春石斛兰试管苗生产技术规程
春石斛兰试管苗生产技术规程 张秀珊 曾宝珰 郭英铎 洪生标 郑运欢 柳江海 黄茜莉 陈丽 广东省汕头市农业科学研究所 摘 要： 详细介绍春石斛兰试管苗生产过程中的基本设施与技术、播种苗的生产、分生苗的生产、炼苗、瓶苗质量、包装与运输等内容, 总结春石斛兰试管苗生产的技术规程, 为春石斛兰试管苗生产者和组培爱好者提供参考。关键词： 春石斛兰; 试管苗生产; 技术规程; 作者简介：张秀珊 (1972-) , 女, 高级农艺师;主要从事花卉选育种及组培技术研究。作者简介：柳江海, 高级农艺师。E-mail:nkyljh126.com春石斛兰 (Dendrobium) 为兰科 (Orchidaceae) 石斛属多年生草本植物, 茎叶美丽, 花色艳丽多姿, 花香怡人, 花期持久, 具有极高的观赏价值。近年来, 春石斛兰盆花已成为我国大陆继蝴蝶兰之后的又一高档礼品花卉, 具有非常广阔的发展前景。1 基本设施与技术1.1 基本设施设备1.1.1 基本设施交通方便、环境清洁、空气干燥的生产配套场所洗涤室、试剂室、培养基配置室、灭菌室、培养基冷却室、接种室、培养室、炼苗大棚等。1.1.2 基本设备安全、高效的生产配套设备洗瓶机、培养基分装机、高压蒸汽灭菌炉、烘干箱、超净工作台、天平、冷暖空调、培养架、培养瓶、紫外线灯、常用玻璃仪器、接种盘、接种刀、镊子、高温灭菌器、酒精灯等, 以及所需的化学试剂。1.2 常用技术1.2.1 培养基配制按培养基的配方及所需数量分别加入各类物质, 混合后倒入培养基分装桶中, 用纯净水定容至所需体积, 加热搅拌至完全溶解并充分混合后, 用 1 mol/L 的Na OH 溶液调节 p H 值至所需酸碱度, 再趁热用培养基分装机将培养基分装入培养瓶中, 塞上瓶塞或盖上瓶盖。1.2.2 灭菌(1) 培养基。在高压蒸汽灭菌炉内用湿热空气灭菌法 (压力 0.110.14 MPa、120126、1520 min) 进行灭菌。(2) 接种工具。接种盘可随培养基一起灭菌, 灭菌后用烘干箱烘干, 待用;镊子与接种刀在接种过程中, 采用酒精灯灼烧或高温灭菌器进行灭菌。(3) 外植体。用 0.1%Hg Cl2溶液或 10%Na Cl O 溶液浸泡处理, 不同外植体采用不同的消毒方法和消毒时间。(4) 其他。接种室、培养室用紫外线灯或臭氧等杀菌;接种台、手等用 75%酒精涂擦杀菌。1.2.3 接种在超净工作台上, 摆放好接种工具, 用镊子将需要接转的材料取出置于接种盘上, 用镊子和接种刀将材料进行适当切割, 再用镊子将切割好的材料插植到新的培养基中。操作时要注意对瓶口及瓶塞进行灼烧, 然后及时塞上瓶塞, 盖上防尘盖。镊子和接种刀每转 1 瓶材料后, 用酒精灯灼烧或高温灭菌器进行灭菌, 接种盘每转 1 瓶材料更换 1 个, 以防止污染。2 播种苗的生产2.1 种子的获得2.1.1 选择亲本根据生产需要或育种目标, 选择花色、花型、开花习性好, 且生物学特性、生长习性、环境适应性、植株长势等表现较好的优良单株作亲本。2.1.2 人工授粉(1) 时间。开花第 1 d 花粉萌发力最强, 开花后 7 d 花粉块仍具活力, 母本最好的授粉时间在开花后 34 d。一天中最佳授粉时间为 9001000。(2) 授粉。先将母本的花粉块除去 (去雄) , 再将采集的父本花粉块用小镊子镊起轻轻放在母本的蕊腔中。用铅笔写好标牌, 注明父母亲本、授粉日期等。2.1.3 采收授粉后, 应经常观察授粉花朵的变化并防止损坏, 加强肥水管理。约 150180 d 后, 在蒴果尚未裂开时采收。2.2 播种2.2.1 蒴果处理春石斛兰种子以随采收随播种为好。采收回来的蒴果, 先用剪刀将残存的花器官仔细剪去, 然后用 75%酒精棉花将蒴果表面的灰尘、残留肥料、农药等擦拭干净, 再在超净工作台上用 0.1%Hg Cl2溶液或 10%Na Cl O 溶液浸泡 1015 min, 用无菌水冲洗 46 次。2.2.2 播种在超净工作台上将已消毒好的蒴果放在无菌接种盘上, 用灭菌后的镊子镊住蒴果, 用接种刀切开, 将种子均匀播撒于事先准备好的培养基中。2.2.3 培养基Hyponex No.1 2 g/L+胰蛋白胨 2 g/L+活性炭 1 g/L+香蕉泥 30 g/L+2%蔗糖+0.6%琼脂, p H 值 5.4±0.2。2.2.4 培养条件培养温度为 (26±2) , 前期暗培养或有散射光即可。在种子萌发生长并转至黄绿色时, 光照强度可增加至 8001 000 lx, 光照时间 8 h/d。2.3 分瓶2.3.1 培养基Hyponex No.1 2 g/L+胰蛋白胨 2 g/L+活性炭 1 g/L+香蕉泥 40 g/L+2%蔗糖+0.6%琼脂, p H 值 5.4±0.2。2.3.2 培养条件培养温度为 (26±2) , 光照强度 1 0001 500 lx, 光照时间 8 h/d。2.3.3 方法播种约 6080 d 后, 当叶片长至 0.51.0 cm 时, 即可开始分瓶, 以增大生长空间。分瓶时, 应尽量将小苗分开, 并使其在培养基中均匀分布, 同时淘汰生长势较弱的小苗。每 6080 d 分瓶 1 次, 分瓶 12 次即可。2.4 壮苗培养2.4.1 培养基Hyponex No.1 3 g/L+胰蛋白胨 2 g/L+活性炭 1 g/L+香蕉泥 40 g/L+2%蔗糖+0.6%琼脂, p H 值 5.4±0.2。2.4.2 培养条件培养温度为 (26±2) , 前期光照强度 2 0003 000 lx, 光照时间 10 h/d, 后期可利用太阳光的散射光, 光照强度 3 0005 000 lx。2.4.3 方法当小苗叶片长至 12 cm 长时, 即可进行壮苗培养。接种时, 将小苗单株分开, 大小分级, 并再次淘汰生长势较弱的小苗, 每瓶 4050 苗。2.5 促根培养2.5.1 培养基Hyponex No.1 3 g/L+胰蛋白胨 2 g/L+活性炭 1 g/L+香蕉泥 50 g/L+IBA 0.5 mg/L+2%蔗糖+0.6%琼脂, p H 值 5.4±0.2。2.5.2 培养条件培养温度为 (26±2) , 光照利用太阳光即可, 前期光照强度为 3 0005 000 lx, 后期光照强度为 5 0008 000 lx, 光照时间 10 h/d。2.5.3 方法当壮苗阶段的小苗叶片长至 23 cm 长时, 即可进行促根培养。接种时, 将植株大小分级, 并再次淘汰生长势较弱的小苗, 每瓶 22 苗。3 分生苗的生产3.1 外植体诱导3.1.1 母株选择符合需求;植株生长健壮、无病虫害。3.1.2 外植体类型常用外植体包括茎尖、茎基鳞芽、茎段侧芽、幼嫩叶片等。3.1.3 取材时机茎尖或茎段侧芽为外植体时, 以无菌苗或株龄 60 d 内的植株较好;茎基鳞芽作为外植体时, 以鳞芽长度 12 cm 且叶片尚未长出时较好;幼嫩叶片为外植体时, 以叶龄 10 d 左右时较好。3.1.4 消毒外植体取回后, 先用 75%酒精棉花将外植体表面的灰尘、残留肥料、农药等擦拭干净, 然后在超净工作台上用 0.1%Hg Cl2溶液或 10%Na Cl O 溶液浸泡 1015 min, 用无菌水冲洗 46 次。如用无菌苗作材料, 则无需消毒。3.1.5 接种在超净工作台上将已消毒好的外植体置于无菌接种盘上, 切割成适当大小或长度, 接种于事先准备好的诱导培养基中。3.1.6 诱导培养基1/3 MS+6-BA 510 mg/L+Ad 5 mg/L+10%CW+2%蔗糖+0.6%琼脂, p H 值5.8±0.2。3.1.7 培养条件培养温度为 (26±2) , 有散射光即可。3.2 丛生芽增殖培养3.2.1 培养基Hyponex No.1 2 g/L+胰蛋白胨 2 g/L+活性炭 1 g/L+香蕉泥 40 g/L+NAA0.5 mg/L+10%CW+2%蔗糖+0.6%琼脂, p H 值 5.4±0.2。3.2.2 培养条件培养温度为 (26±2) , 光照强度 5001 000 lx, 光照时间 8 h/d。3.2.3 方法每 6080 d 继代增殖 1 次, 一般继代次数不超过 10 次。接种时, 将丛生芽仔细分开, 对较长的芽进行分段, 分段时一般在节间切断。3.3 原球茎增殖培养3.3.1 增殖培养(1) 增殖培养基。1/3 MS+6-BA510 mg/L+Ad 5 mg/L+NAA 2 mg/L+10%CW+2%蔗糖+0.6%琼脂, p H 值 5.8±0.2。(2) 培养条件。培养温度为 (26±2) , 光照强度 5001 000 lx, 光照时间 8 h/d。(3) 方法。将原球茎切割成小块后, 接种到增殖培养基中。每 6080 d 继代增殖 1 次, 一般继代次数不超过 10 次。3.3.2 分化培养(1) 分化培养基。1/3 MS+6-BA0.51 mg/L+2%蔗糖+0.6%琼脂, p H 值5.8±0.2。(2) 培养条件。培养温度为 (26±2) , 光照强度 5001 000 lx, 光照时间 8 h/d。(3) 方法。将原球茎放入分化培养基中, 约 30 d 后陆续长芽, 约 60 d 后成为完整植株。3.4 壮苗培养3.4.1 培养基Hyponex No.1 3 g/L+胰蛋白胨 2 g/L+活性炭 1 g/L+香蕉泥 40 g/L+2%蔗糖+0.6%琼脂, p H 值 5.4±0.2。3.4.2 培养条件培养温度为 (26±2) , 前期光照强度 2 0003 000 lx, 光照时间 10 h/d, 后期可利用太阳光的散射光, 光照强度 3 0005 000 lx。3.4.3 方法当小苗叶片长至 12 cm 长时, 即可进行壮苗培养。接种时, 将小苗单株分开, 大小分级, 每瓶 4050 苗。3.5 促根培养3.5.1 培养基Hyponex No.1 3 g/L+胰蛋白胨 2 g/L+活性炭 1 g/L+香蕉泥 50 g/L+IBA 0.5 mg/L+2%蔗糖+0.6%琼脂, p H 值 5.4±0.2。3.5.2 培养条件培养温度为 (26±2) , 光照利用太阳光即可, 前期光照强度 3 0005 000 lx, 后期光照强度 5 0008 000 lx, 光照时间 10 h/d。3.5.3 方法当壮苗阶段的小苗叶片长至 23 cm 长时, 即可进行促根培养。接种时, 将植株大小分级, 淘汰生长势较弱的小苗, 每瓶 22 苗。4 炼苗4.1 条件苗长出 13 条根, 有太阳散射光, 光照强度 8 00010 000 lx, 温度 2228, 环境清洁。4.2 方法将培养瓶一字排开, 放置于培养架上, 约 4050 d 即可。5 瓶苗质量质量要求:品种纯正;生长健壮, 不徒长, 无污染;根系粗壮;变异率小于 5%。6 包装与运输6.1 包装以瓶苗方式包装, 瓶口封薄膜或盖塑料盖。包装箱外注明品种名称、等级、数量、日期、生产单位、地址及注意事项等。6.2 运输严禁倒置、侧放, 温度保持 2228, 到达目的地后尽快拆除包装并种植。
