不同佐剂和激发方式对哮喘小鼠肺部炎性反应的影响

1、重庆医学2013年12月第42卷第36期 技术与方法 不同佐剂和激发方式对哮喘小鼠肺部炎性反应的影响 钟文清，谭建新 (广东医学院附属医院儿童医学中心，广东湛江524023) 4433 摘 要：目的研究不同佐剂和激发方式对哮喘小鼠的肺部炎性反应发生和发展的影响。方法 应用无特定病原体(SPF) 级的BALBc小鼠，以卵清蛋白作过敏原，采用氢氧化铝和十二水硫酸铝钾作佐剂，雾化7 d后比较炎性反应表现，选用合适的佐 剂后用滴鼻和雾化的激发方式制备小鼠哮喘模型，对肺泡灌洗液(BALF)的白细胞进行计数及分类和观察肺组织中气管和血管 周围的炎性反应。结果 采用十二水硫酸铝钾激发哮喘BALF中白细胞和嗜酸性粒细胞比例比氢氧化铝高(P005)10 days after the last challenge，the inflammation fade sharply，and the corresponding result occured in the lung inflammationConclusion In establishing asthma model，alum is better th

2、an aluminum hydroxide，atomization is better than intranasa1Inflammation will fade after stop atomization a period of time Key words：asthma；aluminium hydroxide；aluminum potassium sulfate dodecahydrate；bronchoalveolar lavage fluid 支气管哮喘(简称哮喘)是一种常见的呼吸系统疾病，临床 表现主要为喘息、气急、胸闷或咳嗽等，肺部病理改变一般为炎 性反应细胞浸润和气道慢性炎性反应等。小鼠是最常用于构 建哮喘模型的动物，国内外的学者所用的佐剂和激发方式各 异。较常用的佐剂为氢氧化铝和十二水硫酸铝钾，激发方式常 用的有雾化和滴鼻。建立稳定的哮喘模型是研究哮喘发病及 其治疗的基础。本研究通过比较不同佐剂和激发方式对哮喘 模型的影响，观察小鼠肺组织中气管和血管周围的炎性反应， 进一步观察在停止雾化10 d后肺部炎性反应的消退情况。 1材料与方法 11 实验动物 38只无特定病原

3、体(SPF)级小鼠购于广西医 科大学实验动物中心，所有小鼠均为68周雌性。 12主要试剂和材料鸡卯清蛋白(0VA)、氢氧化铝，均购 自美国Sigma公司；十二水硫酸铝钾购自上海阿拉丁公司； KYWH1004型雾化器(雾化颗粒小于5 m)由佛山凯亚医疗 科技有限公司生产；红细胞裂解液由北京康为世纪公司生产； 快速瑞氏染液由南京建成科技有限公司生产。 13方法 131致敏液与激发液配制 致敏液分3种：哮喘组每只小 鼠注射200 L致敏液I(100zg OVA和2 mg十二水硫酸铝 钾溶于200 L生理盐水)或致敏液1I(100 g OVA和2 mg氢 氧化铝溶于200“L生理盐水)；对照组用生理盐水代替致敏液 致敏。激发液分3种：1 OVA(1 g OVA溶于100 mL生理 盐水中)、滴鼻液(100xg OVA溶于3O L生理盐水中)、生理 盐水(对照组用生理盐水作为激发液)。 132动物分组与激发方法采用随机数表法将小鼠随机分 成AF 6组，除D组8只外其余每组6只，先取3组进行实 验：分别为A组(对照作用，用生理盐水致敏，生理盐水雾化7 d)、B组(用致敏液致敏，1 OVA雾化7 d

4、)、C组(用致敏 液I致敏，1 OVA雾化7 d)；经实验发现十二水硫酸铝钾作 佐剂致敏效果较好(结果见后)，再取3组用致敏液I致敏，以 激发方法不同分别分为D组(用滴鼻液激发3 d)、E组(用1 OVA雾化5 d)、和F组(用1 OVA雾化7 d，在末次雾化1O d后处死)。所有实验组均于第0、14天腹腔注射致敏，于第21 天开始激发，雾化时间为每天30 min。D组滴鼻激发前用1 戊巴比妥钠10 mLkg腹腔注射麻醉，然后将3O L滴鼻液缓 慢交替滴人2个鼻孔。 133支气管肺泡灌洗于末次激发24 h后(其中F组末次 作者简介：钟文清(1986)，硕士，住院医师，主要从事小儿呼吸方面研究。 通讯作者，Tel：(0759)2387981；Email：fyerketomcom。 重庆医学2013年12月第42卷第36期 和7次的雾化激发方式进行研究，同时也比较3次滴鼻激发的 效果。对于哮喘组，在观察其激发过程的表现时发现有个别小 鼠在第1次雾化时就出现抓鼻、烦躁不安和大小便失禁，第3 次激发时普遍出现上述现象，这说明常用的3次雾化激发能建 立较稳定的哮喘模型l_1 ”，激发5次和7次后

5、能出现较明显的 炎性反应表现，但两者的炎性反应表现无明显差别，7次雾化 组的部分气道平滑肌细胞轻度增厚。平滑肌细胞的增生是气 道重塑的重要组成部分 。删，这说明连续激发7 d后才开始出 现气道重塑的病理改变，这也能解释为什么研究气道重塑应该 选用慢性哮喘模型。滴鼻也能诱导哮喘的发生l_2 ，虽然滴 鼻的操作简单耗材也较少，但滴鼻激发受干扰的因素很多，主 要与操作者的技术有关，麻醉得太深或滴得太快均会导致小鼠 死亡，本实验有1只小鼠因此窒息死亡，观察发现在麻醉后接 近苏醒的状态下滴鼻效果最好。滴鼻的过程中要不断翻动小 鼠以达到OVA能均匀地进入肺部，但即使这样也不能均匀地 进入肺部，肺部病理切片发现，局部的气道和血管炎性反应严 重，但整个肺部炎性反应较轻，这可能与滴注OVA时局限于 个别气道有关。与正常对照组比较，滴鼻组BALF中的嗜酸 性粒细胞虽然明显增高，但总炎性反应细胞增高并不明显。与 滴鼻比较，雾化组整体炎性反应明显，肺组织病理也能发现大 部分气道和血管周围出现较明显的炎性反应细胞浸润，这有可 能是引起BALF中炎性反应细胞明显增高的原因。 综上所述，建立哮喘模型与佐剂和激发方式

6、密切相关。十 二水硫酸铝钾能溶于水，乳化效果比氢氧化铝好，是较理想的 佐剂。在研究肺部整体炎性反应时，传统的雾化激发方法较滴 鼻好。采用5次雾化较3次滴鼻激发的方法能更有效地诱导 哮喘的发生。 参考文献： 1李睿，刘恩梅，杨锡强，等不同饲养环境、种属、佐剂及激 发方法对小鼠哮喘炎症的影响I-J重庆医学，2006，35 (1)：4344 I-2沈璐，赖克方，姜华，等不同激发方式对小鼠过敏性支气 管哮喘模型的影响JCD中华哮喘杂志：电子版，2009， 3(6)404408 3Fredriksson K，Fielhaber JA，Lam JK，et a1Paradoxical effects of rapamycin on experimental house dust mite-in duced asthmaJPLoS One，2012，7(5)：e33984 4Liu T，Laidlaw TM，Feng C，et a1Prostaglandin E2 deft ciency uncovers a dominant role for thromboxane A2 in house dust

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