包头医学院微生物学与微生物检验实验指导之实验7 铜绿假单胞菌的检测
3页1、实验7 铜绿假单胞菌的检测目的要求1、 掌握铜绿假单胞菌检测的主要步骤与方法。2、 熟悉化妆品标本的采集原则。3、 掌握铜绿假单胞菌菌落的观察和生化反应结果的判断。器材和试剂1样本 可疑化妆品2培养基及试剂 SCDLP液体培养基、普通营养琼脂平板、血琼脂平板、麦康凯平板、KIA、十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基、明胶培养基、麦芽糖、木糖微量发酵管、硝酸盐培养基、枸橼酸盐培养基、葡萄糖蛋白胨水、肉汤培养基等。1%盐酸二甲基对苯二胺(氧化酶试剂)、硝酸盐还原试剂、吲哚试剂、3%过氧化氢、氯仿、1mol/L的盐酸3其他 接种环、接种针、载玻片、革兰染液、香柏油、擦镜液、生理盐水。步骤和方法一、样品的前处理1.亲水性样品(水包油型):可取10g加到90ml带玻璃珠的灭菌生理盐水中,如样品量少于10ml,仍按10倍稀释法进行。如为5ml则加45ml灭菌生理盐水,混匀后,制成1:10稀释液。2. 疏水性样品(油包水型):取样品10g先加10ml灭菌液体石蜡混匀,再加10ml灭菌的吐温80,在40-44水中振荡混匀10min,加入灭菌生理盐水75ml,在40-44水浴中乳化,制成1:10悬液。或用均质器
2、,将加有助溶剂、稀释液的样品放入均质器,均质3-5min后,取上清液待检(上清液的稀释倍数为1:10)。3.膏、霜、乳剂半固体状样品1)亲水性样品取10g加到90ml带玻璃珠的灭菌生理盐水的锥形瓶中,充分振荡混匀,放30-32水浴中静置15min,用其上清液作为1:10的稀释液。2)疏水性样品称取10g,放到灭菌的研钵中,加10ml灭菌液体石蜡,研磨成粘稠状,再加10ml灭菌吐温80,研磨待溶解后,加70ml灭菌生理盐水,在40-44水浴中充分混匀,制成1:10稀释液。4.固体样品:取10g加到90ml带玻璃珠的灭菌生理盐水的锥形瓶中,充分振荡混匀,放30-32水浴中静置15min后取出,充分振荡混匀,再放到30-32水浴中静置15min,取上清液作为1:10的稀释液。如有均质器,上述亲水性膏、霜、乳剂等,可称10g样品加90ml的灭菌生理盐水,均质1-2mi;疏水性膏、霜及眉笔、口红等,称10g样品加90mlSCDLP液体培养基,或1g样品加1ml灭菌液体石蜡、1ml灭菌吐温80、7ml灭菌生理盐水,均质3-5min。二、增菌培养:取1:10稀释样品10ml加入90mlSCDLP液体
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