临床血液学检验-1-7-造血检验基本方法2细胞化学染色检验课件

1、1,第一章 造血与血细胞检验 第七节 骨髓检查 二、细胞化学染色,2,普通染色,免疫细胞化学染色,细胞形态学检验技术,细胞化学染色,3,【细胞化学染色概述】 细胞化学染色的概念,4,细胞化学染色的临床应用 细胞化学染色的基本步骤,帮助识别细胞 了解细胞的生理状态及功能 辅助诊断及鉴别诊断血液系统疾病,取材：新鲜骨髓片或血片 制片 染色：固定、有色沉淀反应（显色）、复染 显微镜检查：观察染色是否成功，观察目标细胞的染色结果 填写报告单：定性（阳性/阴性）、半定量（阳性率/阳性积分/阳性程度） 登记及存档,5,6,7,复染的目的在于使各种细胞能显示出来以便于观察。选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显的对比度，即能使细胞结构显示又能清楚地看出细胞化学染色结果,8,（一）用于贫血的细胞化学染色（铁染色） 用于贫血的常规细胞化学染色 外周血网织红细胞计数（Ret/Retic/RC） 骨髓铁染色,9,【复习：外周血网织红细胞计数（Ret/Retic/RC）】 问题 在瑞氏染色下，能否较准确地区别成熟红细胞与未完全成熟的红细胞（网织红细胞） 网织红细胞计数有哪两种方法？在手工操作法中，我们染色及

2、观察的是哪种化学物质 网织红细胞计数的参考值是多少？有什么临床意义,手工活体染色法和仪器法,RNA,0.51.5,反映骨髓中红系的造血情况，用于贫血的诊断、鉴别诊断及疗效观察,不能，未完全成熟的红细胞在瑞氏染色下表现为嗜多色红细胞,10,【骨髓铁染色】 染色原理及方法,贮存铁 铁蛋白 含铁血黄素,11,标本片,12,正常血细胞的染色结果 细胞外铁：位于骨髓小粒内或巨噬细胞胞质内（即幼红细胞外） 细胞内铁：位于幼红细胞胞质内的铁 铁粒幼红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。计数100个中幼红和晚幼红细胞中铁粒幼红细胞的百分比即为细胞内铁阳性率 铁粒红细胞：胞质中出现蓝色铁颗粒的红细胞 环形铁粒幼红细胞：幼红细胞胞质中蓝色颗粒6颗以上，围绕核周1/2以上者,病理情况,13,14,细胞外铁（）,细胞外铁（）,细胞外铁（）,细胞外铁（）,细胞外铁（）,细胞外铁（）,细胞外铁（）,15,铁粒幼细胞,铁粒幼细胞,幼红细胞,环形铁粒幼细胞、铁粒红细胞,16,参考值 骨髓细胞外铁：（+）（+），约2/3人为（+），1/3人为（+） 骨髓细胞内铁：铁粒幼红细胞的阳性率为19%44%，以I型为主，少数为

3、II型,17,临床应用：用于贫血的诊断及鉴别诊断,18,隐性缺铁 缺铁性贫血早期,缺铁 缺铁性贫血,铁转运或利用异常 继发性贫血,铁负荷 铁粒幼细胞贫血 巨幼细胞贫血 再障 MDS 红白血病,图 贫血时铁染色常见的四种情形,19,20,（二）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP染色） 染色原理及方法：Kaplow偶氮偶联法,成熟中性粒细胞胞质中,21,标本片,22,正常血细胞的染色结果 阳性反应呈棕黑色颗粒，定位于成熟中性粒细胞胞质内。其他细胞呈阴性 油镜下计数100个成熟中性粒细胞，记录其阳性程度（）、（）、（2）、（3）、（4），分别记为0、1、2、3、4分。计算阳性细胞总数为阳性率，阳性细胞的分数总和为阳性积分,23,24,25,参考值：阳性率40，阳性积分14113。各实验室之间可有较大差异，应建立各实验室的参考值 临床应用 NAP染色主要用于骨髓增生性肿瘤（MPN）的诊断与鉴别诊断。NAP是怀疑骨髓增生性肿瘤时应作的常规细胞化学染色 慢粒NAP显著减低，甚至为0，其他MPN为正常或增高 慢粒NAP显著减低，甚至为0，类白NAP显著增高 鉴别其他疾病,26,图 NAP染色（慢粒血片

4、）,27,图 NAP染色（类白血片）,28,（三）急性白血病形态学分型的细胞化学染色 急性白血病细胞分型的常规细胞化学染色 过氧化物酶（POX）染色/苏丹黑B（SBB）染色 特异性酯酶（NAS-DCE）染色 非特异性酯酶（-NAE/ -NBE/ NAS-DAE / ANAE等）染色 过碘酸-雪夫（PAS）染色 酸性磷酸酶（ACP）染色,29,问题 在各系各阶段血细胞中，最难鉴别的细胞是什么细胞 正常和一般疾病病人的骨髓片中可以看到原始细胞吗 在什么情况下，骨髓片中能看见大量的原始细胞 如何鉴别原粒、原淋及原单？,原始细胞,原粒细胞2，原红1，其他原始细胞罕见,急性白血病 骨髓中原始细胞20,MDS（RAEB） 骨髓中原始细胞520,细胞化学染色 （一组）,30,过氧化物酶（POX）染色 （1）染色方法及原理 复方联苯胺法 二氨基联苯胺法 四甲基联苯胺法 改良Pereira法（碘化钾法）,31,过氧化氢,四甲基联苯胺,图 POX染色原理（四甲基联苯胺法）,试剂,试剂,32,（2）正常血细胞的染色反应 染色成功的标志：成熟中性粒细胞为阳性反应 各系细胞染色反应 粒系：除早期原粒外，其余为阳

5、性 单核系：除早期原单外，其余为弱阳性 淋巴系：阴性 浆细胞系、红系、巨核系：均呈阴性,33,34,35,36,【苏丹黑B染色（SBB染色）】 （1）染色方法及原理 （2）正常血细胞的染色反应 （3）临床应用 同POX染色。POX更特异，SBB更敏感,37,特异性酯酶染色（氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色，CE染色） （1）原理及方法,图 氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色法原理,38,（2）正常血细胞的染色反应 染色成功的标志：成熟中性粒细胞为阳性反应 各系细胞的染色反应 粒系：早期原粒为阴性，其余为阳性 单核系：阴性 淋巴系：阴性 浆细胞系、红系 、巨核系：均为阴性,39,40,非特异性酯酶染色 （1）染色方法及原理：需同时进行NaF抑制试验,最特异,41,（2）各系血细胞的染色反应 粒系：多为阴性，少数可呈阳性，阳性反应不能被NaF抑制（ -NBE染色特异性较高，粒系为阴性 ） 单核系：早期原单为阴性，其余为阳性，阳性反应可被NaF抑制 淋巴系：多为阴性，少数可呈弱阳性，阳性反应不能被NaF抑制 其他细胞,42,43,44,【酯酶双染色】 染色原理及方法：在同一张涂片上进行特异性酯酶染色和非特

6、异酯酶染色 CE染色与-NAE染色 CE染色与-NBE染色 各系血细胞的染色反应 临床应用：对AML-M4的诊断具有意义,45,过碘酸-雪夫反应（PAS染色，又称糖原染色） （1）染色方法及原理 细胞内含有乙二醇基的糖类在过碘酸氧化作用下产生双醛基，后者与雪夫（Schiff）染料作用，使无色品红变为紫红色物质沉积，定位于含有多糖成分的部位,46,（2）正常血细胞的染色反应 染色成功的标志：成熟中性粒细胞为阳性反应 各系血细胞的染色反应 粒系：早期原粒阴性，其余为阳性，呈弥散状阳性 单核系：早期原单阴性，其余为阳性，呈细颗粒状阳性 淋巴系：多数为阴性，少数为阳性，呈粗颗粒状阳性或块状阳性 红系：阴性 巨核系：阳性 其他细胞,47,48,酸性磷酸酶（ACP）染色 （1）染色方法及原理，同时做抗酒石酸酸性磷酸酶染色 正常血细胞的染色结果：粒系、单核系、淋巴系、浆细胞系、巨核系、红系等均呈阳性，抗酒石酸酸性磷酸酶染色均呈阴性 临床应用：主要用于毛细胞白血病（HCL）的诊断及鉴别诊断，毛细胞为阳性或强阳性，不被酒石酸抑制,49,本组细胞化学染色的临床应用 鉴别原粒、原单及原淋细胞 鉴别急性白血病

7、的类型 急性白血病分类 细胞化学染色鉴别急性白血病类型,示例,50,51,原淋,原粒,原粒+原单,原单,骨髓中白血病性原始细胞20%,早幼粒,52,细胞化学染色,53,【细胞化学染色鉴别急性白血病的类型】 POX染色：最重要、首选的常规细胞化学染色，是鉴别急性淋巴细胞白血病和急粒髓细胞白血病的重要指标 原始细胞阳性率3%为AML的M1M5 原始细胞阳性率3%为ALL等 CE染色：能较特异地识别粒系细胞，用于辅助鉴别急性白血病的类型（M1、M2、M3、M4） 非特异性酯酶染色及NaF抑制试验：能较特异地识别单核系细胞，用于辅助鉴别急性白血病的类型（M4、M5） PAS染色：可以鉴别淋巴细胞与粒、单核细胞，用于辅助鉴别急性白血病的细胞类型。本法还用于鉴别幼红细胞增生的性质,54,55,原始细胞：原淋,56,原始细胞：原单+原粒,57,作业 鉴别铁染色结果的相关概念 贮存铁 铁蛋白 含铁血黄素 细胞外铁 细胞内铁 铁粒幼细胞 环形铁粒幼细胞 铁粒红细胞,58,作业 骨髓铁染色的参考值？贫血时铁染色常见以下四种结果，分别说明机体内铁处于哪种状态 外铁减少，内铁正常 外铁减少或消失，内铁减少 外铁增高，内铁减少 外铁增高，内铁增高,59,作业 POX染色、CE染色、非特异性酯酶染色及NaF抑制试验、PAS染色这四种染色，粒系、单核系、淋巴系各阶段细胞的结果是怎样的？以列表的方式说明,60,复习 怎样用POX染色、CE染色、非特异性酯酶染色及NaF抑制试验、PAS染色这四种染色，来进行急性白血病的形态学分型？,

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