春石斛兰试管苗生产技术规程
7页1、春石斛兰试管苗生产技术规程 张秀珊 曾宝珰 郭英铎 洪生标 郑运欢 柳江海 黄茜莉 陈丽 广东省汕头市农业科学研究所 摘 要: 详细介绍春石斛兰试管苗生产过程中的基本设施与技术、播种苗的生产、分生苗的生产、炼苗、瓶苗质量、包装与运输等内容, 总结春石斛兰试管苗生产的技术规程, 为春石斛兰试管苗生产者和组培爱好者提供参考。关键词: 春石斛兰; 试管苗生产; 技术规程; 作者简介:张秀珊 (1972-) , 女, 高级农艺师;主要从事花卉选育种及组培技术研究。作者简介:柳江海, 高级农艺师。E-mail:春石斛兰 (Dendrobium) 为兰科 (Orchidaceae) 石斛属多年生草本植物, 茎叶美丽, 花色艳丽多姿, 花香怡人, 花期持久, 具有极高的观赏价值。近年来, 春石斛兰盆花已成为我国大陆继蝴蝶兰之后的又一高档礼品花卉, 具有非常广阔的发展前景。1 基本设施与技术1.1 基本设施设备1.1.1 基本设施交通方便、环境清洁、空气干燥的生产配套场所洗涤室、试剂室、培养基配置室、灭菌室、培养基冷却室、接种室、培养室、炼苗大棚等。1.1.2 基本设备安全、高效的生产配套设备洗瓶机、
2、培养基分装机、高压蒸汽灭菌炉、烘干箱、超净工作台、天平、冷暖空调、培养架、培养瓶、紫外线灯、常用玻璃仪器、接种盘、接种刀、镊子、高温灭菌器、酒精灯等, 以及所需的化学试剂。1.2 常用技术1.2.1 培养基配制按培养基的配方及所需数量分别加入各类物质, 混合后倒入培养基分装桶中, 用纯净水定容至所需体积, 加热搅拌至完全溶解并充分混合后, 用 1 mol/L 的Na OH 溶液调节 p H 值至所需酸碱度, 再趁热用培养基分装机将培养基分装入培养瓶中, 塞上瓶塞或盖上瓶盖。1.2.2 灭菌(1) 培养基。在高压蒸汽灭菌炉内用湿热空气灭菌法 (压力 0.110.14 MPa、120126、1520 min) 进行灭菌。(2) 接种工具。接种盘可随培养基一起灭菌, 灭菌后用烘干箱烘干, 待用;镊子与接种刀在接种过程中, 采用酒精灯灼烧或高温灭菌器进行灭菌。(3) 外植体。用 0.1%Hg Cl2溶液或 10%Na Cl O 溶液浸泡处理, 不同外植体采用不同的消毒方法和消毒时间。(4) 其他。接种室、培养室用紫外线灯或臭氧等杀菌;接种台、手等用 75%酒精涂擦杀菌。1.2.3 接种在超净工
3、作台上, 摆放好接种工具, 用镊子将需要接转的材料取出置于接种盘上, 用镊子和接种刀将材料进行适当切割, 再用镊子将切割好的材料插植到新的培养基中。操作时要注意对瓶口及瓶塞进行灼烧, 然后及时塞上瓶塞, 盖上防尘盖。镊子和接种刀每转 1 瓶材料后, 用酒精灯灼烧或高温灭菌器进行灭菌, 接种盘每转 1 瓶材料更换 1 个, 以防止污染。2 播种苗的生产2.1 种子的获得2.1.1 选择亲本根据生产需要或育种目标, 选择花色、花型、开花习性好, 且生物学特性、生长习性、环境适应性、植株长势等表现较好的优良单株作亲本。2.1.2 人工授粉(1) 时间。开花第 1 d 花粉萌发力最强, 开花后 7 d 花粉块仍具活力, 母本最好的授粉时间在开花后 34 d。一天中最佳授粉时间为 9001000。(2) 授粉。先将母本的花粉块除去 (去雄) , 再将采集的父本花粉块用小镊子镊起轻轻放在母本的蕊腔中。用铅笔写好标牌, 注明父母亲本、授粉日期等。2.1.3 采收授粉后, 应经常观察授粉花朵的变化并防止损坏, 加强肥水管理。约 150180 d 后, 在蒴果尚未裂开时采收。2.2 播种2.2.1 蒴果
4、处理春石斛兰种子以随采收随播种为好。采收回来的蒴果, 先用剪刀将残存的花器官仔细剪去, 然后用 75%酒精棉花将蒴果表面的灰尘、残留肥料、农药等擦拭干净, 再在超净工作台上用 0.1%Hg Cl2溶液或 10%Na Cl O 溶液浸泡 1015 min, 用无菌水冲洗 46 次。2.2.2 播种在超净工作台上将已消毒好的蒴果放在无菌接种盘上, 用灭菌后的镊子镊住蒴果, 用接种刀切开, 将种子均匀播撒于事先准备好的培养基中。2.2.3 培养基Hyponex No.1 2 g/L+胰蛋白胨 2 g/L+活性炭 1 g/L+香蕉泥 30 g/L+2%蔗糖+0.6%琼脂, p H 值 5.40.2。2.2.4 培养条件培养温度为 (262) , 前期暗培养或有散射光即可。在种子萌发生长并转至黄绿色时, 光照强度可增加至 8001 000 lx, 光照时间 8 h/d。2.3 分瓶2.3.1 培养基Hyponex No.1 2 g/L+胰蛋白胨 2 g/L+活性炭 1 g/L+香蕉泥 40 g/L+2%蔗糖+0.6%琼脂, p H 值 5.40.2。2.3.2 培养条件培养温度为 (262) ,
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