影响肉羊胚胎移植效果的因素分析.doc

影响肉羊胚胎移植效果的因素分析郭宪，程胜利，杨博辉，焦　硕，冯瑞林（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，甘肃兰州　730050）摘　要：胚胎移植技术是肉羊繁殖中的一项高新技术本文从实验记录、实验材料、环境因素、母体因素、人工授精、胚胎因素、操作者技术水平、移植后饲养管理等方面分析讨论肉羊胚胎移植中的影响因素，旨在分析肉羊胚胎移植中的质量控制点，为提高肉羊胚胎移植效果提供技术参考关键词：肉羊；胚胎移植；质量控制　　羊胚胎移植（EmbryoTransfer）技术是指对生产性能优良和遗传性稳定的母羊经过超数排卵处理后，将早期胚胎从体内取出，分别移植到受体母羊子宫内，使之产出优良后代的技术胚胎移植技术是快速扩繁良种家畜的有效途经，随着胚胎工程技术的深入研究和商业化的推广应用，肉羊胚胎移植技术在不断完善和成熟，移植的效率和水平也在不断提高但在胚胎移植的过程中，存在着多种因素直接或间接影响到胚胎移植的效果，以致影响胚胎移植最终的效率本文拟从实验记录、实验材料、环境因素、母体因素、人工授精、胚胎因素、操作作者技术水平、移植后饲养管理等方面分析影响肉羊胚胎移植效果的因素，旨在为提高肉羊胚胎移植效率提供技术参考。

1　实验记录　　信息采集是质量控制分析的基础在肉羊胚胎移植中，首先要熟知胚胎移植的各个环节和程序，合理设计生产方案，明确实验目的和规范实验操作羊胚胎移植的主要技术程序包括供、受体羊选择，供、受体羊同期发情处理，超数排卵，供、受体羊发情鉴定，配种或人工授精，胚胎的采集与鉴定，胚胎的移植与冷冻等在肉羊胚胎移植的整个程序中，做好实验记录是关键实验记录要全面、翔实，因为实验结果的分析来源于对记录的研究和分析无论实验成功与失败，都要对整个实验程序作出全面的分析，并总结经验供下次实验参考与借鉴对发情鉴定、人工授精、胚胎评定、胚胎移植等程序做出记录，是保证胚胎质量、提高羊胚胎移植效率的重要信息2　实验材料2.1　激素　　超数排卵处理时，激素的剂量受母羊的年龄、胎次、子宫内环境、营养水平、体重等多种因素的影响同时激素的种类、稀释、贮存、注射部位、注射方法等都对超数排卵效果有一定的影响经产肉羊、初产肉羊的激素处理，应区别对待，根据种类和体重适量调整2.2　试剂　　试剂质量的保证是羊胚胎移植质量控制的前提胚胎移植中，培养液效果的好坏受营养成分、生产批次等各方面因素的影响水是培养液的主要成分，容易出现污染，如溶解有离子化或非离子化的固体和气体、特殊物质、微生物和热原质，故使用无菌、超纯的水至关重要。

纯化水的基本方法是玻璃蒸馏、去离子、过滤、逆渗透、吸收和超滤，应经常进行严格的质控检测以保证水的纯度对水纯度检测最令人信赖的方法是检测电导性水的质量和高度无菌条件是配制试剂的必须条件，用0.2µm滤器可以去掉所有细菌培养液中另一主要成分是血清，血清成分十分复杂，不同批次的血清成分有差异在实验时需对不同批次的血清进行检测，以选择最好的血清在羊胚胎移植中，配制的培养液至少还需要检查pH值和渗透压渗透压可以用渗透压计来测量或者通过观察红细胞的收缩和膨胀来粗略的判定pH值可通过pH计或pH试纸来测定无菌性，可在37℃过夜培养样本并在第2天检查微生物来判定毒性，可通过培养小鼠的2-细胞胚胎，检查是否能支持其发育来确定如果使用石蜡油，同样要检查它的无菌性和毒性试剂和药品的贮存和放置，应严格区分和合理保管，同时溶液的配制要准确并保持无菌，避免发生称量错误每一批培养液都要贴上标签并冷冻储藏，直到产生一定的受胎率2.3　设备和耗材　　设备和耗材应无毒无菌或正确使用实验室保持干净、整洁无菌条件的同时，培养箱、离心机、电子天平、超净工作台、显微镜、冰箱等常用仪器设备和过滤除菌装置、手术器械、培养器皿、移液器等以及消耗性材料都应保持高度的无菌条件。

在准备培养液时，将有关玻璃容器充分而仔细地冲洗干净并作灭菌处理3　环境因素　　由于受光照等因素的影响，肉羊大多数是季节性发情温度、湿度对肉羊影响较大，高温、高湿对肉羊造成热应激，受热应激的肉羊采食量下降，能量负平衡，黄体酮水平增高，影响发情期的LH分泌，表现为肉羊不发情，受孕率下降，出现异常胚胎、胚胎早期死亡和流产，影响同期发情和超数排卵的成功因此，肉羊的胚胎移植要尽可能的接近其自然繁殖的规律，最好避开5～9月份的高温季节当管理或气候条件不是很理想时，定期检测血液中的孕激素很重要例如在超数排卵和胚胎移植前监控供体和受体体内的孕激素的基础水平，就可以知道热应激和其他因素的应激对发情效率的影响，同时也可以获取孕激素正常变化曲线为适时进行超数排卵和胚胎移植提供依据，这样有助于提高所获胚胎的质量和移植的受胎率4　母体因素4.1　供体　　供体母羊的准备是胚胎移植的一个重要环节，供体母羊品种质量的优劣会严重影响胚胎移植的实际效果供体羊的生产性能要突出，品质优良，这样才能体现胚胎移植的优越性同时，要求供体羊体况适中，体质健康，对化学物质反应敏感，发情周期和生殖机能正常，否则会影响超数排卵的效果4.2　受体　　羊胚胎移植中，受体的状况也特别重要。

发情周期和生殖机能正常，对化学物质反应敏感，体况适中，体质健康，母性和泌乳性能好等都是受体羊应具备的基本条件受体羊的健康状况可通过研究发情间隔和观察生殖道生理变化来判定选择受体时，应充分考虑受体的年龄、胎次、性情、体型结构、营养状况、健康状况等5　人工授精　　保证精液的品质是羊胚胎移植质量控制的保障供体配种的公羊应与母羊品种相一致，应具有优良的遗传特性和较高的育种价值，经血液检查和检疫证明确无布氏杆菌病、结核、副结核、蓝舌病、传染性鼻气管炎等疫病，身体健康状况良好，生殖系统机能正常，性欲强，精液品质好，膘情适中保证配种或授精用精液的品质，是提高受胎率的关键精液处理涉及精液的品质检查、稀释、保存等过程，精液处理方法不当会降低公羊的精液品质精子活力是一项十分重要的指标，采集的原精液、稀释后的精液、经保存后待输精的精液都要进行严格的检查，即精子活力的鉴定冷冻精液用于人工授精时，应从每一批精液中抽出一个细管，进行精子的活力检查正确解冻精液，防止污染同时，在正确位置进行人工授精　　影响受精的因素有输精的时间、次数、部位以及精液的质量等在肉羊的人工授精实际工作中，由于母羊发情持续时间短，加上很难准确掌握发情开始时间，所以一般是在通过试情公羊找出发情母羊的当天，分别在上下午各输配1次，间隔时间以8～12h为宜。

如果第二天仍然继续发情，则继续输配，直到停止发情为止精子的活力也是影响受精率的主要原因，因此在人工授精前一定要抽检精子活力，以保证正常受精6　胚胎因素　　收集到的胚胎不应受到任何不良因素（物理、化学、微生物等）的影响而降低活力胚胎冷冻、解冻程序的规范化，冷冻液、解冻液的合理选择，对保证胚胎的质量至关重要胚胎质量的检测和正确评价是胚胎移植或冷冻保存成功的关键，胚胎移植中生产的胚胎需经专业人员的鉴定，应考虑到胚胎的日龄，结合它的发育状态，评定等级，然后确定胚胎的用途，移植或保存7　操作者技术水平　　肉羊胚胎移植中，应不断提高操作者素质操作者或工作人员需有一定的理论知识和技术水平，思想态度应具有专业素质，同时始终要有无菌意识在检胚过程中，胚胎的丢失应降到最低通过清洗器械并在显微镜下检查胚胎的有无来确定是否移植了胚胎手术部位易发生粘连，操作者需具备相当高的技术水平技术人员的水平可由于能力、态度、训练程度以及其他因素而变化，工作人员的差异可通过比较手术移植的受胎率来确定，如果存在显著的、经常性的差异，就要对其进行再培训，提高其专业素质8　移植后饲养管理　　妊娠前期应满足肉羊对热量的摄取，防止胚胎营养不良而引起胚胎早期死亡。

在妊娠后期应保证肉羊的营养的全面需要，尤其是蛋白质的需要，以满足胎儿的充分发育同时胚胎移植后对早期受孕羊的饲养管理尤为重要，应保持环境相对稳定，避免应激反应加快推广肉羊的标准化饲养，从饲养管理的角度提高肉羊整体健康水平和生产水平，为提高胚胎移植成功率奠定物质基础。