EILSA请问牛奶封闭非特异带的原理.docx

请问牛奶封闭非特异带的原理2014-06-03 11:18:24 来源： 评论：0 我要评论[请问牛奶封闭非特异带的原理] western blot 中我们用牛奶来封闭非特异带，但其中的原理我不是很清楚，也就是说牛奶为什么可以封闭非特异带呢？请大侠指点迷津．多谢！ 关键词:[]…  PCR 实验交流 核酸实验交流 细胞实验交流 蛋白实验交流 免疫实验交流 生物软件交流western blot 中我们用牛奶来封闭非特异带，但其中的原理我不是很清楚，也就是说牛奶为什么可以封闭非特异带呢？请大侠指点迷津．多谢！回复:封闭(blocking) 是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在 ELISA 其后的步骤中干扰物质的再吸附封闭的手续与包被相类似最常用的封闭剂是 0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用 10%的小牛血清或 1%明胶作为封闭剂的脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂，其最大的特点是价廉，可以高浓度使用（5%）高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用，但由于奶粉的成份复杂，而且封闭后的载体不易长期保存，因此在试剂盒的制备中较少应用。

脱脂牛奶，BSA，或者 FCS，在 ELISA 及 WB 中用它们主要有两个原因：一是它们做为隋性蛋白，用来封闭酶标板或膜上的蛋白结合位点，使其后的蛋白不会因为非特异结合而影响本底（即所谓封闭）；二是在抗体等蛋白稀释到很低浓度时会不稳定，它们可以起到保护，或稳定的作用另外问下我的问题，刚才的两段话是我查到的但是我想不明白的就是为什么非特异的结合位点就被封闭了？而特异的就保留下来了么？还是说都被封闭了，然后一抗与奶粉里的蛋白竞争结合？回复:＂但是我想不明白的就是为什么非特异的结合位点就被封闭了？而特异的就保留下来了么？还是说都被封闭了，然后一抗与奶粉里的蛋白竞争结合？ ＂我也比较不明白这个问题回复:WB 做了很多次这个问题也不是很懂，不过我觉得封闭是降低背景的方法，特异和非特异的的位点同时会被封闭回复:我觉得是所有的蛋白位点都被封闭了，但是抗体会跟目的蛋白有竞争性的特异结合，所以目的蛋白处的结合位点暂时被封闭后，会被抗体竞争回来的个人理解，仅供参考回复:基本上可以理解为竞争关系封闭是没有特异性的，所有的抗原表位都被结合了但非特异性结合容易被竞争替换，而特异性结合很难被竞争替换所以封闭主要是针对一抗的，没有对二抗封闭的。