临床免疫学检验SOP_检验科SOP_13
56页1、月亮县中医院项 目文件编号:YCXZYYJYK_SOP_13页码:第- 57 -页,共57页检验科免疫SOP手册版本:第3版,第1次修订生效日期:20180101免疫SOP手册目录编 号名 称页 面SOP_13-1酶联免疫吸附试验(ELISA)基本原理3-7SOP_13-2雷杜RT6100酶标分析仪标准操作程序8-10SOP_13-3雷杜RT-3000洗板机标准操作程序11-12SOP_13-4酶免项目标准操作程序13-25SOP_13-5金标免疫项目标准操作程序26-38SOP_13-6手工免疫检验项目标准操作程序39-42SOP_13-7传染病免疫检验室内质控的标准操作规程43-45SOP_13-8传染病免疫检验室间质评(EQA)标准操作规程46-47SOP_13-9梅里埃vidas免疫荧光分析仪标准操作程序48-54SOP_13-10锦瑞PA200特定蛋白仪标准操作程序55-56文件审批者:发布日期:操作者从事本项工作前,必须认真学习并掌握本手册的内容,严格按照
2、操作规程操作!学习者:休订书册与增补程序内容与日期:学习者:休订书册与增补程序内容与日期:学习者:SOP_13-1 酶联免疫吸附试验(ELISA)基本原理与注意事项一、基本原理1、包被1.1、固相载体的要求(1)、结合抗体或抗原的容量大 (2)、抗体或抗原牢固地固定在其表面 (3)、不影响免疫反应性 (4)、利于反应充分进行 (5)、固相方法简便易行,快速经济1.2、固相载体的材料:聚笨乙烯1.3、包被coating将抗原或抗体结合于固相载体。1.4、封闭blocking用1%5%的牛血清白蛋白或5%20%小牛血清消除固相载体表面未结合的位点,消除非特异性吸附。2、反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体。标记酶的要求:(1)、活性高(2)、性质稳定(3)、专一性强(4)、酶催化底物的显色信号易于判断和测量(5)、方法敏感,重复性好,简单易行(6)、酶的底物易于配制保存,酶及底物价廉 常用酶辣根过氧化物酶HRP(ELISA中应用最为广泛的标记用酶)3、洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离。4、底物显色 &n
3、bsp; HRPDH2+H2O2 D+2H2O H2O2为受氢体,HRP对受氢体的专一性很高。供氢体DH2习惯上被称为底物,底物有多种。常用底物:四甲基联苯胺TMB四甲基联苯胺TMB是ELISA中应用最广泛的底物。TMB反应后显蓝色 ,加酸终止反应后变为黄色,测定波长450nm ,稳定,无致癌性。二、常用方法与原理1、双抗体夹心法方法:用已知抗体包被,加入待检血清,再加酶标抗体,加底物显色应用: 二价或二价以上的较大分子抗原测定 乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等2、双抗原夹心法原理:类似双抗体夹心法 操作步骤:类似双抗体夹心法 应用:乙型肝炎表面抗体3、竞争法(测抗原)方法:用已知抗体包被,加入待测血清,再加酶标抗原,酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。应用:用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原(药物、激素等)4、竞争法(测抗体)原理:类似检测抗原的竞争法应用:乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的检测 5、间接法方法: 用已知抗原包被,加入待测血清,
4、再加酶标的抗人IgG(抗抗体或二抗)加底物显色。优点: 一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。应用: 常用于HCV抗体、HIV抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定。6、捕获法方法:抗人IgM链抗体包被捕获待测标本中IgM类抗体加入特异性抗原和酶标记特异性抗原的抗体底物显色应用:病原体急性感染诊断中的IgM型抗体、甲型肝炎HAV-IgM抗体 、乙型肝炎病毒核心HBc-IgM抗体SOP_13-2 雷杜RT6100酶标分析仪标准操作程序型号:RT6100型 产地: 机组:RT6100型酶标分析仪主机+稳压器+
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