sds-page标准操作规程
4页1、SDS-PAGE标准操作规程一、 试剂(一)储存液(1) 2M Tris-HCl (pH8.8),100ml称取24.2g Tris碱;加50ml蒸馏水;缓慢的加浓盐酸至pH8.8(约加4ml);让溶液冷却至室温,pH将会升高;加蒸馏水至100ml。(2) 1M Tris-HCl(pH6.8),100ml称取12.1g Tris碱;加50ml蒸馏水;缓慢的加浓盐酸至pH6.8(约加8ml);让溶液冷却至室温,pH将会升高;加蒸馏水至100ml。(3) 10%(w/v)SDS,100ml。室温保存称取10g的SDS;加蒸馏水至总量为100ml。(4) 50%(v/v)甘油,100ml倒取50ml 100%的甘油;加入50ml蒸馏水。(5) 1%(w/v)溴酚蓝,10ml称取100mg溴酚蓝;加蒸馏水至10ml,搅拌直到完全溶解;过滤除去聚合的染料。(二)工作液(1) 30%(w/v)丙烯酰胺/0.8%(w/v)双丙烯酰胺30g丙烯酰胺0.8g双丙烯酰胺注意:未聚合的丙烯酰胺是一种皮肤刺激物和神经毒素,操作时必须戴手套在通风柜操作,加蒸馏水至100ml,缓慢搅拌直至丙烯酰胺粉末完全溶解,过
2、0.45m滤膜。可在4存放数月。(2) 4Tris-Cl/SDS (pH8.8 1.5M Tris-Cl Containing 0.4%SDS) 91g Tris base2g SDS 加水300ml,用1N HCl调pH至8.8,再加水至500ml过0.45m滤膜,4存放(3) 4Tris-Cl/SDS (pH6.8 0.5M Tris-Cl Containing 0.4%SDS)6.05g Tris base0.4g SDS 加水40ml,用1N HCl调pH至6.8,再加水至100ml过0.45m滤膜,4存放(4) 10%过硫酸铵APS0.1g过硫酸铵1ml蒸馏水长期不用应-20干燥分装保存,临用前再加D.W。(5) 5电泳缓冲液15.1g Tris碱 72.0g甘氨酸 5.0g SDS 加蒸馏水至1L,pH应该在8.3左右。(6) 5样品缓冲液,10ml0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8) 60mmol/L5ml 50%的甘油 25%2ml 10%的SDS 2%0.5ml 2-巯基乙醇 14.4mmol/L1ml 1%溴酚蓝 0.1%0.9ml的蒸馏水可在4
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