分子发光荧光磷光和化学.ppt

分子发光—荧光、磷光和化学发光 molecular luminescence analysis 概论 分子荧光和磷光光谱分析法化学发光分析法精选ppt教 学 要 求•掌握荧光的产生、荧光效率及其影响因素；重点掌握溶液强度与溶液浓度的关系及定量分析方法；弄清荧光分析仪器的主要部件及与分子吸收仪器的主要区别了解磷光分析法及化学发光分析法•重点：荧光效率及影响因素；溶液强度与溶液浓度的关系及定量分析方法；•难点：荧光的产生，影响荧光效率的因素精选ppt概述•一、分子发光的类型•荧荧光光Fluorescence•磷光磷光Phosphorescence•化学化学发发光光Chemiluminescence光致光致发发光光精选ppt特点：1)灵敏度高（1-100ppb)：有的可达0.01ppb比吸收光度法高2-3个数量级WHY?? 2)选择性好3)方法简单快速，用样量少4)应用不太广泛精选ppt分子分子荧荧光与磷光光光与磷光光谱谱分析法分析法 molecular fluorescence and phosphorescence•荧荧光：光：•1616世世纪纪：在：在矿矿物和植物提取液中物和植物提取液中发现荧发现荧光；光；•15751575年：年：Monardes——Monardes——植物愈植物愈创创木切片黄色水溶液木切片黄色水溶液————天天兰兰色色荧荧光；光；•18521852年：年：StokesStokes阐阐明明荧荧光光发发射机制（分光射机制（分光计观测计观测奎宁和叶奎宁和叶绿绿素的素的荧荧光，光，发现发现波波长长稍稍长长于入射光的波于入射光的波长长————认识认识到到荧荧光光为为““重新重新发发光光””而不是漫射光；而不是漫射光；•19051905年：年：WoodWood发现发现气体分子的共振气体分子的共振荧荧光；光；•19261926年年:Gaviola:Gaviola直接直接测测定了定了荧荧光寿命；光寿命；•19231923年：年：荧荧光光X X射射线线光光谱谱；；•19641964年：原子年：原子荧荧光光光光谱谱分析的建立；分析的建立；•19651965年：年：荧荧光分析在生物分析中广泛光分析在生物分析中广泛应应用；用；精选ppt•磷光：磷光：•1515世世纪纪被被发现发现（重晶石在（重晶石在强强烈阳光下的烈阳光下的发发光）光）•19441944年：年：LewisLewis提出磷光用于分析的可能性；提出磷光用于分析的可能性；•19571957年：年：KeirsKeirs将磷光分析用于定量分析及多将磷光分析用于定量分析及多组组份份混合物分析；混合物分析；•19631963年：广泛用于血液及尿液中痕量年：广泛用于血液及尿液中痕量药药物及物及农药农药残留量分析；残留量分析；精选ppt•一、荧光和磷光的产生•luminescence process of molecular fluorescence phosphorescence•1. 1. 分子能分子能级级与与跃跃迁迁•分子能级比原子能级复杂；•在每个电子能级上，都存在振动、转动能级；•基态(S0)→激发态(S1、S2、激发态振动能级)：吸收特定频率的辐射；量子化；跃迁一次到位；•激发态→基态：多种途径和方式；速度最快、激发态寿命最短的途径占优势 精选ppt2.电子激发态的多重度电子激发态的多重度：M=2S+1 平行自旋比成对自旋稳定(洪特规则)，三重态（ triplet state ）能级比相应单重态（ singlet state ）能级低；激激发单发单重重态态：：分子吸收能量，电子自旋仍然配对，为单重态，称为激发单重态，以S1，S2…表示 激激发发三重三重态态：：分子吸收能量，电子自旋不再配对，为三重态，称为激发三重态，以T1，T2….表示。

大多数有机分子的基态处于单重态，电子自旋配对，多重度=2s+1=1，为单重态，以S0表示 S0→T1 禁阻跃迁精选ppt单重态基态S0吸收辐射通常自旋不变激发态S1/ S2单重态基态S0吸收辐射自旋改变激发态T1/T2规则Hund平行自旋能量更低泡利不相容原理三重态triplet state激发后S/T两态激发态精选ppt单重态与三重态 Mg的基的基态态与第一激与第一激发态发态基基态态1st激激发态发态3s3p内量子数内量子数J有有2S+1个取个取值值(L+S),(L+S-1),…,(|L-S|)L= 0 (用用S S表示表示) 1(用用P P表示表示) 1J= 0 1 2, 1, 0 光光 谱谱 项项 改变自旋/禁阻/磷光3p精选ppt3.激发态→基态的能量传递途径 电电子子处处于于激激发发态态是是不不稳稳定定状状态态，，返返回回基基态态时时，，通通过过辐辐射射跃跃迁迁( (发发光光) )和和无无辐辐射射跃跃迁迁等等方方式式失失去去能能量量（（去去活化）活化）传递传递途径途径辐射跃迁荧光延迟荧光磷光内转移外转移系间跨越振动弛豫无辐射跃迁激发态停留时间短、返回速度快的途径，发生的几率大，发光强度相对大；荧荧光光：10-7～10 -9 s,第一激发单单重重态态的最低振动能级→基态；磷光磷光：10-4～10s；第一激发三重三重态态的最低振动能级→基态；精选pptS2S1S0T1吸吸收收发发射射荧荧光光发发射射磷磷光光系间跨越内转换振动弛豫能量l l 2l l 1l l 3 外转换l l  2T2内转换振动弛豫精选ppt能量传递过程（1）振动弛豫（Vibrational Relaxation, VR） 在液相或压力足够高的气相中，处于激发态的分子因碰撞将能量以热的形式传递给周围的分子，从而从高振动能层失活至低振动能层的过程，称为振动弛豫。

2）内转换（Internal Conversion，IC） 对于具有相同多重度的分子，若较高电子能级的低振动能层与较低电子能级的高振动能层相重叠时，则电子可在重叠的能层之间通过振动耦合产生无辐射跃迁，如S2-S1；T2-T13）外转换（External Conversion，EC） 受激分子与溶剂或其它分子相互作用发生能量转换而使荧光或磷光强度减弱甚至消失的过程，也称“熄灭”或“猝灭”精选ppt•（4）系间跨跃（Intersystem Conversion，ISC）• 系间跨跃是发生在两个不同多重态之间的无辐射跃迁，如从S1到T1，该跃迁是禁阻的然而，当不同多重态的两个电子能层有较大重叠时，处于这两个能层上的受激电子的自旋方向发生变化，即可通过自旋-轨道耦合而产生无辐射跃迁，该过程称为系间跨跃•（5）荧光发射• 分子电子从单重激发态（Kasha规则）的最低振动能级在很短时间（10-9-10-6s）跃迁到基态各振动能层时所产生的光子辐射称为荧光由于各种去活化过程的存在，荧光辐射能通常要比激发能量低，或者说，荧光波长大于激发波长（Stokes效应）精选ppt•（7）磷光发射• 从单重态到三重态分子间发生系间跨跃跃迁后，再经振动弛豫回到三重态最低振动能层，最后，在10-4-10s内跃迁到基态的各振动能层所产生的辐射。

在光照停止后，磷光仍可持续一段时间8）延迟荧光通常，发生系间窜跃时，电子由S1的较低振动能级转移至T1的较高振动能级处有时，通过热激发，有可能发生T1→S1，然后由S1发生荧光这是产生延迟荧光的机理精选ppt去活化演示ee吸收驰豫eeS0S0S2S1精选ppt去活化演示e内部转换e荧光e精选ppt荧荧光的光的产产生生过过程程荧荧光的光的产产生生eeee吸收激发振动驰豫内部转换S1最低振动能级荧光辐射S0各振动能级精选ppt二、荧光、磷光与化学结构的关系•1. 1. 荧荧光量子光量子产产率率• 荧光量子产率也叫荧光效率或量子效率，它表示物质发射荧光的能力，通常用下式表示 • 或• •在产生荧光的过程中，涉及到许多辐射和无辐射跃迁过程，如荧光发射、内转移，系间跨跃和外转移等很明显，荧光的量子产率，将与上述每一个过程的速率常数有关精选pptkf :应光发射过程的速率常数可见，凡是使 kf增加，使其它去活化常数降低的因素均可增加荧光量子产率。

通常， kf 由分子结构决定（内因），而其它参数则由化学环境和结构共同决定分析应用价值：量子产率>0.12.荧光、磷光与有机化合物结构的关系（1）跃迁类型：通常，具有—*及n—*跃迁结构的分子才会产生荧光而且—*跃迁的量子效率比n—*跃迁的要大得多（前者大、寿命短、kISC小）精选ppt2.荧光、磷光和有机化合物分子结构的关系•（1）.跃迁类型：通常，具有—*及n—*跃迁结构的分子才会产生荧光而且—*跃迁的量子效率比n—*跃迁的要大得多（前者大、寿命短、kISC小）•π→π* 跃迁 自旋许可跃迁，有利于荧光发射• n →π*跃迁 自旋禁阻跃迁，有利于磷光发射精选ppt（2）.共轭体系：共轭度越大，分子的荧光效率越大，且荧光光谱向长波方向移动增大共轭 萘φf=0.29， λf=310nm 蒽φf=0.46， λf=400nm在多烯结构中，ph（CH=CH）3 ph和ph（CH=CH）2 ph在苯中的荧光效率分别为0.68和0.28w绝大多数能发荧光的物质为含芳香环或杂环的化合物精选ppt（3）.平面刚性结构：分子刚性（Rigidity）越强，分子振动少，与其它分子碰撞失活的机率下降，荧光量子效率提高。

精选ppt（4）.取代基• 给电子取代基增强荧光（p-共轭），荧光波长红移，如-OH、-OR、-NH2、-CN、NR2等；• 吸电子基降低荧光，而使磷光加强，如 -COOH、•-C=O、 -NO2、-NO、-X等；• 重原子降低荧光但增强磷光，如苯环被卤素取代，从氟苯到碘苯，荧光逐渐减弱到消失，该现象也称重原子效应有利因素增大共轭刚性结构给电子基团不含杂原子精选ppt3.无机化合物的荧光•（（1 1）螯合物中配位体的）螯合物中配位体的发发光光• 不少有机化合物虽然具有共轭双键，但由于不是刚性结构，分子处于非同一平面，因而不发生荧光若这些化合物和金属离子形成螯合物，随着分子的刚性增强，平面结构的增大，常会发生荧光• 如8-羟基喹啉本身有很弱的荧光，但其金属螯合物具有很强的荧光•（（2 2）螯合物中金属离子的特征）螯合物中金属离子的特征荧荧光光• 这类发光过程通常是螯合物首先通过配位体的跃迁激发，接着配位体把能量转给金属离子，导致dd跃迁和ff跃迁，最终发射的是 d  d跃迁和•f  f跃迁光谱精选ppt三、影响光致三、影响光致发发光的因素光的因素1. 荧荧光光强强度与溶液度与溶液浓浓度的关系度的关系泰勒级数展开常A<0.05If与A 的关系A与c正比，低浓度精选ppt•（1）溶溶剂对荧光光强度的影响：度的影响： • 溶剂极性可增加或降低荧光强度（改变—*及• n—* 跃迁的能量），并使荧光峰发生移动。

• 与溶剂作用从而改变荧光物质结构来增加或降低荧光强度，并使荧光峰发生移动•（2）温度温度：温度上升使荧光强度下降其中一个原因是分子的内部能量分子的内部能量转化作用化作用当激发分子接受额外热能时，有可能使激发能转换为基态的振动能量，随后迅速振动弛豫而丧失振动能量另一个原因是碰撞碰撞频率增加率增加，使外转换的去活几率增加•因此体系降低温度可增加荧光分析灵敏度2.2.影响影响荧荧光光强强度的因素度的因素精选ppt•（3）pHpH值值的影响：的影响：带有酸性或碱性官能团的大多数芳香族化合物的荧光与溶液的pH有关不同的pH值，化合物所处状态不同，不同的化合物或化合物的分子与其离子在电子构型上有所不同，因此，它们的荧光强度和荧光光谱就有一定的差别• 对于金属离子与有机试剂形成的发光螯合物，一方面pH会影响螯合物的形成，另一方面还会影响螯合物的组成，因而影响它们的荧光性质（（4 4））荧荧光的熄光的熄灭灭（猝（猝灭灭）效）效应应荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用引起荧光强度降低的 现象称为荧光熄灭能引起荧光强度降低的物质称为熄灭剂（猝灭剂） 精选ppt碰撞猝灭及能量转移：主要/外部转换热效应 溶溶剂剂或溶或溶质质分子分子间发间发生物理或化学作用生物理或化学作用导导致致荧荧光光强强度下降。

度下降与熄灭剂碰撞：M* +Q →M+Q+热激发熄灭剂： M* +Q →M+Q*氧熄灭：顺顺磁性氧分子，促系磁性氧分子，促系间间跨跨跃跃成三重成三重态态尤其对无取代基的芳香族化合物的荧光影响较为显著 溶溶剂剂粘度大粘度大 ↓ ↓温度高温度高 ↑ ↑自熄灭/自吸收 自熄：自熄：浓度高时，激，激发态发态之之间间相互碰撞相互碰撞 自吸：自吸：荧荧光曲光曲线线与吸收曲与吸收曲线线重叠重叠时时，被基，被基态态分子吸分子吸收收低低浓浓度！度！精选ppt四四、、荧荧光光和和磷磷光光的的分分析析仪仪器器（一）（一）荧荧光光度光光度计计光源单色器1样品池单色器2检测器放大与记录垂直方向精选ppt与分光光度与分光光度计计的主要差的主要差别别① 垂直测量方式, 消除透射光影响② 两个单色器，激发和发射，常用光栅光源：常用氙灯、高光源：常用氙灯、高压压汞灯和激光光源汞灯和激光光源要求：强度大、使用波长范围宽试样试样室：室：四面光石英池固体试样架四面光比色皿精选ppt•（二）激发光谱和荧光、磷光光谱•excitation spectrum and fluorescence excitation spectrum and fluorescence （（ phosphorescence phosphorescence ））spectrumspectrum•1.1.荧荧光光( (磷光磷光) )的激的激发发光光谱谱曲曲线线 λEx• 固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的荧光(磷光)强度与照射光波长的关系曲线 （图中曲线I ） 。

•激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大色散系统：光栅 第一单色器选激发光波长 第二单色器选荧光波长检测器：光电倍增管精选ppt2.荧光光谱(或磷光光谱) λEm 固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光(或磷光强度)与发射光波长关系曲线(图中曲线II或III)由于存在各种形式的无辐射跃迁，损失了部分能量，故最大发射波长都向长波方向移动，尤以磷光波长的移动最多，且它的强度也相对较弱精选ppt•注意：因为分子吸收了不同能量的光子可以由基态激发到几个不同的电子激发态，而具有几个吸收带由于较高激发态通过内转换及转动弛豫回到第一电子激发态的速率较高，远大于由高能激发态直接发射光子的速率，故在荧光发射时，不论用哪一个波长的光辐射激发，电子都从第一电子激发态的最低振动能层返回到基态的各个振动能层，所以荧光发射光谱与激发波长无关•精选ppt（三）磷光计与与荧荧光光仪仪一体化一体化试样试样室室: :试样试样池放在液氮杜瓦瓶内池放在液氮杜瓦瓶内 固体表面磷光需特制固体表面磷光需特制试样试样室室磷光磷光镜镜: :一种机械切光装置一种机械切光装置. . 转转筒式和筒式和转盘转盘式式 时间时间分辨技分辨技术术, 去去荧荧光光精选ppt 磷光磷光仪仪中的中的2种机械切光器种机械切光器光源散射光、快速衰减的荧光磷光分离精选ppt五、荧光、磷光分析方法与应用1. 1. 特点特点（（1 1）灵敏度高）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级；为什么？ 检测下限：0.1～0.1g/cm-3 相对灵敏度：0.05mol/L 奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。

2 2））选择选择性性强强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱；（（3 3））试样试样量少量少 缺点缺点：应用范围小精选ppt（一）荧光分析法的应用(1)(1)无机化合物的分析无机化合物的分析 与有机试剂配合物后测量；可测量约60多种元素 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定(2) (2) 有机化合物的分析有机化合物的分析脂肪族分子结构较为简单，本身会产生荧光的很少，只有与其它有机试剂作用后可产生荧光芳香族化合物具有不饱和的共轭体系，多能发生荧光此外如胺类、甾族化合物、蛋白质、酶与辅酶、维生素等均可用荧光法进行分析精选ppt（三）、磷光分析法的应用在分析对象上，与荧光法互补1.1.稠稠环环芳芳烃烃分析分析 采取固体表面室温磷光分析法快速灵敏测定稠环芳烃和杂环化合物（致癌物质）2.2.农药农药、生物碱、植物生、生物碱、植物生长长激素的分析激素的分析 烟碱、降烟碱、新烟碱，2，4-D等分析 检测限0.01 g/cm-3 3.3.药药物分析和物分析和临临床分析床分析精选ppt一、概述化学反化学反应产应产生激生激发态发态分子分子, , 光光发发射。

射 用于痕量元素、用于痕量元素、环环境境检测检测、生物医学分析生物医学分析 与与荧荧光法互光法互补补§9-2 化学发光 Chemiluminescence 特点：特点：① 灵敏度高：鲁米诺体系测定Cr3+等检测限10-9 g/L ② 线性范围宽：5～6个数量级 ③ 发射光强度测量无干扰：无背景光、散射光干扰④设备简单：无光源，无需单色器，测发光总量⑤快速缺点：可供发光用的试剂少；发光反应效率低（大大低于生物体中的发光）；机理研究少 精选ppt二、化学发光分析的基本原理 principle•（一）化学（一）化学发发光反光反应应的条件：的条件：•  能快速能快速释释放出放出足足够够的能量的能量化学反应应必必须须提提供足供足够够的激的激发发能，激能，激发发能主要来源于反能主要来源于反应焓应焓•  要有有利的化学反要有有利的化学反应历应历程，使化学反程，使化学反应应的能的能量至少能被一种物量至少能被一种物质质所接受并所接受并生成激生成激发态发态•  激激发态发态能能释释放光子或能放光子或能够转够转移它的能量移它的能量给给另另一个分子，而使一个分子，而使该该分子激分子激发发，然后以，然后以辐辐射光子射光子的形式回到基的形式回到基态态。

精选ppt（二）化学发光反应 基基于于化化学学反反应应所所提提供供的的足足够够的的能能量量，，使使其其中中一一种种反反应应产产物物的的分分子子的的电电子子被被激激发发，，形形成成激激发发态态分分子子，，当当它它们们从从激激发发态态跃跃回回基基态态时时，，发发出一定波出一定波长长的光 A +B = C + D* A +B = C + D* D* → D + D* → D + h h （（1 1）能）能够发够发光的化合物大多光的化合物大多为为有机化合物，有机化合物，芳香族化合物芳香族化合物；；（（2 2）化学）化学发发光反光反应应多多为为氧化氧化还还原反原反应应，激，激发发能与反能与反应应能相当能相当  E E=170=170～～300 kJ/mol300 kJ/mol；位于可；位于可见光区；光区；（（3 3））发发光持光持续时间较长续时间较长，反，反应应持持续进续进行；行； 化化学学发发光光反反应应存存在在于于生生物物体体( (萤萤火火虫虫、、海海洋洋发发光光生生物物) )中中，，称生物称生物发发光光(bioluminescence)(bioluminescence)。

精选ppt（三）化学（三）化学发发光效率光效率化学效率：化学效率：发发光效率：光效率：时刻t 的化学发光强度(单位时间发射的光量子数)：dc/dt 分析物参加反应的速率；精选ppt（四）化学（四）化学发发光光强强度与化学度与化学发发光分析的依据光分析的依据在化学发光分析中，被分析物浓度相对于发光试剂小得多，对于一级动力学反应： dc/dt =Kc； K 为反应速率常数定量依据：定量依据：（1）在一定条件下，峰值光强度与被测物浓度成线性；（2）在一定条件下，曲线下面积为发光总强度(S)，其与被测物浓度成线性：精选ppt三、化学发光反应的类型（一）气相化学（一）气相化学发发光反光反应应1.1.臭氧的化学臭氧的化学发发光反光反应应没食子酸+O3 →A*+O2罗丹明B+A* →罗丹明B*+B罗丹明B* →罗丹明B + h2. 2. 氮氧化合物的化学氮氧化合物的化学发发光反光反应应 NO + O3 → NO2*NO2* → NO2 + h 发射的光谱范围：600～875nm，灵敏度1ng/cm-3；可间接测定NO2 (还原为NO) 和NH3 (高温氧化为NO2 )测量汽车尾气中NOx精选ppt3.3.氧原子与氧原子与SOSO2 2、、NONO、、COCO的的发发光反光反应应•O3 → O2 + O （1000 C石英管中进行）•SO2 + O + O → SO2* + O2 •SO2 * → SO2* + h•最大发射波长：200nm；灵敏度1ng/cm-3•4.4.火焰化学火焰化学发发光光•在富氢火焰中，也存在着很强的化学发光反应；•（1）一氧化氮 • NO + H → HNO*• HNO * → HNO + h•发射光谱范围：660～770nm； 最大发射波长：690nm；• 在富氢火焰中：• NO2 + 2H → NO + H2O • 可用此法测定空气中的NOx的总量，还可与气相色谱联用，作为氮化合物的检测器。

精选ppt（（2 2））挥发挥发性硫化物性硫化物 挥发挥发性硫化物性硫化物SOSO2 2 、、H H2 2S S 、、CHCH3 3SHSH、、 CH CH3 3SCHSCH3 3等在富等在富氢火火焰中燃焰中燃烧，，产生很生很强的化学的化学发光（光（蓝色）：色）： SOSO2 2 + 2H + 2H2 2 → S + 2H → S + 2H2 2O O S + S → 2S S + S → 2S2 2 * * S S2 2 * → S* → S2 2 + + h h  发发射光射光谱谱范范围围：：350350～～460nm460nm；； 最大最大发发射波射波长长：：394nm394nm；； 灵敏度：灵敏度： 0.2 ng/cm 0.2 ng/cm-3-3；； 发发射光射光强强度与硫化物度与硫化物浓浓度的平方成正比。

度的平方成正比精选ppt（二）液相中的化学（二）液相中的化学发发光反光反应应 机理研究较多，在分析中应用最多；可测痕量的H2O2 、Cu、Mn、Co、V、Fe、Cr、Ce、Hg、Th等 应用最多的发光试剂：鲁米诺（3-氨基苯二甲酰肼）； 化学发光反应效率：0.15～0. 05； 鲁米诺在碱性溶液中与双氧水的反应过程：：精选ppt（1） 该发光反应速度慢，某些金属离子可催化反应；利用这一现象可间接测定这些金属离子可测痕量的Cu2+ 、Mn2+、Co2+、V4+、Fe2+、 Fe3+、 Ni2+、Ag+、Au3+、Hg2+等（2） 可检测低至 10-9 mol/L 的H2O2；（3） 间接测定某些生物试样 氨基酸 + O2  酮酸 +NH3 + H2O2 氨基酸氧化酶 葡萄糖 + O2 + H2O  葡萄糖酸 + H2O2 通过测定生成的H2O2 ，确定氨基酸、葡萄糖含量葡萄糖氧化酶精选ppt生物生物发发光分析光分析应应用用 1—— 1——萤萤火虫反火虫反应应 在pH 7～8；荧光素酶(E)和Mg2+的存在下，荧光素(LH2)与磷酸三腺甙(ATP)的反应，生成磷酸腺甙(AMP)荧光素和荧光素酸的复合物和镁的焦磷酸盐(ppi)： ATP + LH2 + E + Mg2+ AMP· LH2 · E +Mg ppi + 2H+pH7 - 8复合物与氧反应，产生化学发光： AMP· LH2 · E + O2 [氧化荧光素]* + AMP+CO2 + H2O[氧化荧光素]*  氧化荧光素 + h最大发射波长562nm据此可测定ATP，对10μgATP样品，检出限可低达10-14μg。

精选ppt生物生物发发光分析光分析应应用用 2—— 2——检测辅检测辅酶酶NADHNADH 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)在细菌中的黄素酶作用下，在氧化型黄素单核苷酸(FMA)存在下，发生发光反应 ：NADH + FMA + H+  NAD+ + FMNH2NADH脱氢酶FMNH2 + RCHO + O2  FMN + RCOOH + H2O + h黄素酶最大发射波长495 nm；精选ppt四、化学发光的测量仪器 装置流程：装置流程：发发光反光反应应室室光光检测检测器器信号放大器信号放大器显显示与示与记录记录 发发光反光反应应可采用分立取可采用分立取样样式或流式或流动动注射的方式注射的方式进进行：行：分分立立取取样样式式：用注射器分别将试剂加入到反应器中混合，测最大光强度或总发光量；试样量小，重复性差流流动动注注射射式式：用蠕动泵分别将试剂连续送入混合器，定时通过测量室，连续发光，测定光强度；试样量大精选ppt精选ppt作业：精选ppt。