微生物浸入试验.docx

本文格式为Word版，下载可任意编辑微生物浸入试验 类别：技术标准 部门：生产技术部 冻干生产线压塞、扎盖密封系统完好性验证 编码： 页码：共4页，第1页 1.目的： 1.1.通过微生物侵入试验确认冻干生产线中压塞、扎盖密封系统是否完好 2.编制依据： 2.1 .《药品生产质量管理模范》2022年版 2.2 .《中国药典》2022年版二部 3.支持性文件： 标 题 文件编号 存放地点 4.概述： 4.1. 微生物侵入试验是对容器/密封系统完好性的挑战性试验在验证试验 中，取西林瓶，装入培养基，在正常生产线上压塞、扎盖此后，将容器密封面 侵入高浓度运动菌液中，取出、培养并检查是否有微生物侵入，以确认容器密封 系统完好性此同时，需作阳性对照试验，确认培养基的促菌生长才能 5.范围： 本确认方案适用于本公司冻干生产线压塞、扎盖密封系统完好性验证 6.测验材料 大豆胰蛋白胨肉汤培养基（SCDM/2）、铜绿假单胞菌(ATCC 9027) 、革兰染 色、含0.5％的过乙酸的70％异丙醇、冻干粉针生产线西林瓶、胶塞、铝盖、冻 干粉针生产线压塞机及轧盖机、盛菌悬液的容器、固定西林瓶支架等。

7.时间安置 年 月 日 ——— 年 月 日 类别：技术标准 部门：生产技术部 冻干生产线压塞、扎盖密封系统完好性验证 编码： 页码：共4页，第2页 8.试验步骤 8.1.试验用培养基的制备 8.1.1.在生产线上取足够量按相应清洁灭菌规程制备好的西林瓶、灌装已灭 菌的SCDM/2(大豆胰蛋白胨肉汤)培养基，在冻干生产线上抽真空、压塞及扎盖 将西林瓶密封 8.1.2.将密封良好的西林瓶取出，每一西林瓶倒转，使培养基与容器内外观 充分接触，并提防去除至少50个试样的铝盖，留神不要破坏其密封口（将去铝 盖时不慎损坏容器密封性的全体试样剔除），在30~35℃下竖放培养14天 8.1.3.采纳标准：在培养期内，各试样不生长菌 8.2.确认培养基促菌生长才能----养分性试验 8.2.1.全体试样培养14天均不长菌时，随机取出20个带盖试样，每个试样 内接种0.1ml的铜绿假单胞菌ATCC 9027，菌液浓度：10~100CFU/0.1ML 8.2.2.在30~35℃下培养7天，或培养至全体试样都呈阳性结果。

8.2.3.若7天内，全体接种铜绿假单胞菌的试样中，微生物生长良好，那么容 器内培养基的促菌生长才能合格 8.2.4.可是使用革兰染色和紫外灯下肉汤呈蓝绿色荧光的性质，来鉴定并确 认试样容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌 8.3.挑战菌悬浮液的制备 8.3.1.从铜绿假单胞菌ATCC 9027的崭新斜面上取一整环培养物，分别接入 含 6ml无菌培养基的试管中，在30~35℃下培养16~18小时 8.3.2.将每管的培养物分别转入含600ml一致培养基（SCDM/2）的容器内， 于在培养终止时，能明显见容器内培养基展现浑浊 30~35℃下培养22~24小时8.3.3.在挑战试验开头时，挑战用菌悬液浓度（活菌数）务必达成： 6 1*10CFU/ml 8.3.4培养终止后的菌悬液即可用来作压塞、扎盖密封系统系统完好性试验 8.4.微生物侵入试验 本试验需在生物安好柜内或其他不影响生产环境的地方举行 类别：技术标准 部门：生产技术部 冻干生产线压塞、扎盖密封系统完好性验证 编码： 页码：共4页，第3页 8.4.1.将崭新的铜绿假单胞菌ATCC 9027菌悬液倒入适合的盆中，用金属支 架固定试样容器，使试样倒置在菌悬液中。

8.4.2.将50个经过冻干线的抽真空、压塞、扎盖的西林瓶的试样倒置入菌悬 液中，该组试样记为A组同时，将25个去除铝盖的试样容器倒置入菌悬液中， 该组试样记为B组试样容器内的无菌培养基应充分接触封口内外观，样品的 颈部及封口的外外观应完全浸泡在悬液中） 8.4.3. 测验开头时取一份菌悬液，平板计数每毫升所含的活菌数，并通过革 兰染色方法确认微生物是铜绿假单胞菌 8.4.4.将A组及B组试样容器在菌悬液中持续浸泡约4小时 8.4.5.浸泡终止时，利用平板计数法计数菌悬液的浓度从菌悬液中取出试 样，擦干试样容器外的剩余菌悬液，然后用含0.5％的过乙酸的70％异丙醇消毒 容器外外观 8.4.6.取装满培养基的有铝盖和去铝盖的样品各两个，作为阳性对照阳性 对照试样不经过菌悬液的浸泡，其外表用含0.5％的过乙酸的70％异丙醇消毒， 后接入10~100CFU铜绿假单胞菌ATCC 9027 8.4.7.将消毒后全体的试样放在塑料袋中，在30~35℃下培养7天在操作过 程中不要损坏无铝盖试样胶塞的密封性 8.4.8.培养7天后，对每一试样举行查看检查，有微生物生长记作“+”，无 微生物生长记作 “—”。

将结果记录在《冻干生产线压塞、扎盖密封系统完好性 试验结果记录》 类别：技术标准 部门：生产技术部 冻干生产线压塞、扎盖密封系统完好性验证 编码： 页码：共4页，第4页 8.4.9.假设容器中长菌，利用革兰氏染色法鉴定所长菌为铜绿假单胞菌；如 果容器中不长菌，那么从浸过菌悬液的 A组取10个试样，B组取5个试样，分别 举行微生物养分性试验 注1：在测验的过程中全体的养分试验务必都合格，这样试样的挑战试验才有效果 注2：挑战试验所用菌悬液需经过灭菌后丢弃 注3：在培养期内，察觉任何带盖试样长菌时，那么试验无效，须弃去全部试样，重新从 头开头 9.接收标准 9.1.微生物养分性试验 9.1.1.若7天内，全体接种铜绿假单胞菌的试样品中，微生物生长良好，那么 容器内培养基的促菌生长才能可判为合格使用革兰氏染色镜检，并置于紫外灯 下，培养基呈蓝绿色荧光，那么确定试样品容器内生长的菌为所接入的铜绿假单胞 菌，即为阳性 9.1.2.若7天内，所接种的铜绿假单胞菌的试样品中，微生物生长不良好或 鉴别后受其他的污染，那么试验失败，需重新做养分性试验 9.2.微生物侵入试验 9.2.1挑战试验中A组和B组假设长菌，需记录长菌的试样数 ，在A组中 如展现长菌试样那么需经过以下要求进一步调查。

9.2.2.留心去除微生物生长的容器的盖和塞，检查容器封口是否有缺损，造 成微生物入侵，将检查到试样容器口缺损的应当细致的记录 9.2.3. 假设任何挑战试验中长菌的容器不是由于容器封口明显的物理性缺 损所致，那么说明容器/密封系统挑战试验失败 表1：微生物养分性试验检测记录 接种日期 接入菌种 接种人 培养天数 复核人 检查查看结果 检查人 — 5 —。