大鼠葡萄糖6磷酸脱氢酶G6PD酶联免疫吸附测定试剂盒.doc

丸氯葡萄糖6确酸脱氢酶（G6PD）酶联免疫吸附测定试剂盒使用说朗书本试利盒仅供体外研兗使用、不用于临床诊断！预期应用ELISA冻定量测文大亂组织匀浆或其它相关生杨液体中G6PD合量实验原理用纯化的G6PD抗体包彼微孔板，制成阂相栽体，往徴孔中依次加入棕本或栋准％、生物素化的G6PD抗体、 HRP栋记的桌和素，经过彻底洗涤后用底杨（TMB）显色TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并柱酸 的作用下转化成最终的黄色颜色的深肉和样品中的G6PD呈正相关用酶标仪亦450nm波长下测定狹光度（0D值），计算样品滚度试利盒组成及试利配制仁 酶栋板：一块（96孔）2、 栋准％ （冻干凤）：2瓶，请临用＜ 15分钟內紀制备瓶以样品种粹液科科至1ml,盖好后•室温挣置丸 约10分钟，同肘反复颠倒/搓动以助落鮮，其浓度20 ng/ml ,然后做糸列徧比稀粹（注：不要直樓在板中进 行 信比稀粹）,分别配制成 20 ng/ml , 10 ng/ml , 5 ng/ml , 2.5 ng/ml , 1.25 ng/ml , 0.625 ng/ml , 0.312 ng/ml, 样火稀斡液直接作为空匂孔On g/ml。

如配制10 ng/ml 准凤：取0.5ml （不要少于0.5ml ） 2 On g/ml 的上述栋准洗加入含有0.5ml样芫种粹液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推3、 样品种释液：1 x20ml o4、 检测科猝液A： 1x10ml o5、 检测种猝液B： 1x10ml o6、 检测溶液A： 1 x120/^ （1:100） o临用前以检测种猝液A1:10 0稀释（如：10检测嫁液A / 990检测稀 猝液A）,充分混匀，种猝前很据预先计算好的每次实验所需的卷量紀制 （100/孔），卖际配制肘应多紀制 0.1-0.2ml o7、 检测溶液B： 1x120/瓶（1:100） o临用前以检测种猝液B 1:100稀粹种粹方法同检测溶液A8、 底扬溶液：1x10ml/瓶9、 浓洗涤液：1x30ml/瓶，使用肘每瓶用蒸翎水种粹25得10、 终止液：1x10ml/^ （2 mol/L H2SO4）11、 覆膜：5張12、使用说朗书：1份t备物品仁 酶棕仪（建议仪器使用裔提前预热）2, 微量加液器及吸头，EP管3、 蒸镭水或去富子水，滤绒栋本的采集及保存仁 组织匀象：将动物的组织栋本丸用PBS洗涤，去除多余血液，匀浆化后 5-10 ml PBS中于-20 °C放置 过夜，第二天，经过二次反复冻馳破膜，将•匀浆物5000xg畜心5分钟，取上请用可检测。

2, 其它生扬栋本：请1000g畜心20分钟，取上请即可检测，或将•上请置于・20或-80保存，但应避免反复 冻舷注：以上栋本均应密封侏存，4保存应小于1周，・20不应起过1个月，・80不应超过2个月；襟作步骤 实验开始侖，各试利均应平衡至室温，试利不能直接亦37溶鮮；试剂或样品配制肘，均需丸分混匀，混勻肘 尽量避免起泡实脸侖应预测样品舍量，如样品浓度过為肘，应对样％进行种猝，以使种猝后的样芫符合试剂 盒的检测范围，计算时再乘以相应的科猝馆数仁 加样：分别设空匂孔、栋准孔、待测样凤孔空匂孔加样品稀释液100,余孔分别加棕准為或待测样品100 ,注意不要有毛泡，加样肘将样品加于酶栋板底部，尽量不紐及孔壁，轻轻晃动混勻，酶栋板加上盖或覆 膜，37温育2小肘为保证实殓结果有效性，毎次实验请使用新的栋准品落液2、 弃去液体，剋干，不用洗涤备孔加检测嫁液A工作液100 （临用前配制），酶捺妆加上覆膜，37温肓1 /」、肘O3、 疥去孔内液体，甩干，洗板3次，毎次没泡1-2分钟，大约400/每孔，甩干（也可轻拍将■孔内液体拍干）4、 备孔加检测溶液B工作液（临用前紀制）100,加上覆膜，37温肓1小肘。

5、 弃去孔内液体，甩干，洗妆5次，方法同步骤36、 毎孔加底物溶液90,酶栋板加上覆膜37避光显色（反应时间控制A 15-30分钟，当栋准孔的前3-4孔有 朗显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不朗显肘，即可终止）7、 毎孔加终止溶液50,终止反应，此时蓝色立转黄色终止液的加入顺序应尽量£底扬液的加入顺序相同O8、 立印用酶捺仪A. 450nm波长测量各孔的光密度（OD值）注：1、 试利准备：所有试剂征使用1?应平衡至室温，使用后请立即按照说朗书要求保存试剂卖验操作中请使用 -次性的吸头，避免交叉污染2, 加样：加样或加试剂肘，第一个孔与最后一个孔加样之间的肘间间隔如果丈大，将会导敷不同的“预温f "肘间，从而朗显地影响到测量值的准确性及重复性一次加样肘间 （包括栋准凤及所有样凤）最好控制在10分钟内推荐设置复孔进行卖验3、 温育：为防止样凤蒸发，卖验肘将加上盖或覆膜的酶栋板置于谡盒內，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进 行下步操作，任何肘侯都应避免酶栋扱处于干爆状态；同时应严格運守给定的温肓肘间和温度4、 洗涤：洗涤过程中反应孔中戎倉的洗涤液应亦滤纨上拍干，勿将滤绒直棲放入反应孔中吸水，同时要苗除 板底戎紆的液体和手指印，避免影响最后的酶捺仪謨数。

5、 试利配制：Detectio nA及Detectio n B亦使用请手甩几下或少肘离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积 到管底栋准％、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量紀制使用，并使用相应的稀称液配 制，不能混淆请精确配制栋准品及工作液，尽量不要微量配制（如浹取检测落液A肘，一次不要小于10 ）,以避免由于不准确种 粹而岌成浓度谖差；请勿重复使用己种猝过的栋准洗、枚测溶液A工作液、检测落液B工作液6、 反应肘问的控制：加入底物后请定肘观矗反应孔的颜色支化 （比如，毎隔10分钟），如颜色较深，请提 侖加入终止液终止反应，避免及应过强从而影响酶栋仪光密度读数7、 底扬：底物请避光保存，亦储存和厦有肘避免强光直接照射洗板方法仁 手工洗板方法：将•推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔內，没泡1-2分钟，吸去（不可紐及板壁）或甩掉 酶栋板内的液体，亦实验台上铺垫几层吸水纨，酶栋扱朝下用力拍几次；根据需要，重复此过程数次2、自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用列正式实验过程中特异性本试利盒可同时检测重组•或天然的丸亂G6PD ,且与其它相关蛋自无交叉反应计算各栋准品及样本0D值扣除空勺孔0D值后作图（七点图），如役置复孔，则应取其平均值计算。

以栋准品 的浓度为纵坐栋（对数坐栋），0D值为橫坐栋（对数坐捺），在对数坐栋绒上绘出栋准曲线推荐使用专 业制作曲线软件进行分析，如curve expert 1.3 ,才艮据样品0D值，由栋准曲线查出相应的浓度，乘以种猝得 数；或用栋准物的浓度与0D值计算出栋准曲线的回归方程式，将样品的0D值代入方程式，计算出样洗浓 度，再乘以科粹馆数，印为样品的实际浓度说明1. 亦储存及孵肓过程中避免将试利暴獴亦强光中所有试利緬盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生 物的污染，因为蛋自水鮮酶的干扰将•导玫出现错誤的结果2. 小心吸取试利并严格運今给定的孵育对间和温度请注意在吸取栋本/栋准品，酶结合物或底物对，第一 个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果丈丸，将•会导致不同的“预孵肓"时间，从而朗显地影响到测量值 的准确性及重复性而且，洗涤不丸分将彩响试验结果3. 试剂盒保存：部分试剂保存于-20 °C,部分试利保存于2-8 °C ,具体以栋签上的栋示为准4. 浓洗涤液会有盐析出，稀粹时可在水浴中加温助嫁5. 別开启的酶朕板孔中可能会合有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结黑造成任何影响6. 中、英丈说朗书可能会有不一玫之处，请以英文说朋书为准。

7. 所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测裝置8. 有效期：6个月。