细胞化学染色 (2)
73页1、第三章 血细胞化学染色,第一节 概述 以细胞形态学为基础,根据化学反应的原理,应用涂片染色的方法,对血细胞内的各种化学成分及其变化作定性、定位、半定量的分析。,一、研究对象 外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中的 化学物质: 酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等,二、基本步骤 固定 保持细胞结构和化学成分 显示 被染的化学物质最终形成稳定的 有色沉淀 复染 显示各种细胞,其颜色与有色沉 淀的颜色有明显的对比度,三、临床应用,1.鉴别各类血细胞 2.辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断 3.观察疾病疗效和判断预后,第二节 常用细胞化学染色方法,过氧化物酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 -醋酸萘酚酯酶染色 铁染色,一、过氧化物酶染色 (peroxidase,POX),髓过氧化物酶( marrow peroxidase,MPO ) 血细胞主要的POX,是人类中性粒细胞含量最多的蛋白质,主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒的过氧化物。,POX,新生态氧 O,过氧化氢 (基质中),二氨基联苯胺 (无色),粒、单核 细胞胞浆,【原理】,棕黄色沉淀 (浆内酶部位),【结果判断】 阴性 无颗粒
2、弱阳性 颗粒小,分布稀疏 阳性 颗粒稍粗,分布较密集 强阳性 颗粒粗大,密布于整个胞浆,【正常血细胞染色反应】 1.粒细胞系统 POX主要存在于粒系细胞中。 分化差的原粒细胞阴性; 分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各 阶段均呈阳性,阳性反应程度随细胞的成 熟逐渐增强。,2.单核细胞系统 阴性或弱阳性 3.淋巴细胞系统 红细胞系统 巨核细胞系统 阴性 浆细胞 组织细胞,【临床意义】,临床上是辅助判断急性白血病首选的、最重要的细胞化学染色 急性髓细胞白血病 急性淋巴细胞白血病,鉴别,1. 急性髓细胞白血病 (1)急性粒细胞白血病 阳性反应:M3M2bM2aM1 (分化差的原粒细胞呈阴性反应) (2)急性单核细胞白血病 弱阳性反应 (分化差的原单核细胞呈阴性反应),2. 急性淋巴细胞白血病 阴性反应 或阳性率 3%(残留的原粒细胞),二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色,(neutrophilic alkaline,phosphatase,NAP),磷酸萘酚钠 (基质中),中性粒细胞胞浆中NAP,磷酸钠,-萘酚,重氮盐 (坚牢蓝盐RR),紫黑色偶氮染料 (胞浆中),水解,【原理】Kaplow偶氮偶联
3、法,【结果判断】 胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+),【正常血细胞染色反应】,1. 中性成熟粒细胞(杆状和分叶)阳性反应 其他细胞呈阴性反应,2.NAP积分值 油镜下计数100个成熟中性粒细胞(杆状和分叶),分别记录其分级情况:,(-) 0分 (+) 1分 (+) 2分 (+) 3分 (+) 4分 阳性率 全部阳性反应细胞之和 积分值 各种阳性程度细胞的分值之和,3.参考值 积分值 4080分 阳性率 10%40% ( 各实验室参考值不同),【临床意义】 病理性变化: (1)细菌性感染与病毒性感染 (尤其是化脓性感染) 明显增加 无明显变化,(2)类白血病反应与慢性粒细胞白血病 明显增加 明显下降且常为零分, 缓解时又上升到正常,(3)再生障碍性贫血 增加 阵发性睡眠性血红蛋白尿 下降,三、过碘酸-雪夫反应 ( 糖原染色 ) (periodic acid-Schiff reaction,PAS),双醛基,过碘酸,雪夫试剂中 的无色品红,紫红色化合物 (附于含多糖类 的胞浆内),乙二醇基 (多糖类物质含有),氧化,【原理】,【结果判断】,阳性 胞浆内出现红色阳性物, 呈弥漫均匀红色、颗粒状或
4、小块状。 阴性 胞浆内无色,核淡绿。 用阳性率报告结果,并说明阳性物的形态。,【正常血细胞染色反应】,1.粒细胞系统 分化差的原粒细胞为阴性; 分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞 各阶段均呈阳性反 应,阳性程度随细 胞的成熟逐渐增强。 阳性物呈细颗粒、 均匀红色。,2.红细胞系统 阴性 3.单核细胞系统 细颗粒状,有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。,4.淋巴细胞系统 大多数淋巴细胞呈阴性; 少于20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性。 5.巨核细胞系统 呈颗粒状或块状阳性(含血小板)。,【临床意义】,1.红细胞疾病:恶性疾病呈阳性,良性疾病,呈阴性。 红血病或红白血病 幼红细胞阳性 巨幼细胞性贫血 幼红细胞阴性 骨髓增生异常综合征 幼红细胞阳性 再生障碍性贫血 幼红细胞阴性,2.鉴别急性白血病类型,(1)急性淋巴细胞白血病 阳性率20%80%,呈红色粗颗粒状或块状。,(2)急性粒细胞白血病 少数阳性,呈细颗粒状或均匀红色。 (3)急性单核细胞白血病 可阳性,呈细颗粒状、弥散分布,有时 胞质边缘处颗粒较粗大。,(4)巨核细胞白血病 阳性或强阳性反应,表现为红色颗粒或块状。,3.其他细胞 戈
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