基因工程原理练习题及其答案
27页1、基因工程复习题题型:名词解释(10 个)30 分;填空(每空 1分) 20 分;选择题 (每题 1分)10 分;简答题 (4 个)20 分;论述题 (2 个)20 分。第一章 绪论1.名词解释:基因工程:按照预先设计好的蓝图,利用现代分子生物学技术,特别是酶学技术,对遗传物质 DNA直接进行体外重组操作与改造,将一种生物(供体)的基因转移到另外一种生物(受体)中去,从而实现受体生物的定向改造与改良。遗传工程广义:指以改变生物有机体性状为目标,采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质的操作,以改良品质或创造新品种。包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因工程等不同的技术层次。狭义:基因工程。 克隆:无性(繁殖)系或纯系。指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的一群由遗传上同一的 DNA分子、细胞或个体组成的特殊生命群体。2什么是基因克隆及基本要点?3.举例说明基因工程发展过程中的三个重大事件。A) 限制性内切酶和 DNA连接酶的发现(标志着 DNA重组时代的开始) ;B) 载体的使用;C) 1970年,逆转录酶及抗性标记的发现。4.基因工程研究的主要内容是什么? 基础研究:基因工程克隆载体的研
2、究基因工程受体系统的研究目的基因的研究基因工程工具酶的研究基因工程新技术的研究应用研究:基因工程药物研究转基因动植物的研究在食品、化学、能源和环境保护等方面的应用研究第二章 基因克隆的工具酶1.名词解释:限制性核酸内切酶:一类能识别双链 DNA中特殊核苷酸序列,并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。回文结构:双 链 DNA 中 的 一 段 倒 置 重 复 序 列 , 当 该 序 列 的 双 链 被 打 开 后 , 可 形 成 发 夹 结构 。同尾酶:来源不同、识别序列不同,但产生相同粘性末端的酶。同裂酶:不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列黏性末端:DNA 末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的 DNA末端通过互补配对粘合,这样的 DNA末端,称为粘性末端。平末端:DNA 片段的末端是平齐的。限制性核酸内切酶的酶活性单位(U):在酶的最适反应条件下,在 50l 容积中,60 分钟内完全切割 1g DNA 所需的酶量为 1个酶活性单位(unit 或 U)限制性核酸内切酶的星活性:指限制性内切酶在非标准条件下,对与识别序列相似的其它序列也进行切割反应
3、,导致出现非特异性的 DNA片段的现象。2连杆(linker):化学合成的 812 个核苷酸组成的寡核苷酸片段。以中线为轴两边对称,其上有一种或几种限制性核酸内切酶的识别序列,酶切后可产生一定的粘性末端,便于与具有相同粘性末端的另一 DNA片段连接。衔接头(adaptor):化学合成的寡核苷酸,含有一种以上的限制性核酸内切酶识别序列。其一端或两端具有一种或两种内切酶切割产生的黏性末端。底物位点优势效应:酶对同一个 DNA底物上的不同酶切位点的切割速率不同。激酶:对核酸末端羟基进行磷酸化的酶。2. 说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。用属名第一个字母和种名的头两个字母组成的 3个字母斜体的略语表示寄主菌的物种名以及菌株(型)的代号命名。该菌株(种)中发现的不同的酶按照顺序以罗马字母编号 I, II, III等。如: Escherichia coli 用 Eco表示。第四个字母代表菌株或株型、变种名,若酶存在于质粒上,则需大写字母表示非染色体遗传因子。例: Hind III 从流感嗜血菌株( Haemophilus Influenzue)d 株中分离的第三个酶。 EcoR I 表示基因位于
4、 Escherichia coli中的抗药性 R质粒上。前三个字母用斜体,其他用正体表示。如果酶存在于一种特殊菌株中,三个字母后加上菌株名称符号,名称最后部分往往包含罗马数字, 表示在该特殊菌株中发现这种酶的先后次序。3. 引起限制性核酸内切酶星活性的可能因素有哪些?若使用 buffer不当, 会有 star activity,而 star activity是指限制酶对所作用的 DNA及序列失去专一性, 当酶辨认切割位置的能力降低,导致相似的序列或是错误的辨认序列长度也会作用,而产生错误的结果。所以当 DNA同时以两种限制酶处理时,选择可使两种酶之活性反应均可达 75以上的 restriction buffer,若找不到适当的 buffer则先加低盐的 buffer使其中一酶作用后,在加入高盐 buffer使另一酶作用,若无法以盐的高低分别加入不同的 buffer,则先加入一种 buffer作用后,加 3M NaOAc/95alcohol 沉淀DNA,再加另一种 buffer作用。 4. DNA片段之间的连接方式有哪些?具黏性末端的 DNA片段之间的连接、具平末端 DNA片段之间的连接
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