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实验1_大肠杆菌的培养和分离2013-9-11emma

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1、微生物3定义:结构简单、形体微小的单绍、多细胞或没有细胞结构的侥等生物,包括疲毒、原梗生物(细菌、放线菌、蓝细菌、支原体、衣原体)、原生生物(最简单的真核生物)和桃些真茵(醉母菌、霆菌。细菌:是单细胞的原核生物。结构组成:细胞壁(肽聪糖)、细胞膜、细胞尿分梨方式:二分翼(产虫子线胞|(由单个细菌(或其他微生物)在适宜固体培养眼可见有基表面或内部生长荸殖到定程度形成一定形态结构等特征的了细菌菌落特征不同微生物形成的茵落且有不同的特征(形态、突起、边缘),是鉴定菌种的重要依据。大肠杆茧(E.coli)革兰氏_阴-(填阴或阳)性菌代谢类型:异养,兼性厌氧型生长适宜温度:37“C左有分布:人命哨乳动牧肠道,此外还广泛分布于水、污水、土壤、谷类、乳制品等当中。大肠杆菌在人体的肠道中一般对人体无害,但任何大肠杆菌如果进入_泌尿系统都会对人体产生危害。大肠杆菌是基因“工程中被广泛采用的工具。质粒、EcoRI限制酶E.coli-DNA连接酶、受体细胞大肠杆萧的培养和分离实验目的8液体(囹体)*1.进行大肠杆菌的扩增.利用履体培养基进行细菌培养的操什2.进行大肠杆菌的分离,用固体平板培养基进行细菌的划线

2、培养3-说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理一配制培养基塔养基;是由人工方法配制而成的,专供微生物生长-口无机碳(CO2)碳源主要作能源物质九N2,NH3,铰,硝酸氧3u一盐氮源伟仁付N路化代物一技源n胡无机盐如NaCI“调节渗透压等水生妇工调节促生长维生素,AA,碱基等一、配制培养基不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方实例:“细菌喜芝,霆菌喜素“细菌培养基要用蛋白脏和酶母提取物来配制,还要加入一定的氯化钠,以维持一定的溢透压;雾菌培养基一般用无机物配制或添加蔚糖的豆调节DH口J真菌t:5小6细菌:.6.5,.152,、过程“勿法到瓶口或者壁上,动污染,则作府计算称量一溶解一-调pH_加塞,包扩一灭菌二、包器材|P20气不通细茵牛皮纸或报纸|加盖后几个包在一起G分装:汪意不耍使培养基沾在管口或瓶口上囚此在将培养基转移到角瓶或腓中日必须用三*火闹定义:以化学剂或物理方法消灭所有微生物(包括芽孢(休眠体)和孢子(真菌、放线菌生殖细胞)方法1:高压蒸汽灭菌:100KPa、121C下维持15min(培养基、无菌水、玻璃器皿等天菌on),灭菌前气膨胀压大于干7堇“墓兄蒯逄廷丕到水燃气的温度,-灭筱销压力与大气压相同时打开锅盘方法2:干热灭菌:160-170C下加热1-2h。玻璃器皿等耐热器具灭菌后,通常将实验用具放进6080C的烘箱中烘干,除去灭菌时的水分,防止污染(P20)马、超净台操作君氛亘亩寥琵萱栗*荤旨在培种器具必须无菌(灭菌)舜告物的接休应5所|墙莲基_也必须驯无菌(丁菌)(培养歪交排作者转移菌种时不带入杂菌(灭菌、消毒誓冒汤。.1、紫外消毒(针对空气):实验用具放在越浑台上,着开超净台的紫外灯和过溺风(人离开)30min左右,培其基冷却至60IC,关闭紫外。2、酒精消毒:用镊子取出酒精棉擦找超净台桌面,并擦挂双手。3、开始实验消毒:使用较温和理化因素,仅杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的微生物的过程。不能杀死芽孢和孢子。(对被消毒物体基本无害)灭兰:使用强烈的理化因素消灭物体内外所有微生物,包括芽孢和孢子。(细菌蛋白质变性达到灭菌目的)G綦外线消毒法(使蛎白质变性,还能损伤消毒4化学药剂消毒法(酒精)70%DNA惨沸消毒法回巴氏消毒法结构回高压蒸汽灭菌.oe/尘/扇灭菌十热灭菌“广国肉灼烧灭菌n咤00om507Gcsmmi音篆酝山

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