人骨髓间充质干细胞在大鼠脑内移植的研究
66页1、浙江大学硕士学位论文人骨髓间充质干细胞在大鼠脑内移植的研究姓名:樊建玲申请学位级别:硕士专业:内科学(血液病)指导教师:黄河20060501浙江大学硕十学位论文第一部分人骨髓间充质干细胞脑内移植治疗大鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究浙江大学医学院2 0 0 4 级硕士研究生前言内科学( 血液病)樊建玲黄河教授既往认为成体干细胞或组织来源的干细胞只能向所在组织的特定细胞分化,然而现研究发现,至少有部分成体干细胞能向其它谱系细胞分化,即所谓“转分化”,其中包括骨髓来源的一种成体干细胞骨髓间充质干细胞( M s C s ) ,又称骨髓基质细胞( B M s c s ) I 。捌。研究发现,M s c s 在体外不同诱导剂作用下能分化为骨骼肌细胞( 3 1 、心肌细胞【“、肝细胞【钉、星形胶质细胞【6 1 和神经元m 1 。尤其M s c s 跨胚层向神经系统分化引起广泛兴趣。目前,许多学者将自体或同种异綦因M S c s 通过局部注射、腹腔注射或静脉输注方式移植至各种神经变性疾病模型大鼠体内,包括帕金森氏病【9 、脑梗塞【1 。1 列脑外伤 1 4 。6 1 、脊髓损伤18 1 等。研究发现移植
2、后自体或同种异体M s c s 均能在中枢系统中长期存活,归巢至损伤部位,部分细胞表达星形胶质细胞标记蛋白:如G F A P ,和神经元标记蛋白:如微管相关蛋白( M A P 2 ) ,神经元核蛋白( N e u N ) 等,脑源性神经营养冈子( B D N F ) 、神经生长因子( N G F ) 等分泌上调,疾病相关的神经功能缺陷显著改善阻1 6 】。因此,M s c s 在神经系统中有着广+ 泛的应用前景。但国内、外关于M s c s 治疗缺氧缺I f I 性脑损伤( H I B D ) 研究报道不多。缺氧缺血( H I ) 诱导的脑损伤是一种弥漫性、进行性的神经元坏死和神经元程序性死亡。H I 几小时后脑内即可出现一批神经元死亡,而且这种损伤能持续几浙江大学硕士学位论文周甚至几个月,这种持续神经元丢失可能导致长期甚至永久性神经功能缺陷。因此,H I B D 是一类具有代表性的严重、弥漫性神经元变性疾病。目前对缺氧缺血性脑损伤缺乏有效的治疗手段。许多围内外研究表明,将神经干细胞体外培养后,局部注射到H I B D 大鼠脑内,能有效修复缺氧缺血导致的神经功能缺损【2 0 1 2 “
3、。但N s c s 取材有限,受伦理道德的限制,体外不易培养、扩增:易分化而失去增殖能力。与N s c s 相比,M s c s 具有取材方便,可取自自体骨髓,在体外培养下易扩增,不改变生物学特性;低免疫原性,能解决配型难的问题;不受伦理道德的限制等优点。啮齿类动物来源M s c s 在神经损伤疾病中的神经保护效应己被广泛证实M “,但人骨髓间充质干细胞( h M s C s ) 在体内的生物学行为及是否具有神经保护效应较少报道,而实验的最终目的是将h M s c s 用于临床,因此,之前必需对h M s c s 在体内的生物学特性深入研究。免疫排斥是干细胞用于异体替代治疗的一个重要问题,M s c s 具有独特的免疫学特性:不表达H L A l I 类分子,不表达F A s 配体和共刺激分子如B 7 1 、B 7 2 、c D 4 0 L ,为天然无免疫原性,但关于异种移植研究报道较少。本研究组一直从事h M s c s 的研究,在h M s c s 体外的牛- 物学特性,免疫学特性及端粒凋控等方面已有深入研究。为探讨未用免疫抑制剂下,h M S C s 能否在免疫功能健全的异种动物
4、体内长期存活、迁移、分化及能否治疗H I B D 大鼠,本实验以幼年大鼠H I B D 为模型,将h M S c s 定位注射到大鼠脑内,研究多向分化潜能h M s c s 在幼年大鼠弥漫性脑损伤微环境下能否存活、表达神经元或星形胶质细胞表型及促进缺氧缺血导致的脑损伤的修复。浙江大学硕士学位论支材料与方法一、实验材料、仪器、试剂和实验动物1 、主要实验仪器、材料l l 细胞培养箱( H e r a e u s ) ,超净台( F o m as c i e n t m cI n c ) ,倒置显微镜( O L Y M P u s 公司) ,光学显微镜( O L Y M P u s 公司) ,低温离心机( H e r a e u s仪器公司) ,超速台式离心机( H e r a e u s 公司) ,一7 0 冰箱( ( F o m as c i e n t i f i ch 地) ,T - 2 5 c m 2 细胞培育瓶( 0 r a n g e ) ,细胞培育六孔板( F a n d o n ) 。1 2 混合气体( 8 0 2 、9 2 N 2 ) :杭州电化集团气体有限公司;立体定
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