《制备HPLC技术》PPT课件
49页1、制备备HPLC技术术主要内容第一部分.制备HPLC概述第二部分.制备HPLC技术问题 上样 条件的选择 馏分的收集 循环色谱 柱切换第一部分制备HPLC概述 制备型液相色谱:结构与分析型一样,但泵流量大、进样量大、采用制备柱;柱后馏分收集器。制备HPLC概述制备HPLC概述制备HPLC与 分析HPL比较目的填料流量流通池联系制备HPLC样品中特定成分的高纯度获取,大量、廉价的制备20以上为佳0.1-150ml/min最大允许流速可为150mL/min在进行制备HPLC之前,常先进行分析HPLC实验 ,对分析方法进行优化、放大应用到制备HPLC中,详见后。分析HPLC定性分析:检测 的灵敏度定量分析:分离度、再现性3-50.001-9.999ml/min一般的分析池的最大允许流速仅为5mL/min,或者10mL/min制备HPLC概述主要结构单元输液部:输液泵shimadzu LC-6AD(适用于分析-半制备,再循环半制备)分离部:制备柱内径2050mm,柱长50cm。检测部:检测器shimadzuSPD-M10Avp馏分部:馏分收集器shimadzuFRC-10A制备HPLC概述制备泵
2、的耐压 制备HPLC系统因制备柱的填料很细,分离度好,同时反压很高,整个系统对压力很敏感,制备泵要求能在制定的恒流量下, 克服100 - 150 bars反压 色谱柱的柱容量(柱负荷) 对分析柱:不影响柱效时的最大进样量; 对制备柱:不影响收集物纯度时的最大进样量; 超载:进样量超过柱容量。柱效迅速下降,峰变宽。 超载可提高制备效率,以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。制备HPLC概述柱容量制备HPLC概述分离效能取决于分离速度、分辨率和上样量。对某一个分离参数进行优化常会影响到其他分离参数。增加洗脱液流速会降低分辨率,分辨率也会因上样量过大而下降。但分辨能力并不总是制备HPLC首要考虑的因素,制备型HPLC应首先具有经济、快速的生产所需产品的能力。分辨率速度载样量制备HPLC概述应用举例在许多分离工作中,需要从大量的物质中分离纯化不足的所需成分,这种分离工作十分困难,在纯化的最后阶段常需使用m或更小颗粒的高效填料。为获得所需微量组分,可采用如下手段:制备型分离-半制备型分离-分析型分离-产物。 制备HPLC有关技术问题 第二部分制备HPLC技术问题超量载样在分析液相中色谱柱的典
3、型进样量是微克级,甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1:100000,进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积(小于1:100)。在这种条件下,会达到很好的分离效果,峰形尖锐并且很对称。而在制备液相中,最大的区别就是超量进样。制备HPLC采用超量进样的原因:大样品量的纯化方法分析系统的放大:使用直径更大的制备柱、更高的流速,根据色谱柱的长度增加进样量并保持样品浓度不变,峰形尖锐而对称。需大型的色谱柱和大量的溶剂来分离较少的样品,不经济色谱柱超量载样:相同的条件下超量进样浓缩法和体积超载法制备HPLC技术问题超量载样浓缩法超量载样体积法超量载样提高样品的浓度,保持进样体积不变;取决于组分在流动相中的溶解度;生产效率决定于选择性;受固定相粒度大小的影响不大取决于进样体积,生产效率决定于制备柱直径,需要小颗粒填料。VS容量因子降低,峰形从高斯曲线变为三角形峰高不变,峰变宽并呈矩形制备HPLC技术问题超量载样注意!应尽可能选用流动相来溶解样品,但应注意样品在流动相中应有良好的溶解度。同时,若样品体积太大,分辨能力就会下降;若样品过浓,则可能在柱的顶部形成沉淀。尽管如此,为每次可分离得到更多的
4、样品,还是应在小体积的流动相中溶解较多的样品。可将样品溶于不同于流动相的溶剂,但用此法时需很谨慎。制备HPLC技术问题超量载样 分析HPLC进样量远远小于柱子的载样极限, 样品在柱子里的分配几乎是理想的, 而制备通常都会对上样到一定的过载, 主要组分的量在柱子里分配已经和分析情况很不相同, 通常在增加到一定进样量后, 分离效果都会不同程度的变差 ! 制备HPLC的首要问题是快速、高效的制备色谱纯的产品! 分离度在制备HPLC中并不是首先要关注的问题,色谱峰会比较难看!制备HPLC技术问题样品的纯化 在利用制备HPLC最终纯化步骤前做一些初步纯化是提高效率降低成本的优化措施. 比如最终纯化通常有一定的分离难度,又希望有足够的收率,所以使用的仪器和填料可能是昂贵的.未经预纯化的样品,尤其是天然产物,含有大量的可能在填料表面不可逆吸附的组分,直接进样,可导致昂贵的填料很快失效. 此外,大量的杂质降低对目标产物分离度,因此限制了进样量和生产效率. 同时分别用正反相色谱去除前后杂,比单用一种色谱得到目标产物更简单易行. 总之,制备色谱尤其是工业色谱的目标不仅是找到技术上可行的方法,而且要综合考虑
5、成本.制备HPLC技术问题应用举例 样品如果溶解度太低如何上制备?在制备系统溶剂中,样品如果溶解度太低,估计,该如何处理?(70甲醇水)不可能为了50mg 而上1000ml溶液吧?如果用纯甲醇做溶剂,会导致样品析出,如果用纯甲醇做流动相,那柱子根本无保留!问题样品可能某种晶型难溶,这样可以加入其他溶剂(如丙酮等)以助溶如果不是蛋白质等大分子,试一下DMSO或DMF加入少量二氯甲烷,也有助于改善样品的溶解性 对溶解不好的小极性分子更常用的是THF/H2O 流动相是甲醇:水:。应该能用甲醇溶样。因为流动相很快,能很快稀释样品溶液 另外制备HPLC中常见而又不太好解决的问题回答制备HPLC技术问题应用举例可以采用预装柱形式:先将样品和少量填料(粉)混合,搅拌均匀,然后将此部分硅胶装到一小柱内。在洗脱时,先让洗脱液通过此小柱,然后在上分离柱(干法上样)。此方法对不溶性样品或不能用溶剂溶解的样品很有效,同时分离效果也会提高 用正相色谱比用反相色谱更适合这个样品。一是解决了溶解的问题。二是分离度方面有意想不到的收获。如果多肽类,调一下PH值常常会得到很满意的效果 首先如果调节PH值可以溶最好,不行
《《制备HPLC技术》PPT课件》由会员xian****812分享,可在线阅读,更多相关《《制备HPLC技术》PPT课件》请在金锄头文库上搜索。
《血液正常人体》PPT课件
《行业标准代号》PPT课件
编电渣压力焊作业指导书
石板水电站2机组大修施工组织设计(含作业指导书)
工区钻孔灌注桩作业指导书
楼住宅工程质量分户验收记录W
公路工程试验检测仪器设备校准指南-a4表格》
建安全内业作业指导书
水利水电工程施工合同条件(技术条款)
楼钢筋电渣压力焊接头检验批质量验收记录
多功能平面并联机械手示教仪设计说明书
歪屋面歪板波瓦工程考验批质验收记录
中医基础理论复习资料之考纲大要1
堤防土方工程展土厚度及展料边线考验记录表
中海物业管理培训手册
台县第三批教师及医务人员项目施工组织设计
电渣压力焊焊接分项工程承包施工合同(最新版)
灯具厂质量手册
聚氰胺二期工程建设项目管理手册
宝恒-水木清华项目总承包工程施工-补充合同
2024-05-19 5页
2024-05-19 8页
2024-05-19 5页
2024-05-19 7页
2024-05-19 5页
2024-05-19 5页
2024-05-19 14页
2024-05-19 21页
2024-05-19 13页
2024-05-19 15页