光激化学发光技术介绍资料.ppt

Light Initiated Chemiluminescence Assay,光激化学发光（LiCA）,光激化学发光（LiCA）介绍,以高分子微粒为基础 两种微粒近距离 离子氧能量传递 主要特点： 高灵敏度 低本底 稳定 均相 免洗 广泛应用于生物分子间的相互作用,微粒的组成,感光微粒内含感光化合物 发光微粒内含发光化合物和镧系元素 微粒直径188nm，表面覆盖水凝胶 共价连接 增大的表面积 成百上千个生物分子，捕获目标分子,LiCA发光原理,核心原理是能量的近距离转移 转移的介质是高能态离子氧 红色激光680nm照射，感光微粒释放离子氧（4微秒），传播直径200nm，发光微粒（520～618nm），高能级的光 反应的基础有赖于两种微粒的相互接近 反应体系中，微粒的浓度很低，碰撞机率很低，本底信号微弱,原理 (1),原理 (2),LiCA的技术特点（一）,高灵敏度 信号产生逐级放大的结果 每个感光微粒释放出近6万个离子氧 离子氧作用于二甲基噻吩，产生大量紫外光 紫外光激发镧系元素 实际检测能力为10-15摩尔 理论检测能力为10-18摩尔,LiCA的技术特点（二）,低本底 时间分辨模式采集光信号（延迟150 ms），天然荧光的寿命小于100 ns 采用680 nm红光激发，生物样品中的荧光物质不敏感 发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，有别于荧光，有效避免荧光物质干扰,稳定 均相环境使反应更充分 免洗操作杜绝随机误差和交叉污染 感光和发光的有机分子受到微粒的保护，环境稳定和安全 溶液中的氧浓度是一个常数 不易受到pH值、离子强度和温度的影响,LiCA的技术特点（三）,临床免疫的各项检测 生命科学的基础研究 新药的筛选 标记简便 检测过程简单,广泛应用,基本包被模式,GG-Streptavidin（SA）,FG- Antibody（Ab）,基本反应模式,,,,biotin-antigen,,primary Ab,secondary Ab (or protein A, G, LA),,,应用类型,配体－受体 激酶 蛋白－蛋白 免疫 蛋白酶 蛋白－DNA,配体－受体(1),,,TNFa-sTNFR1,Biotin,anti-TNFR1 IgG,FG,-TNFa,Protein A-,sTNFR1,,配体－受体(1),,,TNFa-sTNFR1,GG-SA,Biotin,anti-TNFR1 IgG,FG,-TNFa,Protein A-,sTNFR1,,配体－受体(1),,,TNFa-sTNFR1,GG-SA,Biotin,anti-TNFR1 IgG,FG,-TNFa,Protein A-,sTNFR1,,,,配体－受体(2),,,环磷酸腺苷 cAMP,Biotin,FG,- cAMP,anti-cAMP-,配体－受体(2),,,环磷酸腺苷 cAMP,GG-SA,Biotin,FG,- cAMP,anti-cAMP-,,,激酶,,,Akt,Biotin,anti-Gsk3 IgG,FG,-Gsk3,Protein A-,激酶,,,Akt,Biotin,anti-Gsk3 IgG,FG,-Gsk3,Protein A-,激酶,,,Akt,GG-SA,Biotin,anti-Gsk3 IgG,FG,-Gsk3,Protein A-,,,,Akt,,磷酸化,激酶,,,Akt,GG-SA,Biotin,anti-Gsk3 IgG,FG,-Gsk3,Protein A-,,,,Akt,蛋白－蛋白,,,Biotin,FG,-p53,Anti-GST-,p53/HDM2,,,HDM2-,GST,蛋白－蛋白,,,GG-SA,Biotin,FG,-p53,Anti-GST-,p53/HDM2,,,HDM2-,GST,,,免疫(1),,肿瘤坏死因子 TNFa,Biotin,FG,- anti-TNFa,anti-TNFa-,,TNFa,免疫(1),,肿瘤坏死因子 TNFa,GG-SA,Biotin,FG,- anti-TNFa,anti-TNFa-,,TNFa,,,免疫(2),,Biotin,anti-TNFa,FG,-anti-TNFa,Protein A-,TNFa,,肿瘤坏死因子 TNFa,GG-SA,免疫(2),GG-SA,Biotin,anti-TNFa,FG,-anti-TNFa,Protein A-,TNFa,,肿瘤坏死因子 TNFa,,,蛋白酶(1),,,GG-SA,Biotin,FG,- substrate,anti-digoxigenin-,组织蛋白酶 Cathepsin D,,- digoxigenin,,,,Cathepsin D,,水解,蛋白酶(2),ACE,,,Biotin,FG,- angiotensin I,anti-angiotensin II-,,ACE,,切割,蛋白酶(2),ACE,,,GG-SA,Biotin,FG,- angiotensin I I,anti-angiotensin II-,,,,蛋白－DNA,ERa-DNA,,,Biotin,FG,-ERa,anti-digoxigenin-,,-digoxigenin,,DNA,蛋白－DNA,ERa-ERE,,,GG-SA,Biotin,FG,-ERa,anti-digoxigenin-,,-digoxigenin,,DNA,,,当前成功应用实例,HBsAg,GG-SA,Anti-HBs-FG,,HBsAg,,,Anti-HBs,GG-SA,Biotin-HBsAg,Anti-HBs,,,HBeAg,GG-SA,Biotin,FG,-Anti-HBe,Anti-HBe-,,HBeAg,,,Anti-HBe,GG-SA,Biotin,FG,-Anti-HBe,Anti-HBe-,中和HBeAg,,,,Anti-HBc,GG-SA,Anti-HBc,,,检测平台,LiCA SP,双加样臂 气置换式微量进样泵 液面自动检测功能 标本、试剂装载 100个标本 10个试剂位,LiCA HT,一次装载300个测试 自动高速进样：0.5秒/孔 自动温育、震荡和读数 300个测试仅需50分钟,谢 谢！,。