肝炎类核酸检测试剂注册申报要求

肝炎类核酸检测试剂申报要求-乙肝与丙肝核酸定量与分型CMDE 吕允凤2016.11 苏州临床应用的需求与风险三类定量与分型诊断与治疗0102核酸检测方法学的多样肝炎类核酸检测试剂的总体特点方法原理产品性能03 技术创新与产品创新 PCR相创关新技术的面临法规与管理的更新04法律法规更新审评模式更新产品审评要求细化相关指导原则发布情况乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸定量检测试剂注册技术审查指导原则 2013年审评具体情况丙型肝炎病毒核糖核酸测定试剂技术审查指导原则 2016年乙型肝炎病毒基因分型检测试剂技术审查指导原则 2016年总体主要内容申 具报 体注 审意 评事 要项 求一 乙型肝炎病毒DNA定量检测试剂丙型肝炎病毒RNA定量检测试剂乙型肝炎病毒DNA分型试剂二三一乙型肝炎病毒DNA定量检测试剂HBV DNA定量试剂背景HBV属嗜肝脱氧核糖核酸（DNA）病毒科（hepadnaviridae）基因组长约3.2 kb，为部分双链环状DNA。急性HBV感染DNA：先阳性后消失。慢性HBV感染的自然史一般可分为4个期。慢性乙肝DNA水平3000020000100000免疫耐受期免疫清除期非活动或低（非）复制期再活动期实时荧光PCR方法的HBV DNA检测试剂9个基因型（AI），又可分为不同亚型，且有重组现象。我国已发现A、B、C、D基因型。HBV DNA定量试剂主要内容目录01说明书 说明书编写注意事项 主要原材料、生产工艺及反应体系研究资料02研发 分析性能评估资料目录 阳性判断值及稳定性研究资料 产品技术要求及注册检验 临床试验的具体要求 注意事项03临床 已注册产品涉及的变更 常见问题04其他相关HBV DNA定量试剂说明书预期用途的限定及表述：（1）试剂盒用于定量检测人血清、血浆等样本中的HBV DNA；（2）待测人群：主要为接受抗病毒治疗的乙型肝炎患者。（3）临床用途：主要通过对乙型肝炎患者血中HBV DNA基线水平和变化情况的监测，用于评估抗病毒治疗的应答和治疗效果监测。如有其他用途（如隐匿性感染的辅助诊断）则应对产品适应症人群、预期用途另行说明，并提供与之相应的分析性能评估以及临床验证等资料。（4）说明该试剂检测结果不得作为患者病情评价的唯一指标，必须结合患者临床表现和其他实验室检测对病情进行综合分析。（5）明确说明该检测试剂不得用于血源筛查。HBV DNA定量试剂说明书体外诊断试剂说明书编写指导原则项目与格式整体要求技术内容以研发资料为基础，前后一致。中文表述、单位、英文缩写表述的明确与规范。【主要组成成分】所含组分：名称、数量、浓度。不含但需要的组分：名称、注册号、其他信息。核酸分离 纯化组分具体项目*/【储存条件及有效期】储存条件、有效期、开封稳定性等。生产日期及失效日期。【样本要求】适用的样本样本类型、抗凝剂；样本保存运输条件；如需稀释，稀释方法。HBV DNA定量试剂说明书【检验方法】详细说明各个步骤：具体项目试剂准备、样本提取、扩增准备及过程、设置、校准方法、有效性判断要求（质控、内标Ct值要求）等。应结合扩增曲线、内标及质控的Ct值要求分别界定。可以列表形式。【检验结果的解释】单位用IU/mL;明确界定低于检出限、高于检出限并低于定量限、高于定量限并在检测范围内、高于检测范围上限的不同结果。【检验方法的局限性】仅供临床参考；何种情况可能导致错误结果；仅用于哪些样本及仪器。【产品性能指标】完整总结产品性能研究结果。其他项目：严格执行编写指导原则要求，如【基本信息】等。HBV DNA定量试剂研发过程资料主要原材料研究资料dNTP（纯度、浓度、稳定性等原料选择、制备、定值制备、定值过程。证资料）过程及试验资料。主要组成建议采用灭活病毒的血清/血浆建立参考品，不宜使用质粒。引物（序列选择过程、序列准确内标设置应合理原理介绍性、纯度、稳定性、功能性等）质控品宜采用混合阴性人血浆或血清作为基质。相关的验证资料探针（选择过程、纯度、荧光标物、功能性验证等）阳性（线性）、阴性、酶（活性验证、稳定性、功能性灵敏度、精密度HBV DNA定量试剂研发过程资料主要生产工艺及反应体系研究资料生产工艺反应体系基本生产工艺主要包括：配制工作液、半成品检定、分装和包装。可以图表方式主要生产工艺介绍。对反应体系涉及的基本内容，如样本类型、样本用量、试剂用量、反应条件、校准方法、质控方法、稳定性和有效期，应提供确切的依据。HBV DNA定量试剂研发过程资料主要生产工艺及反应体系研究资料介绍反应原理123核酸提取内标基因位点选择、PCR方法学特征介绍校准质控反应体系各步骤设计验证PCR体设外部适配HBV DNA定量试剂研发过程资料主要生产工艺及反应体系研究资料内标核酸提取DNA提取纯化方法优化，建议包含纯化步骤.样本反应管应设置合理的内对照（内标）。内标、校准品、质控品均应全程参与提取纯化.应对内标的引物、探针和模板的浓度做精确验证。不建议采用煮沸法进行DNA提取。对内标的Ct应有明确的范围要求。HBV DNA定量试剂研发过程资料主要生产工艺及反应体系研究资料校准质控外部适配质控品应至少设置三个量级水平的系列质控品:临界阳性、强阳性和阴性。不同适用机型的反应条件的对比分析及验证校准品和质控品均应参与样本核酸的平行提取。应对质控品的Ct有明确的范围要求。HBV DNA定量试剂研发过程资料主要生产工艺及反应体系研究资料确定最佳PCR反应体系的研究资料，包括酶浓度、引物/探针浓度、PCR体系dNTP浓度、阳离子浓度、样本量、加样量及反应体积等。样本量应不少于200微升，加样量和反应体积参考相应行业标准，经研究验证后确定。设置确定PCR各阶段温度、时间及循环数的研究资料。对于基线阈值（threshold）和阈值循环数（Ct）确定的研究资料。HBV DNA定量试剂研发过程资料分析性能评估资料资料要求：生产者在产品研制或成品验证阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料。对于每项分析性能的评价都应包括具体研究目的、实验设计、研究方法、可接受标准、实验数据、统计方法等详细资料。有关分析性能验证的背景信息也应在申报资料中有所体现，包括实验地点（实验室）、适用仪器、试剂规格、批号、临床样本来源等。关注项目：核酸提取、灵敏度、线性、准确度、精密度、基因型的覆盖、特异性、溯源性等。HBV DNA定量试剂研发过程资料分析性能评估资料 核酸提取验证无论申报产品是否含有DNA分离/纯化的组分，都应对核酸提取的环节做详细的验证。应包含纯化步骤，尽可能去除PCR抑制物。应结合申报产品的特性，合理选择DNA分离/纯化试剂，并提供详细的验证资料（提取效率、与后续试验的配合等）。HBV DNA定量试剂研发过程资料分析性能评估资料灵敏度最低检出限和定量限的验证最低检出限与定量限的确定：申报试剂应在最低检出限或接近最低检出限的病毒浓度对不同基因型（至少包括B、C、D型）进行验证，总测试数不少于60次。定量限的验证应对不同基因型（至少包括B、C、D型）进行验证，总测试数不少于40次。建议使用国际参考品/国家参考品进行梯度稀释并多次检测，将具有95%以上阳性检出率的病毒水平作为最低检出限。建议最低检出限应不高于30IU/ml。定量限应高于或等于检出限，将多次（至少10次）测量的结果符合试剂准确度要求的最低病毒水平作为定量限。企业应能够提供用于最低检出限/定量限验证的各个病毒株的来源、型别确认及滴度确认试验等信息。HBV DNA定量试剂研发过程资料分析性能评估资料线性范围线性范围线性范围确定的研究应使用高值临床样本（由可溯源至国家参考品/国际参考品的方法定量）进行梯度稀释稀释液应使用经确认为阴性的混合人血清或血浆应包含不少于9个浓度（应包含接近最低检测限的临界值浓度）使用至少3个批次的试剂进行试验。通过评价一定范围内的线性关系及各水平的准确度确定该产品的线性范围。HBV DNA定量试剂研发过程资料分析性能评估资料准确度回收试验：方法学比对：国家/国际通常对样本进行35次回收试验，取平均值即平均回收率。回收试验注意事项：加入的标准液体积一般应小于样本体积的10%；尽量使加入标准液后样本中的被测物浓度接近医学决定水平；标准物的浓度应该足够高，以得到不同浓度的回收样本；采用参考方法或国内/国际参考品验证。普遍认为质量较好的同类试剂作为对比方法，与拟申报试剂同时检测一批病人样品，从测定结果间的相关性了解拟申报试剂与参比方法间的一致情况。严格按照参考品说明书要求进行验证。注意基质效应，尽量采用与临床待测样本一致的基质HBV DNA定量试剂研发过程资料分析性能评估资料精密度可能影响检测精密度的主要变量：试剂、PCR分析仪、操作者、地点等。合理的精密度评价周期：从而对批内/批间、日内/日间以及不同操作者之间、不同实验室的精密度进行综合评价。质控品应至少包括四个水平:阴性质控品、临界阳性质控品、弱阳性质控品、强阳性质控品。（n20）HBV DNA定量试剂研发过程资料分析性能评估资料基因型覆盖B、C、D型：重点考察各基因型病毒样本的分析灵敏度、准确性及精密度指标，每个基因型的病毒样本稀释成至少3个浓度水平，对每水平样本进行重复测定。HBV DNA定量试剂研发过程资料分析性能评估资料特异性交叉反应：微生物主要考虑以下几方面可能性：核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的临床症状。建议在病毒和细菌感染的医学相关水平进行交叉反应的验证。通常，细菌感染的水平为106 cfu/ml或更高，病毒为105 pfu/ml或更高。人巨细胞病毒E-B病毒单纯疱疹病毒1型单纯疱疹病毒2型甲型流感病毒痤疮丙酸杆菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌人类免疫缺陷病毒丙型肝炎病毒甲型肝炎病毒梅毒应提供所有用于交叉反应验证的病毒和细菌的来源、种属/型别和浓度确认等试验资料。人类疱疹病毒6型HBV DNA定量试剂研发过程资料分析性能评估资料特异性干扰物质：内源性物质和常用的治疗药物物质人白蛋白使用医学相关水平的干扰物浓度进行验证；胆红素*建议在每种干扰物质的潜在最大浓度(最差条件)条件下进行评价。游离血红蛋白*甘油三酯*常见药物干扰，建议参照相应药物药代动力学研究确定的治疗药物浓度添加相应药物进行干扰验证。系统性红斑狼疮患者血抗核抗体类风湿因子总G型免疫球蛋白（IgG）*建议在病毒的检测临界值水平对每种干扰物质的干扰影响进行检测。*为必须验证的干扰物质。HBV DNA定量试剂研发过程资料分析性能评估资料溯源性应提交详细的溯源性研究资料。企业制备的企业内部参考品、二级参考品、用于制备商品化校准品的储备液以及不同基因型的阳性样本均应能够溯源至国家参考品/国际参考品。使用国家参考品/国际参考品为校准品，应用多台仪器对企业一级参考品进行校准，以下逐级对企业二级参考品、校准储备液、阳性参考品进行校准。HBV DNA定量试剂研发过程资料分析性能评估资料其他问题关于不同机型关于不同规格关于不同样本类型HBV DNA定量试剂研发过程资料阳性判断值研究资料主要是指Ct的确认资料。建议申请人采用受试者工作特征（ROC）曲线的方式对申报产品用于结果判断的临界值予以确认。注意：内标Ct值、阳性判断Ct值、阳性对照Ct值要求。稳定性研究资料试剂稳定性：效期、开瓶、冻融等；样本稳定性：保存、冻融。HBV DNA定量试剂研发过程资料产品技术要求及注册检验产品技术要求：国家参考品（如有）/企业参考品要求。注意灵敏度指标。附录编写：主要原材料来源、质量要求、主要生产工艺、半成品检定要求。格式严格执行指导原则。HBV DNA定量试剂研发过程资料产品技术要求附录主要原材料：主要材料包括引物、探针、各种酶及脱氧三磷酸核苷（dNTP）。来源、质量控制。企业外购原材料：生产企业应明确供货商名称，供货商应相对固定，不得随意更换。生产企业还应确定主要原材料的质量控制标准。企业自制原材料：生产企业应明确原材料的制备原理，摘要性描述制备过程，确定主要原材料的质量控制标准。引物、探针：应明确所有引物、探针相关的合成、纯化、验证及主要技术指标要求等信息。HBV DNA定量试剂研发过程资料产品技术要