【金学案】-人教高中生物选修习题-专题-课题血红蛋白的提取和分离.docx

课题3血红蛋白的提取和别离5小建J知识梳理拨"一、凝胶色谱法一一血红蛋白的别离方法1•概念凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小别离蛋白质的有效方法，也称作分配色谱法2. 原理(形态：微小的多孔球体(1) 凝胶｛组成：大多数由多糖类化合物构成〔结构：内部有许多贯穿的通道(2) 别离原理：① 相对分子质量较小的蛋白质：容易进入凝胶内部的通道,路程较长,移动速度较慢，通过凝胶柱的时间较长② 相对分子质量较大的蛋白质：无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短,移动速度较快，通过凝胶柱的时间较短二、缓冲溶液1. 作用在一定范围内，缓冲溶液能够抵抗外界的酸和碱对溶液DH的影响，维持pH根本不变溶液；洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，以利于后续步骤的别离纯化2)透析袋一般是用硝酸纤维素制成的，透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保存在袋内，透析可以去除样品中分子量较小的杂质或用于更换样品的缓冲液3)凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小别离蛋白质的方法，因此，通过用凝胶色谱法去除相对分子质量较大的杂质答案：(1)①防止血液凝固②血红蛋白的释放③去除杂蛋白(2) ①去除相对分子质量较小的杂质②透析袋能使小分子自由进出，而大分子那么保存在袋内(3) 通过凝胶色谱法去除相对分子质量较大的杂质13.血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中。

2或C02的运输请根据血红蛋白的提取和别离流程图答复以下问题1) 将实验流程补充完整2) 凝胶色谱法的根本原理是根据别离蛋白质3)洗涤红细胞的目的是去除，洗涤干净的标志是（4）别离血红蛋白时，由上到下第（4）别离血红蛋白时，由上到下第层是血红蛋白水溶液5）下面是凝胶色谱法别离血红蛋白时样品的参加示意图，正确的加样顺序是,说明色谱柱制作成功L贴着管r物样缓(D使吸管管口沿（6）如果红色区带解析：（1）样品处理包括：红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、别离血红蛋白溶液凝胶色谱操作包括：凝胶色谱柱的制作、凝胶色谱柱的装填、样品的参加和洗脱2）凝胶色谱法的根本原理是根据相对分子质量的大小别离蛋白质3）洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白,洗涤干净的标志是上清液中没有黄色4）别离血红蛋白时，可明显看到试管中的溶液分为4层：第一层为无色透明的甲苯层；第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层；第3层是红色透明液体，是血红蛋白的水溶液；第4层是其他杂质的暗红色沉淀物5）加样顺序是：调整缓冲液面、滴加透析样品、样品渗入凝胶床、再调整缓冲液面6）如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功答案：（1）血红蛋白的释放凝胶色谱柱的装填（2）相对分子质量的大小（3）杂蛋白（或血浆蛋白）离心后的上清液中没有黄色⑷三（5）④①②③（6）均匀一致地移动2. 配制通常由1〜2种缓冲剂溶解于水中配制而成，调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。

三、电泳——血红蛋白的别离或鉴定方法1. 概念带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程2. 原理(1)许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团,在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电2) 在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动3) 电泳利用了待别离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的别离四、蛋白质的提取和别离过程蛋白质的提取和别离一般分为四步：样品处理、粗别离、纯化和纯度鉴定知能提计4一、选择题1.使用凝胶色谱法别离蛋白质实验中，相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为以下图中(B)解析：凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小别离蛋白质的有效方法相对分子质量较小的蛋白质能进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子质量大的蛋白质，路程较短，移动速度较快,首先洗脱出来2. 使用SDS-聚丙烯酰胺电泳的过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于(B)A. 电荷的多少B.分子的大小C.肽链的多少D.分子形状的差异解析：SDS能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复合物，SDS所带的负电荷量大大超过蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差异，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。

3. 在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是(D)A. 防止血红蛋白被氧气氧化B. 血红蛋白是一种碱性物质，需磷酸中和C. 磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程D. 让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和性质解析：磷酸缓冲液的作用是稳定pH,从而维持血红蛋白的结构和性质4. 蛋白质的别离与纯化是蛋白质研究的重要技术以下有关表达不正确的选项是(A)A. 根据蛋白质分子不能透过半透膜的特性，可将样品中各种不同的蛋白质别离B. 根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小等，可通过电泳别离蛋白质C. 根据蛋白质相对分子质量的大小，可通过凝胶色谱法别离蛋白质D. 根据蛋白质的分子大小、密度不同，可通过离心沉降法别离蛋白质5. 在提取血红蛋白的样品处理阶段，洗涤红细胞十分重要，其目的是(B)A. 让红细胞破裂，释放血红蛋白B. 洗去血浆蛋白C. 防止血液凝固D. 保证红细胞的正常形态解析：血液中含有多种蛋白质，除红细胞内的血红蛋白，血浆中还含有多种蛋白质，这些蛋白质在血红蛋白释放出后会与其混合，需要在红细胞破裂前将其除去6. 蛋白质提取和别离分为哪几步(C)A. 样品处理、凝胶色谱操作、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳B. 样品处理、凝胶色谱操作、纯化C. 样品处理、粗别离、纯化、纯度鉴定D. 样品处理、纯化、粗别离、纯度鉴定解析：蛋白质的提取和别离分为样品处理、粗别离、纯化、纯度鉴定四步。

A中凝胶色谱操作及SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳为实验操作过程中的技术7. 以下对凝胶电泳的相关认识，错误的选项是(A)A. 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率只取决于分子的大小B. 蛋白质在SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率完全取决于分子的大小C. SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳不仅用于蛋白质相对分子质量的测定，还可用于蛋白质混合组分的别离D. 凝胶中参加SDS可以消除净电荷对迁移率的影响解析：SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的负电荷，消除了不同蛋白质分子的电荷效应，使蛋白质分子相对迁移率的大小完全取决于相对分子质量的上下8. 在血红蛋白的提取和别离实验中，以下操作正确的选项是(A)A. 别离红细胞时需去除上层透明的黄色血浆B. 红细胞释放出血红蛋白时只需参加蒸馅水C. 别离血红蛋白溶液是低速短时间离心D. 洗脱时，待红色蛋白质下移即开始收集流出液解析：别离红细胞时要及时除去血浆蛋白释放红细胞时需要参加蒸简水和甲苯别离血细胞时，要短时低速离心，即一般为500r/min,离心2min,否那么白细胞会一同沉淀，达不到别离效果别离血红蛋白时要高速长时间离心，以2000r/min的速度离心10min。

洗脱时待红色的蛋白质接近色谱柱底端用试管收集流出液9. 以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的选项是(D)A. 洗涤血红细胞时，使用生理盐水可以防止红细胞破裂B. 猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少C. 血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法别离过程的监测D. 在凝胶色谱法别离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢解析：在凝胶色谱法别离蛋白质的过程中，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的分子无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快所以血红蛋白分子比相对分子质量较小的杂分子移动速度要快10. 以下有关提取和别离血红蛋白的表达，错误的选项是(B)A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化D. 可通过SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度解析：粗别离即透析，其目的是除去样品中相对分子质量较小的杂质，B错误二、非选择题11. 如今人类已跨入了蛋白质时代，对蛋白质的研究和应用，首先需要获得高纯度的蛋白质。

请答复以下问题1) 蛋白质的提取和别离一般分为四步：、、和纯度鉴定2) 如果要从红细胞中别离出血红蛋白，实验前取新鲜血液要在采血容器中预先参加柠檬酸钠，这样做的目的是(3) 血红蛋白的提取又可以细分为：红细胞的洗涤、、别离血红蛋白溶液和o其中别离血红蛋白溶液时需要用到(仪器)别离出下层红色透明液体4) 装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现有气泡必须重新装这是因为(5) 欲探究色谱柱的高度是否影响蛋白质别离的因素，应把作为自变量，把作为无关变量，把作为因变量答案：(1)样品处理粗别离纯化(2) 防止血液凝固(3) 血红蛋白的释放透析分液漏斗(4) 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低别离效果(5) 色谱柱的高度变化缓冲液的用量和pH、样品的用量、温度等因素大小不同的蛋白质分子的间距12. 红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的我们可以选用猪、牛、羊等动物的血液进行实验，来提取和别离血红蛋白，请答复以下有关问题：(1) 实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先参加柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液① 其中参加柠檬酸钠的目的是② 此过程即是样品处理，它应包括红细胞洗涤、、别离血红蛋白溶液。

③ 洗涤红细胞的目的是(2) 收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析，这就是样品的粗别离①透析的目的是②透析的原理是(3) 然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定其中通过凝胶色谱法将样品纯化的目的是解析：(1)柠檬酸钠是一种抗凝剂，参加柠檬酸钠可以防止血液凝固；样品处理包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、别离血红蛋白。