周周三化学实验8纸层析课件.ppt

纸层析纸层析 实验目的实验目的1了解纸层析的基本原理了解纸层析的基本原理2 掌握纸层析的基本操作技术掌握纸层析的基本操作技术 实验原理实验原理纸层析：纸层析：滤纸滤纸作为载体；作为载体；固定相固定相为纸纤维上吸附的水为纸纤维上吸附的水 分；分；流动相流动相为与水不相混溶的有机溶剂为与水不相混溶的有机溶剂 把试样点在滤纸的原点位置上，当流动相溶把试样点在滤纸的原点位置上，当流动相溶 剂在滤纸的毛细管作用下，连续不断地沿着剂在滤纸的毛细管作用下，连续不断地沿着 滤纸前进通过原点时，试样中各组分便随着滤纸前进通过原点时，试样中各组分便随着 流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相 溶剂之间连续发生一次又一次的分配溶剂之间连续发生一次又一次的分配色谱法色谱法(Chromatography) ：混合物中：混合物中各组分在流动相各组分在流动相与固定相间的分配比不同而使之分离与固定相间的分配比不同而使之分离 结果，分配比较大的物质移动速度较快，结果，分配比较大的物质移动速度较快，移动的距离较远；分配比较小的物质移移动的距离较远；分配比较小的物质移动速度慢，移动的距离较近。

这样，便动速度慢，移动的距离较近这样，便把试样中各组分分开聚集在滤纸的不同把试样中各组分分开聚集在滤纸的不同位置上这种分离过程叫位置上这种分离过程叫展开展开因此，流动相溶剂又叫做展开剂流动相溶剂又叫做展开剂当分离的物质是有色的，如甲基橙，层当分离的物质是有色的，如甲基橙，层析后在滤纸上可以直接看出它的色斑析后在滤纸上可以直接看出它的色斑当分离的是无色的物质，如氨基酸，就当分离的是无色的物质，如氨基酸，就必须用显色剂使之显色无色的氨基酸必须用显色剂使之显色无色的氨基酸可以用茚三酮使之显红色，所用的茚三可以用茚三酮使之显红色，所用的茚三酮就是酮就是显色剂显色剂ABA+B样品经层析展开后，被分离的各化合物可通过它的样品经层析展开后，被分离的各化合物可通过它的R Rf f值（值（比移值比移值）来鉴定lmnABA+BR Rf f值随各化合物的结构、滤纸值随各化合物的结构、滤纸的种类、展开剂、温度的不同的种类、展开剂、温度的不同而异但在上述条件固定的情而异但在上述条件固定的情况下，对于某一化合物来说，况下，对于某一化合物来说， R Rf f值是一个常数故值是一个常数故R Rf f值可作值可作为定性鉴定的依据。

为定性鉴定的依据仪器：仪器：层析缸层析缸层析滤纸层析滤纸直尺直尺铅笔铅笔毛细管毛细管电吹风电吹风试剂：试剂：展开剂：展开剂： 正丁醇正丁醇:醋酸醋酸:乙醇乙醇:水水 = 4:1:1:2显色剂显色剂: 1%茚三酮丙酮溶液茚三酮丙酮溶液样品样品: 丙氨酸丙氨酸(2%)乙醇溶液乙醇溶液 丙氨酸丙氨酸(2%)和亮氨酸和亮氨酸(2%)混合溶液混合溶液丙氨酸：丙氨酸：亮氨酸：亮氨酸：实验仪器与试剂实验仪器与试剂1 1、准备、准备在距滤纸一端约在距滤纸一端约2cm2cm处用铅笔处用铅笔轻轻划一横线作轻轻划一横线作起点线起点线，并在，并在横线上标上横线上标上A A、、B B两点 注意注意：：A A、、B B两点不要太靠近滤两点不要太靠近滤纸边缘，以免产生纸边缘，以免产生边缘效应边缘效应在准备过程中手不要接触滤纸在准备过程中手不要接触滤纸中部中部AB 实验步骤实验步骤2 2、点样、点样用毛细管吸取已准备好的样品，用毛细管吸取已准备好的样品，毛细管毛细管垂直于垂直于纸面在标有纸面在标有A A、、B B记号处，分别点两个样品，其记号处，分别点两个样品，其中一个是丙氨酸样品，另一个中一个是丙氨酸样品，另一个是丙氨酸和亮氨酸的混合液。

是丙氨酸和亮氨酸的混合液风干风干，按上述方法重复一次按上述方法重复一次 注意注意：点的样直径不超过：点的样直径不超过3mm3mm，，动作要轻，点一个样风干后再动作要轻，点一个样风干后再点另一个样点另一个样AB4 4、显色、显色用装有显色剂溶液的喷雾器，在滤纸已展开部分用装有显色剂溶液的喷雾器，在滤纸已展开部分均匀喷上茚三酮溶液，然后用电吹风吹干溶剂，均匀喷上茚三酮溶液，然后用电吹风吹干溶剂，再用热风吹滤纸条，直至滤纸条上有紫红色斑点再用热风吹滤纸条，直至滤纸条上有紫红色斑点出现5 5、结果处理、结果处理找出滤纸条上有几个斑点，并能辨认出各个斑点找出滤纸条上有几个斑点，并能辨认出各个斑点是由哪一个氨基酸显现的用铅笔划出斑点的轮是由哪一个氨基酸显现的用铅笔划出斑点的轮廓，标出斑点的中心，最后分别计算丙氨酸和亮廓，标出斑点的中心，最后分别计算丙氨酸和亮氨酸的氨酸的R Rf f值值2+（（-H3O+））+ RCHO + CO2紫红色紫红色 实验数据实验数据Rf =原点至层析斑点中心的距离原点至层析斑点中心的距离原点至展开剂前沿的距离原点至展开剂前沿的距离计算计算 Rf 测测 = ？？nml3 3、展开、展开将已点样的滤纸将已点样的滤纸垂直垂直垂直垂直挂于带有小钩的层析缸盖挂于带有小钩的层析缸盖上，使滤纸下端浸入展开剂中。

上，使滤纸下端浸入展开剂中当展开剂的前当展开剂的前沿位置达到距滤纸上端约沿位置达到距滤纸上端约1 2cm处时，小心取处时，小心取出滤纸趁湿用铅笔出滤纸趁湿用铅笔划出展开剂前沿位置划出展开剂前沿位置，然后，然后用电吹风吹干用电吹风吹干 注意：注意：展开剂不要淹没滤纸上起点线，在起点展开剂不要淹没滤纸上起点线，在起点线下线下1cm1cm左右；起点线应与展开剂液面平行；左右；起点线应与展开剂液面平行；滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触；滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触；展开时层析缸展开时层析缸封闭注意事项注意事项实验过程中手不要接触滤纸中部实验过程中手不要接触滤纸中部实验成败决定于点样的好坏，要求点的样直径不超实验成败决定于点样的好坏，要求点的样直径不超过过3mm3mm展开剂不要淹没滤纸上起点线；起点线应与展开剂展开剂不要淹没滤纸上起点线；起点线应与展开剂液面平行；滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触；展开时液面平行；滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触；展开时层析缸封闭层析缸封闭分别计算丙氨酸和亮氨酸的分别计算丙氨酸和亮氨酸的R Rf f值值每人单独操作，样品层析滤纸附在实验报告上每人单独操作，样品层析滤纸附在实验报告上。

1 1、、R Rf f值的意义是什么？哪些因素会影响值的意义是什么？哪些因素会影响R Rf f值？值？2 2、在纸层析时，层析缸为什么要求尽量封闭？、在纸层析时，层析缸为什么要求尽量封闭？ 思考题思考题1 丙氨酸丙氨酸2 混合液混合液终点线终点线起点线起点线2cmA B边缘效应边缘效应托尾现象托尾现象展开剂选择不当展开剂选择不当流动相比例流动相比例点样量点样量展开剂蒸汽饱和程度展开剂蒸汽饱和程度。