临床微生物学检验：支原体.ppt

支 原 体Mycoplasma,支原体：是一类没有细胞壁，形态上呈多形性，可通过0.45m细菌滤器，能在无生命培养基中生长的最小的原核细胞型微生物因其生长后能形成分枝长丝，故命名为支原体个体微小，革兰阴性，但不易着色概 念,是1898年Nocard等首次从病牛胸腔积液中分离到此种微生物，称为胸膜肺炎微生物，因其生长后能形成分支长丝，故1967年正式命名为支原体柔膜纲(Molicute) 支原体目(Mycoplasmatales) 支原体科(Mycoplasmaceae） 支原体属(Mycoplasma) 脲原体属(Ureaplasma) 血虫体属 血巴尔通氏体属 无胆甾原体科(Achleplasmataceae) 螺旋原体科(Spiroplasmataceae),现已分离出200余种, 人体寄生至少有16种, 分属于:,分 类,与人类疾病有关的支原体： 肺炎支原体(M.pneumoniae, Mp) 解脲脲原体(U.urealyticum, Uu) 人型支原体(M. hominis, Mh) 生殖器支原体(M.genitalium, Mg) 穿透支原体(M.penetraus，Mpe),分 类,革兰阴性，不易着色，Giemsa染色呈淡紫色。

无细胞壁，高度多形态性3. 细胞膜分三层，内外层为蛋白质和糖类,中层为 脂质, 胆固醇含量高，占36%支原体的特性,球状体：0.20.25 mm，最小达0.1 mm；丝状体：最长可达150 mm因细胞柔软且具扭曲性，致使细胞能通过孔径比自身小得多的过滤器,支原体的多形性,类似章鱼,4. 个体微小，能在无生命培养 基上生长的最小原核微生物5. 培养营养要求高，生长缓慢，液体培养常不见浑浊（清亮）6. 易引起细胞培养污染支原体的特点,液体培养基：无明显的浑浊，多澄清透亮,培养基含有胆固醇、酵母、抗生素、酚红指示剂,固体培养基：菌落较小，脲原体菌落需低 倍镜观察，典型菌落“油煎蛋”样或颗粒样支原体的“油煎蛋样”菌落,7. 抵抗力：较弱 耐低温，对干燥、热、渗透压敏感，对作用于细胞壁的抗生素不敏感，对红霉素、多西环素等敏感对作用于细胞膜的一些化学消毒剂敏感8.支原体很多特性与细菌L型相似,支原体与细菌L型的区别,肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp),传播途径：通过飞沫传染, 多发夏秋季节. 易感人群：多见于儿童和青少年 所致疾病：引起间质性肺炎(非典型性肺炎) 、哮喘及支气 管炎。

致病机制：通过其尖端特殊结构（P1蛋白）穿过上皮细胞纤毛屏障，粘附于上皮细胞表面受体上，吸取宿主细胞养料生长繁殖并产生毒性物质导致细胞损伤临床意义,染色性：革兰阴性，不易着色，Giemsa染色呈淡紫色形态：呈短细丝状，近细胞丝状体尖端有一球状的特殊结构（P1膜蛋白)，使支原体粘附于宿主上皮细胞表面，其典型形态似酒瓶状大小：长25m, 可通过除菌滤器结构：无细胞壁，细胞膜由三层结构组成均具有P1膜蛋白、菌体蛋白1.形态与结构,肺炎支原体,支原体粘附于呼吸道黏膜上皮,糖脂抗原 抗原性强，特异性差，与其他支原体、细菌有交叉抗原蛋白质抗原 P1膜蛋白（型特异性）、菌体蛋白特异性强，可刺激机体产生持久高效抗体P1蛋白是主要型特异性抗原其抗原性常用GIT和MIT鉴定2.抗原结构,营养要求高，培养基中需添加动物血清、酵母浸液，提供所需的胆固醇和生长因子偏碱环境（pH7.88.0）生长适宜，中性生长较差，酸性环境可被抑制或死亡二分裂方式，繁殖速度缓慢（16h一代）固体培养基：经57d见小的集落犹如“油煎蛋样”-集落中央长入培养基中（向内凹陷）边缘扁平贴附在培养基上3.培养特性,肺炎支原体“油煎蛋”样菌落,4.生化反应 分解葡萄糖产酸，根据能否利用葡萄糖、水解精氨酸和尿素与其他致病性支原体区别。

5.抵抗力 对热、干燥、一般化学消毒剂和脂溶剂敏感 对青霉素、头孢菌素、醋酸铊则有一定的抵抗力 对作用于胆固醇的药物（二性霉素B等）和干扰蛋白质合成的药物（多西环素、氯霉素、红霉素等）敏感检测程序 标本 液体培养基（37、CO2环境，1周） 液体澄清，颜色改变 转种于固体培养基（37、CO2环境，10天） 低倍镜观察微生物学检查,液体固体二步法,微生物学检查,1.标本的采集: 采咽拭子、鼻拭子、痰、支气管分泌物、血清等其中以拭子为最佳2.注意事项：（1）支原体对热、干燥敏感取材后应立即接种；（2）如不能立即接种可置于蔗糖磷酸盐缓 液，4保存72h，-70可长期保存3.标本直接检查（）直接镜检 革兰阴性不易着色 标本涂片 电镜观察无细胞壁易与细菌区别 （）核酸检测：PCR法快速、敏感、特异，操作应防止污染4.分离培养：慢，阳性率不高对临床快速诊断意义不大，但对 确诊有意义5.血清学检查抗体检测ELISA特异、敏感、快速目前常用而可靠方法可检 测IgM和IgG微生物学检查,（2）补体结合试验（CF）（3）间接血凝试验 （4）冷凝集试验非特异性试验 （效价1：64），效价越高或4以上升高，近期感染的可能性大。

冷凝集试验：肺炎支原体感染后，患者血清中出现冷凝集素，能在0-4 条件下凝集自身红细胞（37时却无此效应）此凝集实验为非特异性的，仅33-75%患者出现，是肺炎支原体感染的辅助诊断试验培养基：牛心消化液为基础，加20%小牛血清、10%酵母浸液、0.5%葡萄糖、酚红指示剂制成液体培养基阳性：培养基变黄，液体澄清,阳性 阴性,鉴定（1）油煎蛋菌落（2）底物分解：葡萄糖（+） （3）TTC（氯化三苯四氮唑）还原： 无色变粉红色 （4）GIT，MIT,解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum,Uu）,1954年从非淋菌性尿道炎（NGU）患者的尿道分泌物中分离出性接触和母婴传播为主是非淋菌性尿道炎中仅次于衣原体（占50%）的重要病原体 按其分解尿素的特性命名是人类生殖泌尿道常见寄生菌之一，特定条件下致病临床意义,Uu多寄生在男性尿道、包皮和女性阴道1.最常见引起非淋菌性尿道炎2. 上行引起男性前列腺炎或附睾丸3.女性阴道炎、宫颈炎并导致流产4.早产儿及低体重新生儿呼吸道和中枢神经系统感染临床意义,致病机制：侵袭性酶（磷脂酶、尿素酶、 IgA蛋白酶）及其毒性产物5. 解脲脲原体感染与不育有关:吸附精子表面，阻碍精子运动； 产生神经氨酸酶样物质，干扰卵子与精子结合； 解脲脲原体与精子有共同抗原，溶脲脲原体感染刺激机体产生的抗体对精子产生损伤。

生物学特性,1形态结构：染色性与结构基本同肺炎支原体，形态以卵圆形多见，大小50-300nm解脲脲原体电镜扫描形态（24000）,2培养特性（1）营养要求较高（培养基中含胆固醇酵母尿素等） 最适pH5.56.5，生长速度较Mp快2）固体培养基 在5%CO2环境48h 形成1550m “颗粒”状或“油煎蛋”样小菌落（放大100倍才能见到） 3生化反应 不分解葡萄糖和精氨酸，脲酶阳性（分解尿素） 4. 抗原结构 （1）脂多糖抗原 （2）蛋白质抗原 （3）脲酶抗原种特异性抗原 有16个血清型，第4型频率最高5抵抗力：基本同肺炎支原体生物学特性,解脲脲原体的小菌落（tiny strain，T株）,实验室检查,1标本的采集 （1）非淋菌性尿道炎患者尿道分泌物、中段尿（2）慢性前列腺炎患者前列腺液（3）原因不明的不育症患者精液（4）阴道炎、宫颈炎患者炎性分泌物、 羊水、血液尿液标本 2000r/min离心10min 取沉淀物200l 接种,注意事项（1）用拭子采集标本，取泌尿生殖道粘膜部位上皮细胞为好2）病原体对热、干燥敏感，应立即送检，尽快接种3）保存：室温保存不超过2h，2-8 不超过12h实验室检查,实验室检查,2. 标本直接检查核酸检测PCR法免疫斑点试验（IDT）：已知抗体检测Uu抗原。

3. 分离培养：液体固体二步培养法 接种于pH6.0含酚红和尿素的液体培养基35，观察颜色变化 ，澄清变红转种固体培养基,解脲脲原体在液体培养基中生长现象,阴性 阳性 （指示剂：酚红）,阳性 阴性 指示剂（酚红）,人型支原体（Mh）,主要寄居于生殖道，女性较常见形态结构与Uu相似分解精氨酸，不分解葡萄糖和尿素对红霉素不敏感，而对四环素和林可霉素敏感培养最适pH在7.27.4,大于7.8易死亡微生物学检查与Uu相似人型支原体与解脲脲原体菌落,液体培养基37，Uu培养24h，Mh培养48h,液体澄清透亮，由黄变红,0.1ml转种于固体培养基37，5%CO2，2-3天,Uu、Mh分离培养及鉴定,液体固体二步培养法,支原体培养+药敏试剂,支原体培养试剂,培养基,液体培养基成分：以牛心浸液为基础, 加入10%-20%的血清和新鲜酵母浸液特异性底物：尿素或精氨酸指示剂：酚红抑制物：青霉素等,将平板置于低倍镜下观察”油煎蛋“菌落（中央凹陷长入琼脂，密度较高；边缘密度低，扁平）,穿通支原体Mpe,穿透支原体为1990年从AIDS尿中发现的新型支原体为条件致病性支原体具有黏附与穿入细胞作用，引起细胞损伤死亡为艾滋病的辅助致病因素，即AIDS的免疫缺陷增加了对穿透支原体易感性，而后者又能促进HIV复制，加速病情进展。

临床常见支原体生化与致病特征,支原体 葡萄糖 精氨酸 尿素 致病性 肺炎支原体 + - - 肺炎、支气管炎溶脲脲原体 - - + 泌尿生殖道感染人型支原体 - + - 泌尿生殖道感染生殖器支原体 + - - 泌尿生殖道感染穿通支原体 + + - 多见于艾滋病,学习要求,掌握支原体的概念和主要生物学特性、 微生物检查熟悉主要致病肺炎支原体、溶脲原体所 致疾病思考题,A 所有支原体均可以引起性传播疾病B 在固体培养基可形成“油煎蛋”样菌落C 人型支原体可分解利用葡萄糖D 对青霉素敏感E 不能通过细菌滤器,下列有关支原体描述正确的是,某男性患者若要进行Uu、Mh、检查，取尿道分泌物有困难，是否可以可用尿液标本？,支原体的定义？对人致病的常见支原体有哪些？肺炎支原体、解脲脲原体引起什么疾病？有哪些生物学特性？如何对可疑解脲脲原体感染病人进行实验室诊断？如何对可疑肺炎支原体感染病人进行实验室诊断？,谢 谢,。