药学实用仪器分析(课件)紫外-可见分光光度法
86页1、可见 概述 可见分光光度计 小结概 述利用物质对可见 紫外光具有选择性吸收的性质,对物质进行定性,定量分析。紫外,可见光区波长从 200 360 760 010合微量分析要求,相对误差 2 5%而化学分析 相对误差 用范围广二 一)光的二相性:波动性,微粒性其 波动性 描述可用:紫外光 200 36060 7600004000 1 =10 (1 =10时以波数 表述:波数定义:光在真空中通过单位长度距离时的振动次数。 /c 频率 波长 光速c)(/1 1 A。 A。例: =200其频率和波数分别为:( 10 二)光的能量表示:电磁辐射与物质相互作用,所表现出来的发射与吸收现象用 微粒性 解释。每个光子所具有的能量为:波长越长,光子能量越小;反之,越大。(三)分子能级与电磁波谱:分子中有原子,电子。分子,原子,电子运动的能量是量子化的。03 17 5 0 0 0 010200/1/1 能级跃迁电子能级间跃迁的同时,总伴随有振动和转动能级间的跃迁。即电子光谱中总包含有振动能级和转动能级间跃迁产生的若干谱线而呈现宽谱带。n=1n=2是电子能级,每个电子能级都存在几个振动能级。而每个振动能级又
2、存在几个转动能级,整个分子总能量为:由能级图知:当吸收一定能量辐射光的光子时,分子有较低能级跃迁至较高能级,吸收光子的能量必须与分子跃迁的能级差相等,否则不被吸收。即:电磁波谱:近紫外 可见光 红外光 远红外 微波 无线电波外层电子跃迁 分子振动和转动 分子转动 核能级跃迁转振电子总 转振电 光子分子 12 1 基本原理一 收光度法的基本原理比耳定律:描述物质吸光与浓度的关系。朗伯定律:描述物质吸光与厚度的关系。述物质吸光与厚度,浓度的关系。式中: (透光率) 适用形式适用条件:10 10)E 0 a、 b、 吸光系数和吸收光谱:(一)吸收光谱的产生分子有振动、转动、电子能级,由能级图知,跃迁是量子化的,不同跃迁所需能量不同。当用可见 紫外光辐射物质时,引起的是外层电子跃迁,由电子跃迁而产生吸收光谱。因电子跃迁同时伴有振动、转动跃迁,所以吸收光谱是谱带而不是谱线。总( 二 ) 吸收光谱特征峰位所对应的波长为最大吸收波长 谷位所对应的波长为最小吸收波长 肩位所对应的波长为 吸收光谱的峰位及形状取决于物质的分子结构( 三 ) 吸光系数A = 吸光系数 可做物质定性 、 定量依据 。 灵敏度
3、愈高 。求法:当 1. 摩尔吸收系数 :在一定波长时 , 溶液浓度为 1, 厚度为 1: L=1, 长一定时 ,L=1相当于 1%(W/V)时 的吸光度 。注意:不同波长下 ,同 ,所以使用时应注明波长 。摩尔吸光系数与比吸光系数关系:%111110 多用于研究分子结构多用于含量测定%11 霉素 ( 78 00% = 求: , 解:弱吸收中强吸收强吸收444101010m a xm a xm a x%1 010%11 比耳定律的原因标准曲线法测定未知溶液的浓度时,发现:标准曲线常发生弯曲(尤其当溶液浓度较高时),这种现象称为对朗伯 比耳定律的偏离。引起这种偏离的因素(两大类):一类是物理性因素,即仪器的非理想引起的;另一类是化学性因素。三 = 一 ) 化学因素 :当溶液中浓度改变时, 溶液可能产生离解 , 缔合与溶剂间的作用等而产生偏离 。例:亚甲蓝阳离子水溶液单体吸收峰在 660聚体吸收峰在 610浓度增大 660 610 从而使吸收度与浓度关系发生偏离 。(二)光学因素:单色光是 真正的单色光难以得到。当波长为 1, 2光同时照样品时:如:散射、反射、非单行光等均可使 般用空白溶液
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