病理的经典培训很实用.pptx

Part 1 - 代理商基础培训培训日程时间主题9：00 － 9：05签到，人员介绍及培训内容介绍9：05 － 9：30Dako 公司介绍9：30 －10：00病理基础介绍10：00－10：45常规染色H&E介绍及Dako H&E产品10：45－11：00茶歇11：00－12：00免疫组化（IHC）介绍及Dako 免疫组化产品12：00－13：00午餐13：00－13：30Coverslipper及IHC市场竞争分析13：30－14：00Dako IHC的先进理念14：00－15：00目录使用训练15：00－15：15茶歇15：15－16：00销售策略与如何收集市场信息16：00－16：15Dako的支持与服务16：15－17：00考核与讨论提问17：00培训结束Dako公司介绍关注病理关注Dako• 全球第一家生产用于临床检验的商品 化抗体公司• 全球第一家也是唯一研发出EnVision 二步法的公司• Dako HercepTest™是第一个获得美 国FDA认证的指导临床用药的试剂盒• 全球，每两张就有一张IHC染色切片 是用Dako IHC试剂• 使命：We fight cancer! • 价值理念：恒信、创新、共赢• 研发与制造：丹麦与美国We fight cancer! 全球领先的癌症诊断产品供应商近半个世纪的癌症诊断经验1980s 发布二抗试剂盒1970s 试剂产量稳步增长1990sAutostainer 全自动免疫组化染色仪HercepTest™ 靶向药物诊断试剂盒2010sHER2 CISH pharmDx™ 靶向药物诊断试剂盒Coverstainer 全自动染色系统2012 与Agilent 合 并1966Niels Harboe博士 在丹麦成立DakoDako中国成立2000s 完整的IHC解决方案Dako — 全球领先的癌症诊断产品供应商研发与制造 美国，加利福尼亚研发与制造 丹麦全球1200多名雇员 在20多个国家设有分公司 产品销往超过100个国家领先的试剂平台 配合全自动诊断仪器试剂 仪器 软件临床病理诊断…………………………………………………………….…………………………………………………………….Dako是国际大药厂的优先选择Dako与合作伙伴建立了长期的合作关系We fight cancer！15 年与客户建立了平均15年的长期合作关系靶向药物诊断数字化病理实验室合作伙伴（大型药企）数量产品线全面覆盖临床病理诊断领域 •I常规染色免疫组化染色分子诊断全自动染色系统配合即用型试剂 用于常规染色全自动免疫组化染色系统配合即 用型试剂用于免疫组化染色分子诊断技术、分子诊断仪器配 合PharmDx用于靶向药物诊断2012年在中国发布占据95%的Dako中国业务突破性的技术 —IQFISH于2012发布信息流和工作流整体解决方案快速壮大的Dako中国业务业务增长2010-2012每年超过60% 的复合增长率员工39名员工 – 16名销售与市场人员； 14名技术与服务人员；9名行政与财务人员。

中国分公司上海 (2010年4月设立)办事处北京 (2010年6月设立) 广州 (2010年7月设立) 成都、沈阳、武汉等地办事处（2012年设立）使命We fight cancer! 我们和病理专家、肿瘤学家、实验室 技术人员以及制药公司一起对抗癌症价值理念恒信 创新 共赢u2012年新发癌症近312万例（全国） 5万例（上海） u最常见五大癌症(上海)：乳腺癌、肺癌、大肠癌、胃癌、肝癌 u乳腺、淋巴、肺占了60%的IHC测试量，乳腺癌是病理科的最重要检测项目 uDako在2012年推出了9种新抗体, Dako 2013年即将要发布的近20种新抗体生意在哪里？ 涵盖病理科主要测试肿瘤—Dako抗体覆盖率高2011年中国高发肿瘤比例胰腺食道乳腺肝结肠胃肺19%12%11%10%8%7%3%中国高发肿瘤区域分布情况病理基础介绍- 病理科人员组成 - 重要专有名词 - 常规病理实验室流程 - H&E, IHC染色流程病理科室主要人员职责病理科主任• 管理病理科日常运作 • 病理科经费管理 • 确定科室相应疾病的诊断指标病理科医生• 大体观察、取材 • 阅片，为临床提供诊断结果 • 染色质量的判定者病理科技术主管• 承担难度较多的技术工作和新技术项目 • 技术管理工作 • 订购试剂病理科技术员• 专人负责IHC实验 • 可能由技术主管兼任IHC 技术主管• 病理科实验操作 • 病理实验资料整理与保存• 协调整个医院的仪器、试剂、药品等采购、管理药剂管理科/设备科重要专有名词 1§固定：用福尔马林固定液将手术组织标本浸泡12-24小时。

目的是防止组织腐败§包埋：将处理好的组织块浸入液体石蜡内，冷却后形成石蜡组织块目的是为了得到蜡块（才可以保存） ，方便切片§切片：用切片机处理蜡块，获得极薄的石蜡切片§石蜡切片：有组织粘附的玻片，进行H&E染色，IHC染色及特殊染色的基础§烤片：石蜡切片放到烘箱里面烘烤，使切片贴合在载玻片上目的是防止染色过程中脱片包埋 :切片 :烤片:重要专有名词 2§H&E染色：苏木素 — 伊红染色法 ( Hematoxylin-Eosin staining ) ，简称H&E染色法 ，病理科里常用的染色法之一 运用化学染色原理，苏木素使细胞核着紫蓝色 ；伊红使细胞质着红色§免疫组化染色（ImmunoHistoChemistry，IHC）：是应用抗原抗体反应原理，用显色结果表示组织内待测的抗原 指标§原位杂交（In Situ Hybridization，ISH）：DNA水平检测疾病基因的技术，通过荧光显微镜或者其他显 微镜观察发光或者显色的基因指标包含FISH(Dako, 雅培), CISH (Dako), SISH(罗氏)H&E :IHC :ISH :病理实验室常规流程Dako专注于此染色步骤是非常复杂的IHC染色步骤：抗原修复复染脱蜡二抗显色封片一抗水化脱水烤片H&E染色步骤：常规染色(H&E)介绍- 重要专有名词H&E 染色 — 病理科的基础染色§H&E 染色是病理医生诊断疾病所使用的第一种且最广。

量最大的方法§H&E=苏木素+伊红染色＞100年历史§绝大多数送到病理实验室的组织样本会做H&E染色§上海肿瘤医院 ~ 300,000切片/年 §四川华西医院 ~ 250,000切片/年常规染色重要专有名词 §为什么需要做H&E染色：为了使细胞结构着色以便观察组织结构§苏木素：一种天然染料，用来做细胞核染色 (将细胞核染成蓝色)§伊红：化学试剂，用来做细胞浆染色(将细胞浆染成粉红色)Dako常规染色(H&E)产品- H&E市场概况 - Coverstainer工作原理 - Coverstainer竞争优势H&E主要厂商全自动机型半自动机型DakoVentanaLeicaSakuraCoverstainer •一体式设计•速度最快 240张/小时•过夜运行•RTU试剂（开瓶即用）•耗材价格合理Symphony•一体式设计•过夜运行•提供RTU试剂•耗材相对昂贵（特制的盖玻片）Autostainer XL （ST5010 +CV5030）•转接平台连接•实验室手工配置试剂•无过夜运行•耗材价格便宜Tissue-Tek Prisma•转接平台连接•实验室手工配置试剂•耗材价格便宜•装机量少特色：高通量染色结果保证特色：滴染加样特色：国内目前占有率最高特色：有加热槽，可进行特殊染色从2010年9月起，Coverstainer在全世界安 装了超过100台。

Coverstainer仪器构造- 封闭式系统播放仪器操作视频Dako CoverStainer 工作原理—上载切片，设置程序§上载1-4 架 切片(最多 40 张片子) §设置 H&E染色流程(1个切片架仅能设置1个染色流程)(4个切片架最多可设置4个染色流程) §可连续上载 §可以设定20个不同染色流程§每个流程40个染色步骤§可以同时运行4个不同染色流程12Dako CoverStainer 工作原理—烤片步骤： §切片架被转移至烤片单元 (10 minutes, 65°C) §烤片的作用为粘附组织到切片 （防脱片） §开始融蜡特点： §同时承载12个切片架（120张切片） §烤片温度可达50－70度3Dako CoverStainer 工作原理—脱蜡、H&E染色、脱水步骤 (18个染色缸)： 脱蜡 §浸在溶剂中 (Xylene或HistoclearII) 水化 §浸入 一系列不同浓度的酒精 苏木素染色 §浸染苏木素 伊红染色 §浸染伊红 脱水 §浸入一系列的酒精 透明 §浸入HistoclearII (二甲苯替代物) 4Dako CoverStainer 工作原理—封片步骤： •封片单元拾取盖玻片进行封片 •扫描所有的切片，开始封片，从最后一张开始特点： •可应用于IHC、特殊染色封片 •一次最多可封片120张5Dako CoverStainer 工作原理—干燥步骤： §切片架被转移到干燥单元 (干燥10 minutes)特点： •当切片架可以取出时，会给予提示音 •干燥单元可单独使用 •干燥单元最多可放12个切片架6组织粘附切片用二甲苯取出蜡盖玻片封片用酒精将组织脱水细胞核及胞浆染色干燥封片胶•样本切片不间断输入，连续上载功能 •烤片、封片功能可以任意选择Coverstainer竞争优势 1 —完全自动化，一体式设计Coverstainer竞争优势 2 —运行速度最快，运行效最高• 一小时可做240张切片 • 可连续上载切片 • 可过夜处理 • 日输出量最大2000张§ 独立的染色和试剂装载单元，最小化工作人员接触试剂和暴露在污染环境中 § 静音，运转过程仅产生 38.5 (dB)声音 § 安全性 §专设外部的排气设备，排出了设备内的有毒气体 §有毒无毒废液分开 §无毒的HistoclearⅡ代替二甲苯Coverstainer竞争优势 3 —安全环保的工作环境Coverstainer竞争优势 4 —高质量的试剂和耗材种类名称Dako即用型试剂苏木素伊红返蓝液Dako耗材Dako 盖玻片Dako 封片胶自行购买HistoClearⅡ二甲苯酒精蒸馏水已使用5天, 不论染了多少片 必须更换试剂 or 若5天内已染3000张切片 必须更换试剂每天至少更换2升 HistoclearII可根据医院蜡质状况使 用二甲苯Coverstainer为封闭式系统, 必须使用Dako原装试剂§ 染色结果一致性的保证 ： Coverstainer竞争优势 5 —确保染色结果一致性第一片 (第一天)第3000片 (第五天)3000 张切片或5天内达到一致性染色结果试剂循环减少沉淀和片段 最小的试剂挂壁量 封闭试剂容器和封闭试剂排流系统减少蒸发 特殊设计的切片架减少试剂携带量§ 满足客户的不同需求： § 20 种染色程序 § 每个程序40个染色步骤 § 个性化染色结果 § 同时运行4个染色流程 § 每个染色流程可以调节封片剂加样量Coverstainer竞争优势 6 —灵活性及易用性n不同的工作流程n连续装载切片n过夜处理选择功能n单独使用封片功能 IHC或SS slidesCoverstainer的先进理念, 必须灌输给客户的概念LIS 连网 标签化管理高速、全程无手工H&E质量控制即用型、环保试剂仪器=必然趋势试剂工作流程优质、一致的染色结果免疫组化(IHC)介绍- 重要专有名词 - 常用一抗一抗(Primary Antibody)：与检测的抗原结合 的抗体。

种类包括单克隆抗体和多克隆抗体克隆号（Clone）：同一种一抗因生产厂商不同 会有不同的克隆二抗(Secondary Antibody)：能与一 抗相结合的抗体，同时进行显色可以 将一抗信号放大实验步骤：一抗  二抗，即：先一抗 后加二抗，二抗作用是结合。