环孢素A血药浓度的HPLC测定方法[精品资料].doc

环孢素A血药浓度的HPLC测定方法-精品资料 本文档格式为WORD,感谢你的阅读 最新最全的 学术论文 期刊文献 年终总结 年终报告 工作总结 个人总结 述职报告 实习报告 单位总结 　　【摘要】 目的：建立环孢素A血药浓度的HPLC测定方法方法：采用反相HPLC的方法，血样经乙醚萃取，正己烷洗脱等处理后测定采用DiamonsilTM C18色谱柱，流动相为乙腈-水（74：26，V/V），流速为1 ml/min，柱温为70 ℃，检测波长为210 nm结果：环孢素A血药浓度在50～1000 ng/ml范围内线性关系良好，R2=0.9997，低中高三种浓度的提取回收率为70.01%～75.00%，方法回收率为98.93%～103.08%，日内精密度RSD为0.84%～4.76%，日间精密度RSD为5.38%～9.87%结论：该方法快速灵敏准确，可用于环孢素A血药浓度的监测 　　【关键词】 环孢素A； 高效液相色谱； 血药浓度监测 　　环孢素A（Cyclosporine A，CsA）是一种强效免疫抑制剂，目前广泛用于器官和组织移植术后的预防和治疗[1]。

然而CsA治疗的有效血药浓度范围为100～450 μg/L，600 μg/L以上即有中毒危险[2]，特别是肝肾毒性明显[3]CsA治疗窗窄，个体差异大，因此，临床应用必须监测其血药浓度本实验建立了一种简单准确的HPLC测定CsA血药浓度的方法，现报告如下 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器与试剂 CsA 标准品，乙醚，正己烷，甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），Agilent 1200型高效液相色谱仪，DiamonsilTM C18色谱柱，GENIUS 6K-D离心机，XW-80A漩涡混合仪 　　1.2 标准溶液的配制 精密称取CsA标准品10.006 mg置于100 ml容量瓶中，用甲醇溶解定容，作为CsA标准品储备（100 μg/mL）用甲醇稀释，分别配成2.5、5、10、25、50 μg/ml的CsA标准品溶液 　　1.3 样品的处理 　　1.3.1 空白血样 取人全血1～10 ml均塞离心管中，加入1 ml 　　0.1 mol/L的NaOH溶液，涡旋2 min，加入5 ml乙醚，涡旋5 min，3500 r/min离心10 min，取上清液4.5 ml，40 ℃水浴吹干，加入100 μl甲醇-0.05 mol/ml盐酸（1：1，V：V）的混合液[4]，涡旋30 s，加入250 μl正己烷，涡旋2 min，3500 r/min离心5 min，弃去正己烷，取下层溶液进样。

　　1.3.2 加药血样 取浓度为2.5、5、10、25、50 μg/mL的CsA标准溶液各20 μl置10 ml均塞离心管中，分别加入人全血1 ml，配置成含CsA 50、100、200、500、1000 ng/ml血液样品，加入1 ml 0.1 mol/L的NaOH溶液，后处理方法同“1.3.1”项下空白血样 　　1.4 色谱条件的选择 色谱柱：DiamonsilTM C18（4.6×200 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（74：26）；流速：1 ml/min；柱温：70 ℃；检测波长：210 nm；进样量：20 μl 　　1.5 方法专属性 在上述色谱条件下，分别取CsA标准液，空白血样，加药血样进行HPLC测定，考察其色谱图 　　1.6 标准曲线的制备 取血药浓度为50、100、200、500、1000 ng/ml加药样品进行HPLC测定，以药物浓度C与样品峰（A）做线性回归，制备标准曲线 　　1.7 回收率 配制浓度分别为50、200、1000 ng/ml的加药血样，按照“1.3.1”项下的处理方法处理、测定，分别与同浓度的CsA标准溶液直接进样的峰面积做比较，计算提取回收率即绝对回收率。

配制浓度分别为50、200、1000 ng/ml的加药血样，按照“1.3.1”项下的处理方法处理、测定，按：“方法回收率=测得量/理论值×100%”计算方法回收率即相对回收率 　　1.8 精密度 浓度分别为50、200和1000 ng/ml的加药血样按照“1.3.1”项下的处理方法处理，测定，一日内重复操作5次，考察其日内精密度在随后的5 d内，重复操作5次，考察其日间精密度 　　2 结果 　　2.1 方法专属性 CsA色谱图考察结果如图1所示，可见CsA的保留时间为7.6 min左右，空白血样在此时间点无干扰，CsA与血液中的内源性物质分离良好 　　2.2 标准曲线及线性范围 结果如图2所示，所得标准曲线为：A=0.0983C-1.629，R2=0.9997 　　2.3 回收率 低、中、高浓度的加药血样的提取与方法回收率见表1低、中、高浓度的加药血样的日内与日间精密度见表2 　　3 讨论 　　个体化给药是临床用药的发展趋势，血药浓度监测是临床药学的重要任务，因此，建立高效准确，经济适用的CsA血药浓度监测方法意义重大HPLC法已普遍应用于CsA血药浓度的测量[5]，其优点是灵敏快速，缺点是样品处理繁琐复杂，对操作人员要求高。

另外，70 ℃高温使色谱柱使用寿命缩短[6]，经济成本增加，但相比免疫学方法，如单克隆、多克隆荧光偏振免疫法[7-8]，酶免疫增强法[9]，MAb亲和柱免疫测定法[10]等仍较经济适用本研究中，采用HPLC法测定环孢素A血药浓度，发现该方法快速灵敏准确，可用于环孢素A血药浓度的监测 　　参考文献 　　[1]尹玉琴，李莹，徐桂丽.骨髓移植受者环孢素A血药浓度监测结果分析[J].中国药房，2009，20（11）：833-836. 　　[2] Carbajal H，Soltero L，Rodriguez-Montalvo C，et al. Cyclosporine and low-dose ketoconazole in renal transplant recipients： a single-center experience[J].Transplantation， 2004，77（1）：1038-1040. 　　[3]陈锦珊，杜青云.全血中环孢素A药物浓度监测方法评价及临床意义[J].中国医院药学杂志，2004，24（8）：486-487. 　　[4]刘叶玲，成立军，傅孟莉.肾移植受者环孢素A血药浓度监测情况分析[J].泰山医学院学报，2005，26（4）：308-309. 　　[5]谢诚，钱美英，缪丽燕.环孢素A和他克莫司血药浓度监测的质控评价与分析[J].中国药房，2008，19（32）：2508-2510. 　　[6]陈强，刘林.环孢菌素A的临床应用进展[J].中国药学杂志，1995，30（11）：646-647. 　　[7]刘晓，张相林，张镭，等.单克隆荧光偏振免疫法、多克隆荧光偏振免疫法和高效液相色谱法分别测定环饱素A血药浓度结果的相关性探讨[J].中国药学杂志，2009，44（10）：790-793. 　　[8]胡疏，王钧，张红宇，等.单克隆抗体放免法监测环孢素A血药浓度在造血肝细胞移植中的临床价值[J].中国实验诊断学，2006，10（4）：376-378. 　　[9]黄成琼，马传学，朱清华.EM IT法和HPLC法监测环孢菌素A血药浓度比较研究[J].药学与临床研究，2009，17（2）：104-106. 　　[10] Li C，Lim S W， Sun B K， et al. Expression of apoptosis-related factors in chronic cyclosporine nephrotoxicity after cyclosporine withdrawal[J].Acta PharmacolSin，2004，25（1）：401-411. 　　（收稿日期：2013-02-28） （本文编辑：连胜利） 阅读相关文档:家庭访视对精神分裂症患者家属负性情绪及生活质量的影响 28例女性腋下副乳腺手术方式分析 血液病患者激素治疗后的血糖变化特点及意义 Suresight手持式自动验光仪在婴幼儿视力筛查中的应用分析 肿瘤患者医院感染的危险因素探讨 妊娠糖尿病孕妇血液指标及妊娠结局分析 胸腔镜下手术治疗自发性气胸46例体会 多层螺旋CT低剂量扫描技术在慢性阻塞性肺病诊断中的价值分析 冠心病合并心律失常123例临床观察及疗效分析 手法复位结合心理疏导治疗良性阵发性位置性眩晕58例分析 220例老年肺结核临床分析 胃食管反流病与睡眠质量的相关性研究 异位妊娠351例临床分析 剖宫产再孕的妇女孕期最新最全【学术论文】【总结报告】 【演讲致辞】【领导讲话】 【心得体会】 【党建材料】 【常用范文】【分析报告】 【应用文档】 免费阅读下载 *本文收集于因特网，所有权为原作者所有。

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