基因突变与DNA损伤修复p讲义教材.ppt

13 基因突变与DNA损伤修复要点： 1.基因突变的相关概念、类型 2.基因突变的机制 3.基因突变的修复机制 4.基因突变的检测基因突变（gene mutation）:基因的核苷酸顺序或数目发生改变仅涉及DNA分子中单个碱基的改变称点突变（point mutation）涉及多个碱基的还有缺失、重复和插入突变体(mutant)：具有突变表型的细胞或个体13.1 基因突变的概念、类别及性质 （1）概念 从突变的表型: 1）形态突变：突变影响生物的形态结构 2）生化突变：突变影响生物的代谢过程，导致一个特定生化功能的改变或丧失 3）致死突变：突变影响生物个体的生活力分为显性致死和隐性致死 4）条件致死突变：在某一些条件下致死，而在另一些条件下成活的突变2）突变类型3）错义突变: 碱基序列的改变引起了产物氨基酸序列的改变 有些错义突变严重影响蛋白质活性甚至完全无活性，从而影响了表现型如果该基因是必须基因，则称为致死突变 有些错义突变的产物仍有部分活性，使表型介于野生型与突变型之间的中间类型，称为渗漏突变 有些错义突变不影响或基本上不影响蛋白质的活性，不表现明显的性状变化，称为中性突变 按其发生的原因:1)自发突变（spontaneous mutation）：在自然情况下发生的突变。

2)诱发突变（induced mutation）：人们有意识地利用物理、化学诱变因素引起的突变 随机性：可发生在体细胞和生殖细胞中 生殖细胞的突变频率高于体细胞体细胞突变在显性或纯合状态才能表现，出现嵌合体稀有性 ：突变率是很低的 高等动植物10-510-8，细菌10-410-10，反应了物种的基因的相对稳定性3）突变的性质可逆性1) 野生型基因 突变型 2) 回复突变率一般低于正突变率3) 真正的回复突变很少发生常被第二个位点的突变所抑制，抑制因子突变（suppressor mutation）4)回复突变的有无是区别基因突变与染色体缺失或重复的标志 正突变回复突变 突变的多方向性和复等位基因 同一基因可突变为多个等位基因突变的基因可以再突变这一系列的等位基因就叫做复等位基因这是由于同一座位内的不同位点上的结构发生变化产生的 突变的有害性和有利性 一般，有害突变多，有利突变少 eg. 5-BU是胸腺嘧啶(T)的结构类似物，酮式结构易与A配对；烯醇式结构易与G配对13.2.1 碱基类似物 13.2 点突变的诱变机制A.TA. 5-BU（酮式）G. 5-BU （烯醇式） G.C A. 5-BUG.CA.T 2-AP是腺嘌呤的类似物，既可与T配对，也可与C配对。

A.T 2-AP.T2-AP.CG.CG.C2-AP.C 2-AP.T A.T（1）烷化剂: 甲磺酸乙酯(EMS)、亚硝基胍(NG)等通过改变碱基结构使碱基错配当G烷基化后可与T配对，导致碱基转换 G.CA.T 或：烷化剂使嘌呤脱落，造成转换、颠换；DNA链的断裂或交联13.2.2 碱基改变（2）嵌入剂 eg. 吖啶橙、吖啶黄素、原黄素等碱基对的类似物，易造成移码突变1）紫外线： 产生环丁烷嘧啶二聚体和6-4光产物 双链间形成，阻碍DNA的复制同一链上相邻T间形成，阻碍碱基的正常配对和腺嘌呤的正常掺入，使复制在这个点上停止或错误进行，产生碱基顺序改变了的新链13.2.3 碱基损伤（2）黄曲霉(B1)的作用 使鸟嘌呤G脱落，SOS修复引入A, 造成G.CA.T13.2.4 基因的定点突变1）寡核苷酸诱导的基因定点突变 将某基因克隆到载体上人工合成含有突变位点的一对引物（突变位点位于引物中心附近，两端有足够的序列足以互补配对）PCR扩增Dpn酶切将突变DNA转入受体筛选重组子2）双引物法 将某基因克隆到载体上人工合成一对互补的含有突变碱基的引物在基因的上游和下游各设计一个引物，分别与突变位置处的一个引物进行PCR扩增两个PCR产物混合延伸后就可获得有特定位点突变的基因。

13.3 自发突变的机制 1 DNA复制错误(errors of DNA replication) a 转换 b 颠换 A T G CC 移码突变：增加或减少一个或几个碱基对的突变，引起密码编组的移动eg：Hb Wayne是138位UCC失去一个C，使链的合成不在原来应该终止的地方停止，一直到146位合成精氨酸后才终止，从而使链延长 d 缺失和重复突变e 插入突变 （转座子）自发损伤 a 脱嘌呤：碱基和脱氧核糖间的糖苷键受到破坏，从而引起一个鸟嘌呤或腺嘌呤从DNA分子上脱落下来 b 脱氨基：如胞嘧啶脱氨基后变成尿嘧啶U=A,结果G-CA-T3 氧化损伤：O2-，OH-，H2O2可对DNA造成损伤如：8-oxo dG与A配对，导致G.CdG.AT.A13.4 动态突变 在基因的编码区、3或5-UTR、启动子区、内含子区出现的三核苷酸重复，及其他长短不等的小卫星、微卫星序列的重复拷贝数，在减数分裂或体细胞有丝分裂过程中发生扩增而造成遗传物质的不稳定亦称为基因组的不稳定性，可造成基因功能丧失或获得异常改变的产物13.5 DNA损伤修复机制13.5.1 光复活(photoreactivation)（原核）概念：可见光存在的条件下，在光复活酶作用下将UV引起嘧啶二聚体分解为单体的过程。

过程 光复活酶与T=T结合形成复合物; 复合物吸收可见光切断T=T之间的C-C共价键,使二聚体变成单体; 光复活酶从DNA链解离13.5.2 切除修复（核苷酸外切修复、暗修复）(1)切除修复 在DNA内切酶、DNA聚合酶、外切酶、DNA连接酶等共同作用下，将DNA受损部位部分切除，并以其中一条链为模板，合成修复 消除由UV引起的损伤，也能消除由电离辐射和化学诱变剂引起的其他损伤切除的片段可由几十到上万bp，分别称短补丁修复、长补丁修复2）DNA糖苷酶修复及AP核酸酶修复途径 E.coli 不明显的损伤,需要特异性修复DNA糖苷酶修复：如果碱基被共价修饰，糖基化酶可作用于C-N糖苷键，使碱基释放，产生无碱基(AP)位点, 再由AP内切酶修复系统修复AP内切酶修复系统修复：由内切酶、外切酶、聚合酶和连接酶活性来完成，以修复AP位点13.5.3 错配修复系统修复杂种DNA错配碱基及基因转变13.5.4 重组修复(1)复制：以损伤单链为模板复制时，越过损伤部位，对应位点留下缺口；未损伤单链复制成完整双链2)重组：缺口单链与完整同源单链重组，缺口转移到完整链，使损伤单链的互补链完整，损伤单链仍然保留。

3)再合成：转移后的缺口以新的互补链为模板聚合补齐13.5.5 SOS修复a 通过式修复：损伤较大时(如产生很多的T=T)，正常的DNA多聚酶复制到损伤位点时，其活性受到抑制，短暂抑制后产生一种新的DNA多聚酶，由于其修复校正功能较低，新合成的DNA碱基错配频率较高，易引起突变b 切除式修复：DNA双链均有损伤且距离较近时的一种可能的修复机制13.6 基因突变的检测13.6.1 病毒和细菌基因突变的检测 利用寄主范围、生长速度、噬菌斑大小、形态等性状可检测病毒突变 通过在培养基中添加抗生素或噬菌体即可筛选细菌抗性突变体细菌营养缺陷型的检测：利用在完全培养基上能正常生长，在基本培养基上不能生长的影印培养实验首先采用青霉素富集法浓缩大量突变体，再进行负选择13.6.2真菌营养缺陷型的检出菌丝过滤法分生孢子诱变处理基本培养基 未萌发孢子萌发菌丝培养去除(过滤)少数 死亡营养野生型 孢子缺陷型(去除) 营养培养基13.6.3 果蝇突变体的检测（1） 果蝇X连锁隐性突变的检出 ClB法ClB品系：l隐性致死基因；B棒眼 C交换抑制因子(Bl倒位）； Muller-5法Muller-5品系:B(棒眼)-Wa(杏眼)-sc(小盾片少刚毛)并具重复倒位。

“并连X染色体”法（2） 常染色体突变平衡致死系(Cy和S)13-1713.6.4 人类显性突变的检测 需依靠家系、出生调查，运用电泳技术、DNA标记技术，筛选各种蛋白质、酶或DNA分子的微小差异，这些微小差异是可遗传的13.6.5 植物及其他动物突变体的检测 利用分离定律 转座子插入突变的检测、T-DNA插入突变的检测、RNAi技术等。