感的细胞，当缺血持续超过有限时间时，细胞的损伤才达到不可复苏的程度［2］ 。

围产儿由于出生前及出生时的特定环境、生理解剖学及血液动力学特点，对于缺氧的耐受程度及器官的受累程度有待研究本实验通过间歇、部分中断孕兔妊娠子宫供血供氧，人为造成胎兔宫内窒息，并在宫内取出窒息幼兔后继续维持窒息状态不同的时间，发现重度窒息幼兔在窒息持续 6 min 以上时，心、脑、肝、肾重要器官就可以发生不同程度组织细胞损伤，如组织瘀血、水肿、细胞水肿、变性等形态结构变化，尤以细胞线粒体对缺血缺氧作用最敏感，可首先广泛出现肿胀、嵴脱落，空泡变性等急性损伤为主的病变而轻度窒息与正常组比较，几乎未发现明显差异，说明器官损伤与窒息的轻、重程度及窒息状态持续的时间关系密切，这与国内外一些学者的认识是一致的［3，4］ 本实验结果提示，围产期幼兔窒息短期内虽然可致多器官受累，但该损伤的特点主要为一些可复性病理改变，通过及时去除缺氧缺血病因，积极有效地复苏治疗，由此产生的损伤病变多可逆转2.围产期窒息对重要器官组织 SDH 活性的影响：SDH 是三羧酸循环中重要的酶之一，并存在于所有有氧呼吸的细胞线粒体膜内，是细胞有氧能量代谢不可缺少的重要环节本实验通过对围产期窒息新生幼兔心、脑、肝、肾重要器官组织细胞内SDH 的活性检测，发现重度窒息、轻度窒息和正常新生幼兔 3组间心、脑、肝、肾组织 SDH 的活性有显著差异。

随着窒息后有氧代谢障碍的加重，这种变化在重度窒息组表现更加突出，这与以上病理形态学观察的结果是符合的值得注意的是，组织细胞内的组织生化改变一般发生在形态结构改变之前，即使在轻度窒息时，也可表现 SDH 活性降低因此，组织细胞内SDH 活性变化，可作为判断该组织缺氧损伤的敏感指标，其活性减弱的程度与窒息的严重程度密切相关围产期窒息状态下，体内存在严重的有氧代谢障碍，心、脑、肝、肾组织对缺氧缺血性损伤尤为敏感，提示，在防治围产期窒息中，应注意保护心、脑、肝、肾重要器官的功能参考文献：［1］凌启波，主编. 实用病理特殊染色和组化技术. 第 1版. 广州：广东省高等教育出版社, 1989. 7-9.［2］武忠弼，主编. 病理学. 第 3 版. 北京：人民卫生出版社, 1993. 4-6.［3］Martinancel A, Carciaalix H, Cabanas FGF, et al. Multiple organ involvement in perinatal asphyxia. J Pediatr, 1995, 127:786.［4］虞人杰, 李黎, 汤泽中,等. 新生儿窒息多器官损害的临床研究. 中华儿科杂志, 1997, 353:138-141.。