脓汁和粪便标本中病原菌的检测.ppt

器材准备器材准备半固体培养物半固体培养物4 4支，药敏试验培养物支，药敏试验培养物4 4个，微量发酵管培养物个，微量发酵管培养物1 1套套, ,玻片玻片4 4个v脓汁和粪便标本中病原菌的检测（六）™药敏实验结果分析™糖发酵、动力实验结果分析™玻片凝集试验™高压蒸汽灭菌™细菌综合性实验总结™实验报告撰写™ 细菌感染的检查方法和防治原则（录像）™洗刷药敏试验结果用尺子量抑菌圈直径（单位毫米）用尺子量抑菌圈直径（单位毫米）常用药敏试验纸片判断标准常用药敏试验纸片判断标准P P2121抗菌药物 纸片含药量 抑菌圈直径(mm) 耐药 中度敏感 敏感青霉素G(葡萄球菌) 10单位 ≤28 - ≥29链霉素 10微克 ≤11 12～14 ≥15庆大霉素 10微克 ≤12 13～14 ≥15四环素 30微克 ≤14 15～18 ≥19氯霉素 30微克 ≤12 13～17 ≥18磺胺 300微克 ≤12 13～16 ≥17药敏实验结果分析药敏实验结果分析青霉素链霉素庆大霉素黄色细菌白色细菌紫黑细菌粉红细菌 注：耐药－，中度敏感±，敏感＋。

抗菌素药敏试验纸片法结果vG+球菌对青霉素和链霉素敏感 vG-杆菌对青霉素耐药，对链霉素敏感vG+球菌和G-杆菌对广谱抗菌素庆大霉素都敏感糖发酵、动力试验结果判断 反应现象 结果描述 符号培养基变色无气泡 分解×糖产酸不产气 ＋培养基变色有气泡 分解×糖产酸又产气 ⊕培养基不变色 不分解×糖 －细菌扩散生长,培基混浊 细菌有鞭毛 ＋沿接种线生长,培基清澈透明 细菌无鞭毛 －糖发酵试验结果平皿水平放置，观察结果平皿水平放置，观察结果半固体穿刺培养结果对光上下移动至合适观察位置，观察结果对光上下移动至合适观察位置，观察结果肠道杆菌科各菌属生化反应鉴别表肠道杆菌科各菌属生化反应鉴别表 葡萄糖 乳糖 麦芽糖 甘露醇 蔗糖 半固体埃希菌属 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ √ +志贺菌属 + √ √ +/- -/+ -沙门菌属 ⊕/+ - ⊕ ⊕ - + 霍乱弧菌 + - + + + +变形杆菌属 ⊕ - √ - √ +注： + 产酸或阳性， ⊕ 产酸产气，- 阴性， +/- 多数阳性， -/+ 多数阴性 √ 不确定。

玻片凝集试验玻片凝集试验 Slide Agglutination TestSlide Agglutination Testv在适量电解质存在的情况下，颗粒性抗原(细菌)与特异性抗体混合，如果比例合适，则出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应™取洁净的载玻片一张，将玻片磨面近端近端设为对照区，滴加生理盐水15ul远端远端设为试验区，滴加福氏志贺菌诊断血清15ul，™用接种环分别取粉红色菌苔，约2个小菌落的菌量，研磨于盐水或血清内，混合均匀※载玻片反复倾侧，让菌液充分混 匀，凝集速度更快、结果更清楚※菌液凝集者记为阳性阳性，菌液均匀混浊记为阴性阴性玻片凝集结果判定玻片来回倾侧玻片来回倾侧数次，肉眼观数次，肉眼观察；察；2～～3分钟分钟内仍不出现凝内仍不出现凝集者集者,可认为阴可认为阴性性(－－)……;菌液混菌液混浊，少量絮浊，少量絮状状,25%凝集凝集,阳性阳性(＋＋)……;菌液轻菌液轻度混浊度混浊,絮状絮状凝集块较小凝集块较小,阳性阳性(＋＋＋＋)……;菌液澄菌液澄清清,有明显絮有明显絮片片,75%凝集凝集,阳性阳性(＋＋＋＋＋＋)实验结果错误的分析v纯培养时，菌落挑错了v无菌操作不严格，污染杂菌。

v接种时未协调好，接种错误生物安全警告v本次实验操作，可产生几十个微生物气溶胶颗粒v气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡vPike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的v实验时应坐着，在火焰周围10～20厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌灭菌 1、药敏试验平板、动力试验半固体琼脂、微量糖发酵管→高压蒸汽灭菌 !2、器材收摊入柜前，接种环，接种针必须再次烧灼灭菌！实验总结实验总结 v采用平板划线分离法，从浓汁标本中分离出黄色和白色两种菌落显微镜下，这两株细菌均为G G+ +球菌球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌；结合菌落颜色，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌和白白色葡萄球菌色葡萄球菌通过血浆凝固酶试验鉴别，金黄色葡萄球菌是致病菌致病菌v采用伊红美蓝平板，从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光泽菌落和粉红色半透明菌落紫黑色菌落是能分解乳糖的大肠埃希菌大肠埃希菌( (非致病菌) )粉红色菌落是不能分解乳糖的致病菌致病菌显微镜下，它们都是G G- -杆菌杆菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。

经糖发酵试验，半固体动力试验，血清学试验结果鉴定，它们分别是大肠埃希大肠埃希菌菌和福氏志贺菌福氏志贺菌实验结果总结表实验结果总结表标本标本菌落菌落形态形态血浆血浆凝固酶凝固酶葡葡 乳乳 动动凝集凝集试验试验青青 链链 庆庆结论结论黄色G+球 ++++金黄色葡萄球菌脓汁白色G+球-+++白色葡萄球菌紫黑 G－杆 ⊕ ⊕+-++大肠埃希菌粪便粉红 G－杆+--+-++福氏志贺菌细菌鉴定的原则及基本方法v必须用纯的细菌培养物作鉴定因为不同的细菌生化反应结果相差较大，而反应结果是以阳性或阴性表示的，一旦用混合菌做生化反应，结果不可分析v鉴定试验的选择：测定细菌的实验方法很多，根据鉴定目的选择适当的试验项目，既能完成鉴定，项目又尽可能少一般考虑以下几个问题™选择有价值的试验：鉴别两种细菌选择的试验应该其一为阳性，另一为阴性，且阳性和阴性的概率大于90%否则，试验无鉴别价值™选择快速简便的试验因为是常规实验室，选择的方法应快速方便，如鞭毛染色、氧化酶、凝固酶等应为首选方法鉴定一种细菌如果有几种特异方法,只选一两种只选一两种,多选无价值™测定细菌的一种生物特性可能有几种不同方法应该了解所用方法的敏感性，否则会导致错误的鉴定。

思考题v如果细菌生化反应结果不佳，原因何在?v报告纸片法药敏试验结果，是否符合你所鉴定的细菌的药敏特性?v玻片凝集试验观察完毕，应将载玻片立即放入消毒缸内，为什么?v怎么设计一个实验，对伤寒沙门菌进行分离和鉴定? 常见病原性球菌的检查程序常见病原性球菌的检查程序P47P47：： 直接涂片、革兰染色、镜检直接涂片、革兰染色、镜检脓汁、痰、咽部分泌物脓汁、痰、咽部分泌物 观察菌落性状、溶血性、色素观察菌落性状、溶血性、色素 血琼脂平板培养血琼脂平板培养 涂片染色镜检涂片染色镜检 挑取可疑菌落挑取可疑菌落 生化反应生化反应 ↑ ↑ 纯培养纯培养 动物实验动物实验 药敏实验药敏实验血液、穿刺液血液、穿刺液 → → 肉汤增菌培养肉汤增菌培养 → → 培养液涂片染色境检培养液涂片染色境检 常见肠道致病菌的检查程序常见肠道致病菌的检查程序P48P48：：粪便粪便 → → SSSS琼脂、伊红美蓝平板培养琼脂、伊红美蓝平板培养 → → 挑取可疑菌落挑取可疑菌落 ↑ ↓ ↑ ↓ 血清学鉴定血清学鉴定 血、骨髓血、骨髓 → → 增菌培养增菌培养 双糖铁培养基双糖铁培养基 染色镜检染色镜检 生化反应生化反应 实验报告《脓汁和粪便标本中病原菌的检测》 年级专业 学号 姓名1、实验目的2、实验器材3、方法与步骤4、结果与讨论。

™以小组小组的实验结果为基础™主要是从2种标本获得4 4种菌的实验结果种菌的实验结果™讨论是对实验结果的分析，应客观、严谨，围绕主题，突出重点™结论应该明确，脓汁标本检测到什么病原菌？粪便标本检测到什么病原菌？™结果不正确也要分析原因结果不正确也要分析原因如何撰写科研论文P57v不论人们是否完全赞成“要么发表、要么销毁”的格言，但毫无疑问，科学研究的目的就是要把研究成果发表出来一般来说，评价科学工作者的工作，主要不是看他们在实验室内灵巧的操作，也不是看他们在广阔或狭窄的科学领域内掌握知识的多少，也不是看他们的智能或魅力，而主要是根据他们所发表的文章来估量他们可能由此而成名，或仍然默默无闻因此，写出能充分展示自己工作、引起同行注意的论文是一个科研工作者必备的素质 v一项科学实验，不论它的结果多么惊人，只有到它发表出来时才算完成因此对科学工作者来说，他不仅必须“研究”科学，而且必须把科研成果“写”出来要写好一篇科学论文，作者必须准确地知道他要写的是什么以及为什么要这么写v科学论文是叙述原始研究结果而写成并发表的报告具体地说，一篇公认的原始科学论文，必须是首次公布的，它应提供足够的资料，以使同行们能够：™(1)评价观察到的结果；™(2)重复实验；™(3)评价推理过程，而且原始科学论文还必须能为人们所接受，基本上可供科学界永久地、不受限制地利用，要有严密的思维特性、逻辑性、清晰性和准确性。

v科研论文内容P57™标题 ™摘要™引言™材料与方法™结果™讨论™参考文献医学微生物学实验综合性实验一v脓汁和粪便标本中病原菌的检测（六）™药敏实验结果分析™糖发酵、动力实验结果分析™玻片凝集试验™灭菌™细菌综合性实验总结™实验报告撰写™ 细菌感染的检查方法和防治原则（录像）™洗刷Thank you !Thank you !欢迎欢迎提提问！问！常用器材摆放顺序：电源插座常用器材摆放顺序：电源插座→试管架试管架→酒精灯酒精灯→污物盘试管架上器材：靠近插座一侧第试管架上器材：靠近插座一侧第1 1列放置接种针列放置接种针, ,第第2 2列放置列放置接种环，另一侧中间两行放置油性笔和打火机接种环，另一侧中间两行放置油性笔和打火机※※器材使用后，必须放回原处，依次摆整齐器材使用后，必须放回原处，依次摆整齐实验器材实验器材 整齐有序整齐有序。