土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件
37页1、课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,专题2 微生物的培养与应用,一、课题背景,1、尿素的利用,尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。,2、细菌利用尿素的原因,土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶,3、常见的分解尿素的微生物(异养需氧型),芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌,某些真菌和放线菌。,硝化细菌、固氮菌、根瘤菌:,4、课题目的,从土壤中分离出能够分解尿素的细菌,统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌,一.研究思路,.筛选菌株,.统计菌落数目,.设置对照,1、实例:,启示:寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求,到相应的环境中去寻找。,原因:因为热泉温度70800C,淘汰了绝大多 数微生物只有Taq细菌被筛选出来。,DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术,此项技术要求使用耐高温(930C)的DNA聚合酶。,2、实验室中微生物的筛选原理:,人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长。,3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计
2、数所需培养基:,从物理性质看此培养基属于哪类?从功能上属于哪类培养基?,固体培养基,在此培养基中哪些作为碳源、氮源?,碳源:葡萄糖、尿素 氮源:尿素,选择培养基,唯一氮源,思考2该培养基对微生物 (具有,不具有)选择作用。如果具有,其选择机制是 。,具有,只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长,培养基的氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生长繁殖,而受到抑制,所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。,4、培养基选择分解尿素的微生物的原理,选择培养基:在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。,几种常见选择培养基,1、加入青霉素的培养基,分离酵母菌、霉菌等真菌,2、不加氮源的无氮培养基,分离固氮菌,3、不加含碳有机物的无碳培养基,分离自养型微生物,4、加入高浓度食盐的培养基,分离金黄色葡萄球菌,1.间接计数法(活菌计数法) (1)常用方法:,每克样品中的菌落数(CV)M 其中,C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(m
3、l),M代表稀释倍数。,当样品的稀释度足够高时,培养基表 面生长的一个菌落,来源于样品稀释 液中的一个活菌,通过统计平板上的 菌落数,就能推测出样品中大约含有 多少活菌。,(2)原理:,稀释涂布平板法。,.统计菌落数目:,注意事项: 为了保证结果准确,一般选择菌落数在30300的平板上进行计数。 为使结果接近真实值可将同一稀释度涂布至少3个平板,经涂布,培养计算出菌落平均数。 统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。,如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数?,统计某一稀释度下平板上的菌落数,最好能统计3个平板,计算出平板菌落数的平均值,然后按课本旁栏的公式进行计算,教材P22,2、显微镜直接计数:,利用血球计数板,在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。,.统计菌落数目:,不能区分死菌与活菌; 不适于对运动细菌的计数; 需要相对高的细菌浓度; 个体小的细菌在显微镜下难以观察;,缺点,实例分析P22,你认为哪个同学的结果更接近真实值? 你认为这两位同学的实验需要改进吗?如果需要,如何改进?,实例分析P22,第一同学只涂布了一个平板,没有设置重复组,因此结果不具有说服力。 第二位同学
4、考虑到设置重复组的问题,涂布了三个平板,但是其中1个平板的计数结果与2个相差太远,说明在操作过程中可能出现了错误,因此,不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。,设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。,(三).设置对照:,实例:教材P23,原因: 土样不同 培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质),小结:通过这个事例可以看出,实验结果要有说服力,对照的设置是必不可少的。,方案一:由其他同学用与A同学相同土样进行实验,方案二:将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养,作为空白对照,以证明培养基是否受到污染。,结果预测:如果结果与A同学一致,则证明A无误;如果结果不同,则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,根据图示27填写以下实验流程:,实验设计:,实验的具体操作 .土壤取样(微生物的天然培养基) 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右,再取样(3-8cm),将样品装入事先准备好的信封中。 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 .制备培养基: 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。,准备牛肉膏蛋白胨
《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件》由会员F****n分享,可在线阅读,更多相关《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件》请在金锄头文库上搜索。
2024-05-10 34页
2024-05-10 15页
2024-05-10 35页
2024-05-10 26页
2024-05-10 17页
2024-05-10 24页
2024-05-10 27页
2024-05-10 17页
2024-05-10 30页
2024-05-10 18页