全国艾滋病检测技术规范(试行)研究报告.ppt

全国艾滋病检测技术规范 （试 行）,甘肃省疾病预防控制中心 性病艾滋病科 赵煜君,艾滋病检测工作具有严格的科学性和政策性，为了加强我省艾滋病（AIDS）检测工作的规范化管理，不断提高HIV抗体检测实验室的检测工作质量，确保每一份检测的准确性和可靠性，及时有效地发现感染者和上报疫情，必须认真学习、贯彻执行《全国艾滋病检测工作管理办法》和《全国艾滋病检测技术规范》中各项规定只有严格按要求开展检测工作，才能使我省HIV抗体检测各级实验室管理逐步规范化、制度化，更好地发挥HIV检测在艾滋病防治工作中的作用《全国艾滋病检测工作规范》 卫生部1997年9月颁布 《全国艾滋病检测工作管理规范》 卫生部待颁布 《全国艾滋病检测技术规范》（试行） 中国CDC2003年5月颁布,全国艾滋病检测技术规范（试行）,包括： 1、样品的采集和处理 2、HIV抗体、抗原检测 3、HIV核酸检测 4、艾滋病检测实验室安全防护 5、艾滋病实验室质量管理 6、艾滋病确认实验室质量考评办法 7、HIV诊断试剂临床评估方案,样品的采集和处理—样品的采集,样品是血液（血清、血浆和全血）、唾液和尿液 血清样品采集：抽取的静脉血，室温自然 放置1-2小时，待血液凝固后，3000rpm/min离心15分钟，吸出血清备用。

抗凝血样品的采集：用加有抗凝剂的真空采血管或注射器抽取静脉血，移至加抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用样品的采集和处理—样品的保存,HIV抗体检测： 血清或血浆存放于-20℃以下，短期（一周）内检测可存放于2-8℃ 抗原和核酸的检测： 血浆和血细胞存放于-20℃以下，如长期保存应置于-80℃样品的采集和处理—样品的运送,血清或血浆（一般不运送全血）：置于带 盖的塑料管内，有明显的标记（编号或姓 名，采集时间）附送检单 短期内（≤48小时）可室温运送，较远或 较热，应在2-8℃条件下运送样品的采集和处理—样品的接受,样品由经过培训的工作人员接受 核对样品与送检单，检查有无破损和溢漏， 记录有无严重溶血、污染等情况 自发荧光的样品不可用荧光测试 消毒处理被污染的盛器和物品HIV抗体检测—试剂,1、筛查试剂要求 国家食品药品监督管理局注册批准 批批检合格 临床评估质量优良 在有效期内 2、确认试剂要求 国家食品药品监督管理局注册批准 种类：免疫印迹、条带免疫、免疫荧光 常用试剂：免疫印迹,HIV抗体检测—试剂,严格按照试剂说明书操作 防止交叉感染 严格遵守实验室操作规程,HIV抗体检测—筛查试验检测程序,筛查试验： （1）阴性反应，报告HIV抗体阴性 （2）阳性反应，须进行重复检测 重复检测： （1）采用原有试剂和另外一种不同原理或不同 厂家的试剂 （2）如两种试剂均阴性，报告HIV抗体阴性 （3）如均阳性或一阴一阳，送确认实验室确认， 新采标本和原标本一并送检,HIV抗体检测—筛查试验的流程图,样品,筛查检测,,重复检测,筛查试剂,,阳性反应,阴性反应,一阴一阳,,,,,,均阴性反应,均阳性反应,,,,阴性报告,送确认实验室 进行确认,,,,,,,,,,原有试剂加另外一种筛查试剂,,HIV抗体检测确认试验,试剂：有免疫印迹试剂HIV1+2混合型和单一型 1.用HIV1+2混合型 阴性，报告HIV抗体阴性 阳性，报告HIV-1抗体阳性 如不满足阳性标准，判为HIV抗体不确定 2.如出现HIV-2型的特异性指标条带用HIV-2单一型 阴性，报告HIV-2抗体阴性 阳性，报告HIV-2抗体阳性 如需鉴别，应进行核酸序列分析,HIV抗体检测确认试验流程图,免疫印迹法（HIV1/2混合型）,阴性反应,HIV-1阳性反应,不确定反应,出现HIV-2指示条带,免疫印迹法（HIV-2）,阳性反应,阴性反应,报告HIV-2血清学阳性 必要时测核酸,不确定反应,阴性反应,阴性报告,HIV-1阳性报告,每3个月随访一次，共2次，仍属可疑，则作阴性报告；如随访期间出现阳性反应则报告阳性,,,,,,,,,,,,,,,,,,HIV抗体检测—确认试验结果和判定,1.HIV-1抗体阳性 至少有二条Env带出现或至少有一条Env带和P24 带同时出现 2.HIV-2抗体阳性：同时符合以下二条标准 符合WHO阳性判定标准，即出现至少二条Env带 符合试剂盒提供的阳性判定标准 3.HIV抗体阴性 无HIV抗体特异带出现 4.HIV抗体不确定 出现HIV抗体特异带，但不足以判阳性,两种不同结构蛋白,检测结果的报告和处理—HIV抗体筛查,1.筛查试验阴性出具HIV抗体阴性报告 2.筛查试验阳性可出具“HIV抗体待复查”报告 （附表1），不能出阳性报告。

尽快进行以下 处理： 填写HIV抗体复查送检单（附表2） 尽可能重新采集受检者的血样 将两份血样（或原血样）连同复查送检单一并送HIV筛查中心实验室，转送确认实验室或直接送确认实验室确认,检测结果的报告和处理—HIV抗体筛查,筛查中心实验室尽快用两种试剂复检 如结果均阳性或一阴一阳，则将标本和复查单一 并送确认实验室确认 如结果均为阴性，在HIV抗体筛查报告上盖上“HIV 抗体阴性”，及时将结果反馈送检单位，不必再送 确认实验室 做好检测后咨询,检测结果的报告和处理—HIV抗体确认,1、HIV抗体阳性应出具阳性确认报告（附表 3），并做好咨询，保密和报告工作 2、HIV抗体阴性应出具阴性确认报告，如近 期有高危行为，为排除“窗口期”的可能， 可以进行P24抗原或HIV核酸检测或2-3个 月后再做抗体检测,检测结果的报告和处理—HIV抗体确认,3、HIV抗体不确定，应出具HIV抗体不确定确认报 告，在备注中应注明“3个月后复查”，同时进行 以下处理： -随访复查：每3个月随访复查一次，连续2次，共6 个月仍呈不确定或阴性，则报告HIV阴性；如 随访期间发生带型进展，符合阳性判定则报告 HIV-1或HIV-2抗体阳性 -必要时可做P24抗原或HIV核酸测定，结果只作辅 助诊断依据，确认报告要依据血清学随访结果 -做好检测后咨询,HIV抗体检测情况报告流程图,艾滋病筛查实验室,艾滋病筛查中心实验室,艾滋病确认实验室,艾滋病确认中心实验室,同级卫生行政部门,国家艾滋病参比实验室,省级卫生行政部门,中国CDC性艾中心,,,,,,,,,每季首月5日前报告 上季检测情况,每季首月10日前 报告上季检测情况,每季首月15日前 报告上季检测情况,每季首月20日前 报告上季检测情况,,,,没有艾 滋病筛 查中心 实验室 的地区,每季首月5日前 报告上季检测情况,HIV感染监测工作中实验室检测策略,符合以下三条，可按HIV感染报告疫情。

1.艾滋病确认中心实验室条件： ＊本年度质量考评成绩优良 ＊有严格的实验室质量管理制度 2.HIV抗体筛查试剂条件 ＊ 经过国家食品药品监督管理局批准或注 册，批批检验合格，临床评估质量优良 ＊复检用两种不同原理或不同厂家的筛查试 剂（包括进口或国产第三代ELISA试剂）,HIV感染监测工作中实验室检测策略,3.HIV抗体阳性的判定条件 ＊两种试剂复检均为阳性，且第三代ELISA试 剂复检样品OD值与临界值（Cutoff）的比 值（S/CO）≥6.0 ＊两种试剂复检均为阳性，且第三代ELISA试 剂复检样品S/CO比值在1.0-6.0之间，或两 种试剂复检结果一阴一阳，应进一步确认,检测及疫情报告流程图,送检样品,用两种不同原理或不同厂家的试剂复测（其中包括第三代ELISA试剂）,第三代ELISA试剂复测 结果的S/CO比值≥6.0,第三代ELISA试剂复测结果 的S/CO比值1.0~6.0之间,确认试验,判断阳性，上报疫情,判断阴性,,,,,,,,,,,,,,,,,,,阳性反应,选用筛查试剂,阴性反应,两种均阳性,一阴一阳,两种均阴性,阳性,阴性,P24抗原检测,1、适用范围： HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断 HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助 鉴别诊断 第四代HIV-1抗原/抗体ELISA检测呈阳性 反应，但确认试剂阴性者的辅助诊断 监测病程进展和抗病毒治疗效果,P24抗原检测,2、试剂：经批准注册的ELISA双抗体夹心法 试剂 3、操作：严格按照试剂盒说明书 4、结果报告和解释： ＊P24抗原阳性必须经过中和试验确认 ＊P24抗原阳性仅作HIV感染的辅助诊 断依据，不能确诊 ＊P24抗原阴性只表示本试验无反应，不能 排除HIV感染,HIV核酸检测—实验室条件,功能分区：在不同的房间分别设有试剂准备区、样品处理区，扩增区和扩增产物分析区四个功能不同的独立工作去 工作人员：必须具有艾滋病实验室的上岗资格，一并接受过安全及操作技术培训 设施和设备：根据检测项目配备相应的设施和设备 各区的设施和设备为区域性专用 各区备有专用工作服、帽子和鞋套，必要 时配备防紫外线眼镜或面罩,HIV核酸检测—方法和试剂,分类：定性和定量检测两类 定性：HIV感染的辅助诊断 定量：监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗 效果 方法： 定性：常用PCR或RT-PCR技术 定量：常用逆转录PCR实验（RT-PCR）核酸序 列扩增实验（NASBA）分支DNA杂交实 验（bDNA） 试剂：通用的扩增试剂，引物来自文献或自行设 计,HIV核酸检测—检测程序,样品的采集和处理 核酸提取 试剂配置 加样和扩增 扩增产物测定和分析 定量检测,HIV核酸检测—结果的判定和报告,1、定性检测：根据扩增产物的电泳图像判定 阳性结果要进行核酸序列测定确定 阴性：报告本次实验结果阴性，不排除 HIV感染 阳性：作为诊断HIV感染的辅助指标，不 单独用于HIV感染的诊断 报告定性检测结果时注明反应条件和所使用的引物序列,HIV核酸检测—结果的判定和报告,2、定量检测： ＊按照仪器读数报告结果，注明试验方法、 样品种类和样品量 ＊注明最低检测限水平，低于最低检测限的 结果不能排除HIV感染 ＊附上仪器打印的数据,HIV核酸检测—实验室管理,制定严格的实验室管理制度，并严格遵 照执行。

生物安全 严格执行分区制度 仪器和材料的专用制度 单向流向制度，不得逆向流动 废弃物处理制度 质量控制和评价,艾滋病检测实验室安全防护,建立安全制度 人员管理和培训 安全保障措施 - 个人保健 - 带入或带出实验室的物品 - 减少利器的使用 - HIV消毒方法 实验室事故处理 - 紧急处理措施 - 事故登记（附表5） - 报告和检测 - HIV职业暴露后的药物预防（附表6）,艾滋病实验室质量管理,质量保证（QA） 质量控制（QO） 质量评价（EQA）,HIV确认实验室质量考评办法,考评目的 - 评价HIV抗体检测和确认的水平，为各实验室提 供外部质控机制，为检查和重新认定资格提供 技术依据 - 促进实验室建设，逐步完善实验室功能 - 提高实验室技术和管理水平 考评对象及组织单位 - 所有经正式批准的实验室为受考评单位 - 中国CDC组织并委托性病艾滋病中心负责考评 工作 - 考评每年一次,HIV确认实验室质量考评办法,考评内容和方式 - 内容：HIV抗体筛查和确认技术，结果报告和各 项职能工作的完成情况 - 方式：实验操作；问卷调查；现场抽查 考评工作程序 - 审评专家组确定考评的具体实施方案，问卷调查内容及有 关事宜 - 制备考评血清（6-10份样），随机编号发给参评实验室， 同时发给考评问卷调查表 - 参评实验室检测考评血清 - 按规定期限上报检测报告和问卷调查表 - 检测结果的评判 - 结果反馈,HIV确认实验室质量考评办法,考评结果的判定 考评结果的处理 - 对考评合格实验室的资格认证和鼓励 - 对考核成绩较差的实验室进行以下整顿： ⑴考评不及格、核查确有质量问题。