029agilent1260液相色谱仪+vwd+dad+fld检测器操作、维护和期间核查规程概要.doc

文件类型：操作规程（SOP） 文件编号： 文件名称：Agilent 1260HPLC+VWD+DAD+ELSD操作、维护和期间核查规程 第1版第0次修改 第 25 页 共 25 页Agilent 1260液相色谱仪+VWD+DAD+FLD检测器操作、维护和期间核查规程1 目的：为保证仪器的正常使用及测量结果的真实可靠特制定本规程2 范围：本规程适用于Agilent 1260液相色谱仪测定食品、保健食品、食品添加剂等样品时的操作、维护和期间核查3 职责：仪器使用人按本规程操作仪器和作好使用登记仪器责任人负责监督仪器的使用、保管、维护与保养和期间核查仪器设备管理员负责仪器的综合管理4 仪器组成 Agilent 1260高效液相色谱仪由真空脱气机、四元泵、自动进样器、柱温箱、VWD、DAD、FLD检测器及OPENLAB CDS工作站组成5 操作规程5.1 开机前准备准备好流动相并安装色谱柱将水相放入A/D瓶，有机相放到溶剂瓶B/C，同时配制10%的异丙醇/水溶液以备柱塞清洗用5.2开机5.2.1 打开计算机：打开计算机电源，登陆Windows操作系统。

5.2.2启动工作站：打开Agilent 1260各模块（脱气机，四元泵，自动进样器，柱温箱，检测器）左下方的电源开关，液相各模块进入自检，右下方的指示灯不同颜色闪烁几下，最后变成橘黄色或无色，启动完成点击屏幕左下角“开始”，选择“所有程序（P）”，选择“Agilent Technologies”选择“Open LAB”，选择OpenLABControl，或双击桌面图标，则会进入到下面的界面：下面步骤如果已经配置过，则不需要操作 通过点击菜单左上方的，可以分别创建位置和仪器，得到如下界面输入相关信息，注意仪器类型一栏要选择Agilent LC System，输入完后点击确定出现如下界面选定刚刚创建的仪器名称，点击“配置仪器”，选择“配置模块”，注意不要选择“使用经典驱动程序”如果仪器中包括DAD、FLD，则需要选择“3D光谱评估”点击确定选择“是”，来配置仪器选择IP地址，输入仪器IP，默认地址为192.168.254.11 点击确定系统会根据指定IP地址来找到所配置的模块及其相关信息，点击确定再次点击确定，是配置生效点击“启动”或者“离线启动”来打开或离线工作站，也可点击“创建快捷方式”来生成。

这样就不必每次使用都打开OpenLAB控制面板了开启工作站：工作站打开，点击“方法和运行控制”或者在“视图”中选择“方法和运行控制”打开仪器控制视图：选择“视图→系统视图”，即可显示仪器控制视图，选择“视图→样品视图”，即可显示样品信息视图模块右上角状态灯颜色说明：无色，未开电源或者模块准备就绪 黄色，模块未准备就绪 绿色，正在进样分析 红色，模块出错 所有模块红色，仪器有漏液工作站图形颜色说明：绿色，模块准备就绪 黄色，模块未准备就绪 蓝色，正在进样分析 红色，出错或者不能联机 灰色，此模块没启用可将鼠标移至系统或各模块的状态指示栏系统会自动显示未就绪或出错的原因配置流动相：将流动相装入溶剂瓶中设置溶剂瓶参数，在溶剂瓶图形上单击鼠标左键，出现图形如下点击“溶剂瓶填充量”设置溶剂瓶中流动相实际体积，也可设定低体积关泵冲洗流动相管路：反时针旋开泵模块上的溶液排空阀右键单击泵视图的空白处，选择“方法”，设置“流速”为5ml/min，对于G1211X（四元泵）分别将A，B，C，D四个通道设置“溶剂”为100%（点击中各个通道后面的方框，即可开启“%”设置框，输入需要设置的数值百分比后，单击右侧的开白框，A相即可自动位置为100%-（%B+%C+%D的百分比），冲洗：对于G1312X（二元泵），冲洗A、B两个通道；对于G1310X（单元泵），冲洗一个通道即可5.2.4开启模块：鼠标右键点击每个模块的空白处都会弹出提示框，选择“控制”即可在新的窗口中选择打开或者关闭各个模块。

也可在仪器视图中选择“打开”监视基线：点击“视图→信号”打开“图谱”点击“改变”按钮，选择“可选信号”中需要监视的信号，“添加”到“选定信号中”调整“窗口”中“X轴范围”，如需要画“0”点基线，请选择“画零线”调整Y轴“Y轴范围”与“偏移量”或者选择“Y轴自动调整”来选择合适的监视图形平衡色谱柱、进样分析：关闭溶液排空阀（确认泵流量为1ml/min），监视压力和信号基线等待平稳后，可以进样采集分析5.3数据采集方法编辑：5.3.1设置泵（四元泵）右键点击泵模块视图空白处，选择“方法”或者点击进入泵的参数设置界面流速---设置泵的流速，在“压力限-上限”>200时，流速设置范围为：0-5.00ml/min；在“压力限-上限”≤200时流速设置范围为：0-10.00ml/min停止时间---设置泵停止分析的时间，时间范围为：0.0-99999.00min或“无限制”后运行时间---泵在后运行时间保持后运行状态，从而延迟下一个分析的开始在溶剂成分改变后（例如，在梯度洗脱后），可以使用“后运行时间”是色谱柱达到平衡，时间范围为0.0-99999.00min或“无限制”压力限---“上/下限”是最大/小压力限制，达到“上限”或者“下限”值时，泵将自动关闭，从而防止分析系统压力超限溶剂---溶剂B、C和D的百分比可以设置为0到100%之间的任何值。

溶剂A”通常输送剩余的量：100%-（%B+%C+%D）时间表---通过在“时间”字段中输入时间并在时间表的以下字段中输入适当的值，可以使用时间表对分析过程中参数进行设置泵时间表中的值随时间从初始值到时间表中定义的时间所对应的值发生线性变化（例如，流速和压力最大限制）；“溶剂B”为非“关闭”状态时，“时间表”的参数“%B”为黑色可以编辑，否则为灰色不可编辑状态此处可选择改变的参数包括流动相比例、流速、压力最大限制若配有溶剂切换阀，则需设定A、B、C和D的切换流量、比例和时间控制右键点击泵模块视图开白处，选择“控制”进入泵的控制界面泵-控制泵的“启动”，“关闭”或者“待机”状态蹦密封垫清洗组件（选配）---控制蹦密封垫清洗蠕动泵的开关以及定期开关的程序5.3.2设置进样器（G1329B）右键点击进样器模块视图的空白处，选择“方法”后进入进样器的参数设置界面标准进样---简单的进样，在“进样量”字段中制定进样量进样量取决于自动进样器的配置设置洗针进样---可以指定进样包括在抽取样品后，将针移动到针座之前进行针清洗，在“针清洗”字段中制定装有清洗溶剂的位置（瓶）使用进样器程序---可以使用当前的进样器程序，将显示当前进样器程序中行数。

选择“编辑”可以显示“进样器程序”，以进行编辑最优化---启用重叠进样，可适当减少运行时间保存温度---保存自动调温控制的自动进样器的温度设置柱温箱（G1316A）右键点击柱温箱模块视图空白处，选择“方法”进入柱温箱的参数设置界面温度---控制柱温箱温度限值：-5.0到80.0度柱温箱只能冷却到比环境温度低10度的温度停止时间---设置柱温箱停止分析的时间一般设置为“与泵一致”即可时间表---此处可以变化的参数包括左右加热模块的温度5.3.3设置可变波长检测器VWD右键点击VWD模块视图的空白处，选择“方法”进入VWD的参数设置界面波长---设置 VWD 检测波长 峰宽---设置为色谱图中的预期的最窄峰峰检测器将忽略比峰宽设置窄很多或者宽很多的所有峰 停止时间---设置 VWD 停止分析时间一般设置为“与泵一致”即可 杂项---当 VWD 与其他检测器一起工作或者设定冲洗色谱柱的梯度方法时，关闭检测器的灯，分析将停止如果希望关闭检测器的灯时也能进行分析，将“采集所需的等已打开”一栏不选定即可 时间表---此处可以变化的参数包括自动平衡、改变波长、执行扫描控制右键点击 VWD 模块视图空白处，选择“控制”进入 VWD 的控制界面灯---控制检测器灯的开关 接通电源时---选择，则在打开电源的同时也点灯。

为了延长灯的寿命，建议不选此项，以便在冲洗系统或者其他不需要检测器工作的情况下节省灯的消耗 开启时间---可以设定自动开启的时间来提前预热氘灯准备分析5.3.4设置二极管阵列检测器DAD右键点击DAD模块视图的空白处，选择“方法”进入DAD的参数设置界面信号---样品：检测到的样品吸光度所对应的波长参比波长对应的吸光度将从样品波长对应的吸光度中扣除；带宽：样品波长的带宽带宽决定了检测吸光度的波长范围通常小于20nm，例如，样品波长为254nm，样品带宽为 20nm，则从 244 到 264nm 的波长范围检测吸光度；参比：参比吸光度对应的波长参比波长可以补偿由于基线吸光度中的变化(例如，由于梯度洗脱中溶剂组成的变化)而引起的波动；带宽：参比波长的带宽通常设定为小于 100nmG1315C/D 和 G4212A/B 二极管阵列检测器可以存储 8 个信号停止时间---设置 DAD 停止分析时间一般设置为“与泵一致”即可 光谱---存储：定义了在信号 A 上提取并保存光谱的点无”，未提取光谱；“顶点+基线”，在风的顶点和基线处提取光谱；“顶点+斜率+基线”，在峰的顶点、基线、上升斜率和下降斜率提取光谱；“峰中的全部”，提取峰内的所有光谱；“每个一条光谱”，选择“全部”，将连续提取光谱，但是只每个一条光谱存储一条光谱，其他光谱将被弃用，这样可以减少必要的数据存储量；“全部”，根据“峰宽”设置连续提取光谱。

每个峰宽采集八条光谱，一条光谱的采集时间略少于峰宽除以 8，即大于或者等于 0.01s 且小于或等于 2.55s 范围---定义光谱存储的波长范围从 190nm 到 950nm 步长---定于光谱存储的波长分离度从 0.10nm 到 100.00nm 阈值---预期的最小峰高度峰检测器忽略低于阈值的所有峰且不保存光谱限值：0.001 到 1000.00mAU，步长为 0.001mAU 狭缝---设置检测器的光学带宽；狭缝越窄，仪器的光学带宽就越小，但其灵敏度也越低光学带宽越小，光谱的分离度就越高 温度控制---G1315C/D 二极管阵列检测器的光学设备的温度控制保持光学设备在一个恒定的温度可以提高不稳定高温环境下的基线稳定性 时间表---DAD 中可改变的参数包括自动平衡、更改信号、更改阈值、更改峰宽、更改光谱采集模式控制右键点击 VWD 模块视图空白处，选择“控制”进入 VWD 的控制界面灯---控制检测器灯的开关 接通电源时---选择，则在打开电源的同时也点灯为了延长灯的寿命，建议不选此项，以便在冲洗系统或者其他不需要检测器工作的情况下节省灯的消耗 开启时间---可以设定自动开启的时间来提前预热氘灯准备分析5.3.5荧光检测器FLD右键点击 FLD 模块视图的空白处，选择“方法”进入 FLD 的参数设置界面按照标准试验要求分别设置：激发波长、发射波长、停止时间（一般设置与泵一致）、时。