精编制作胶体金试纸条的制备PPT课件
37页1、免疫胶体金技术简介 Immunecolloidalgoldtechnique2015 1 27 目录 胶体金技术的发展 胶体金免疫层析 GoldImmune ChromatographicAssay GICA 技术是结合了胶体金技术和免疫层析技术发展而来的 其本质为一种固相反应的ELISA 并用胶体金来代替底物显色 免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术 胶体金标记实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程 胶体金技术的发展 1939 雏形Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察金离子呈高电子密度 1971 作为标记物应用于免疫组织化学研究Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合 用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗原 1974 实现间接免疫金染色法Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上 实现了间接免疫金染色法 胶体金技术的种类及优点 快速免疫金渗滤法 immuogoldfiltrationassay IGFA 即穿流式 flowthrough 的固相膜免疫测定 主要由两部分组成 膜渗滤装置和标记
2、结合物 前者为一塑料小盒 其中填满吸水性物质 面上紧贴放置一片吸附有抗体 以双抗体夹心法测抗原为例 的硝酸纤维膜 标记结合物为免疫金 A 金标记抗体B 标本中的抗原C 包被抗体D NC膜E 吸水材料F 塑料盒 免疫层析法 immunochromatogra phy ICA 是继IGFA之后发展起来的另一种固相膜免疫测定 与IGFA利用微局限性膜的过滤性能不同 免疫层析法中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用 基于层析作用的横流 lateralflow 向另一端移动 移动过程中被分析物与固定在膜上某一区域的受体 抗原或者抗体 结合而被固相化 无关物质则越过该区域而被分离 然后通过标记物显色来判定试验结果 以胶体金为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验 免疫胶体金技术的特点 优点 检测方法简单而快速 数分钟即可得出结果 不需仪器设备 操作人员不需特殊训练 试剂稳定 适用于单份测定 无污染 GICA的特点是单一试剂 一步操作 小型实验室即有条件开发生产 干燥包装的试剂可在室温保存一年以上 成为目前 病人身边检验 point of caretesting POCT 中广为应用的方法 最近由于原
3、料的精选和制作工艺的改进 已能制备出可用于定量测定的GICA试剂 Roche公司生产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的GICA试剂和匹配的简便测读器CardiacReader 其精密度和准确性均符合定量测定要求 不足 金免疫测定中应用的是单份试剂 难于进行质量控制 即使是同一批生产的试剂 也很难保证每个试剂的同一性 因此金免疫测定一般只能用于定性试验 其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料的开发与应用 胶体金的合成 白磷还原法 1905年 可合成3nm左右大小的金颗粒 白磷还原法 1925年 经改良后 可合成5 12nm大小的金颗粒 抗坏血酸还原法 1958年 可合成6 13nm大小的金颗粒 柠檬酸三钠还原法 1973年 可合成5nm 15nm 30nm 60nm大小的金颗粒 乙醇 超声波还原法 1980年 可合成6 10nm大小的金颗粒 硼氢化钠还原法 1982年 可合成3 17nm大小的金颗粒 单宁酸 柠檬酸三钠还原法 1985年 可合成3 17nm大小的金颗粒 胶体金合成 将100ml的0 1 H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中 并将其置于搅拌电热炉上 加入
4、一个磁力条并将溶液加热至沸腾 向沸腾的溶液中加入1 5ml的0 1 二合水柠檬酸三钠 Na3C6H5O7 2H2O当获得深红颜色的溶液时停止加热 制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法 胶体金的合成 注意事项 1 氯金酸易潮解 应干燥 避光保存 2 氯金酸对金属有强烈的腐蚀性 因此在配制氯金酸水溶液时 不应使用金属药匙称量氯金酸 3 用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三蒸馏水 或者是高质量的去离子水 4 是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁的 用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净 最好是经硅化处理的 硅化方法可用5 二氯甲硅烷的氯仿溶液浸泡数分钟 用蒸馏水冲净后干燥备用 胶体金的质量鉴定 优质金颗粒和劣质金颗粒 劣质金外形不均一 且非球形 有凝集现象 颗粒间变异系数较大 透射电镜下观察其颗粒大小及均匀度 理想的金颗粒大小基本相等 均匀一致 无椭圆形及多角形的金颗粒存在 双电层结构保证了胶体金的稳定性 使金颗粒始终以悬浮状态存在 胶体金溶液通常由呈单一分散状态的金颗粒组成 金颗粒直径在1 100nm之间 而稳定的金溶液则要求金颗粒维持在某一固定直径不变 蛋白通常带有多种电荷 当蛋白带正
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