临床PCR检验的室内质控2017版
54页1、临床PCR检验的室内质控方法,卫生部临床检验中心 李金明 2017年10月,存在的问题,概念不清 不知道具体怎么做 不会写室内质控的SOP 不知道如何选择室内质控物 不会分析室内质控的结果,室内质控SOP存在的问题,责任人不清。 质控物的来源及浓度不清或不全,并且通常没有说明阴性质控物的来源。有些是自制,但制备方法不规范,没有任何的质量检验,定量结果没有溯源性。 没有明确所选用的质控方法。对前20次的测定的室内质控没有解决方法。 没有明确的失控判断标准,只是做了一些失控的含糊叙述。并且一般都没有阴性失控的判断方法。 没有失控后的分析及处理措施。,室内质量控制(Internal Quality Control,IQC)的概念,由实验室工作人员,采取一定的方法和步骤,连续评价本实验室工作的可靠性程度,旨在监测和控制本实验室工作的精密度,提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性,以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。 可概括为:(1)执行者:实验室技术人员;(2)目的:监测实验室测定的重复性;(3)功能:决定了当批测定的有效性,报告可否发出。是对实验室测定的即时性评价。,室内质
2、量控制(IQC)的基本内容,主要包括三个方面: (1)测定前的质量控制; (2)统计学质量控制; (3)质量控制的评价。,测定前的质量控制,实验室设施、仪器设备及管理 理想的试剂和操作方法 人员培训,实验室设施、仪器设备及管理,实验室空间及工作流程的设计 实验室环境条件的控制:温湿度控制设备、稳压或不间断电源,理想的PCR实验室设计A,理想的PCR实验室设计B,临床PCR实验室设计的一般原则,各区独立 注意风向 因地制宜 方便工作,“十六字口诀”,传递窗,传递窗,传递窗,临床PCR实验室质量管理的特点,“无基因”概念 实验室要有严格的人员进入限制和程序 使用合格的试剂和消耗品,PCR实验室“污染”的主要来源,临床标本中存在的大量待测微生物 科研中得到的质粒克隆 以前分析研究的特定微生物 大量存在于实验环境中的特定微生物 以前扩增产物的残留污染。这也是PCR实验室最容易产生的将造成假阳性的“污染”。,PCR实验室的重要防“污染”措施,实验室的严格分区及工作程序的严格遵守 化学方法:实验台面可使用10的次氯酸钠(漂白剂)清洗 ;有些物品比如放置扩增反应管的盘必须从污染区转回到清洁区时,在转
3、回之前,应将其置于210的次氯酸钠溶液中过夜,并充分冲洗。 紫外照射:实验台面、仪器设备、实验室空间 UNG,仪器设备及管理,PCR仪、离心机、加样器、恒温设备等应建立技术档案,并定期维护;PCR仪、加样器、恒温设备应定期进行校准,理想的试剂:试剂的质检,核酸提取或标本处理方法的抗干扰能力(能否 有效地去掉PCR抑制物) 测定下限(Detection limit)(定性测定) 测定准确性和线性范围 批内变异和批间变异 试剂批间的一致性 有否污染 其他:外包装、试剂的完整性、有效期、说明书等,理想的操作方法,按照试剂盒说明书操作即可吗? 操作中影响测定结果的关键环节 写出具有可操作性的SOP,人员培训,培训所涉及的范围:仪器设备使用、维护和校准;试剂、方法原理;质量管理体系;相关法律法规、相关领域的新技术、新理念和新进展;实验操作技能等。 如何培训:讲座、讨论、自学和参加培训班等。 培训的评估:书面考试、实验考核、讨论心得、论文、综述等。,统计质控方法,质控物浓度的选择 每次(批)测定质控物的数量及放置 质控规则 Levey-Jennings质控图方法 “即刻法”质控方法 “假阳性”的统
4、计质控方法,质控物浓度的选择,定量测定:测定线性范围内的高、中、低三种浓度 定性测定:接近方法测定下限的浓度 阴性质控物,每次(批)测定质控物的数量及放置,标本数量如小于30,弱阳性和阴性质控各1份,标本数量增加,质控物数量相应按比例增加 均匀分散于临床标本中,与临床标本一同处理(核酸提取) 扩增时的排列顺序,可排于标准品或校准品之后,临床样本之前。但在扩增仪中的位置,不应永久性的固定的在一个孔,而应在每次扩增检测时,进行相应的顺延,以使在一定的时间内,可以尽可能的监测每一个孔的扩增有效性。,阴性质控样本的种类,阴性原血清样本 实验过程中带入的空管 仅含扩增反应混合液的管,阴性原血清样本的功能,监测实验室的以前扩增产物的“污染” 由实验操作所致的标本间的交叉污染。具体地说,如强阳性标本气溶胶经加样器所致的污染、强阳性标本经操作者的手所致的污染、使用翻盖离心管核酸提取时在较高温孵育时盖子崩开等 扩增反应试剂的污染。,核酸提取过程中带入的空管,监测核酸提取过程中的实验室“污染”的存在(在整个实验过程中,开口放置于核酸提取的操作台面区域内,最后以水为基质,进行扩增 ),仅含扩增反应混合液的管
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