XXX生物科技有限公司微生物检验操作的规程

1、*生物科技有限公司生物科技有限公司 编制：编制：日期：日期： 审核：审核：日期：日期： 批准：批准：日期：日期： 20201 16 6-0-04 4- -0101 发布发布20201 16 6-0-04 4-0-01 1 实施实施 微生物检验操作规程微生物检验操作规程 文件编号：文件编号：*-QC-006*-QC-006 文件更改记录文件更改记录 更改单号更改页码更改内容修订版本状态更改人审核人批准人 *生物科技有限公司 编编号号*-QC-006*-QC-006 微生物检验操作规程微生物检验操作规程 版版次次A A0 0 页页码码共共 1717 页页第第 1 1 页页 10 目的：建立微生物操作规范化，保持检验员在操作过程中具有一致性，也使检验系统 处于良好的控制之下，以便支持质量管理体系的运作。 20 适用范围：原料、半成品及成品微生物检测，以及车间空气及物体表面微生物控制 检测的通用文件。 30 权责： 3.1 品管部负责此规程的制定及有效的执行。 3.2 品管部主管规划本规程总体架构，并监督其执行情况。 40 作业流程图： 无 50 作业程序： 5.1 无菌检查标准操作规程 5.

2、1.1 玻璃器皿 试管、三角瓶、刻度吸管(1、2、5、10ml)、平皿、玻璃针筒等，用玻璃洗涤剂或清 洁液浸泡，水洗 3 次。使用过后如与细菌接触，应先灭菌倒出内容物后再清洗，晾 干。凡无菌操作过程中所用的器皿，都应用牛皮纸包扎严密，121灭菌 20 分钟， 或 180干热灭菌 2 小时。移液管、刻度吸管在管口上端内，松松地塞少许棉花，然 后放于吸管筒内或牛皮纸袋内，盖严，灭菌备用。 5.1.2 用具 *生物科技有限公司 编编号号*-QC-006*-QC-006 微生物检验操作规程微生物检验操作规程 版版次次A A0 0 页页码码共共 1818 页页第第 2 2 页页 无菌衣、裤、帽等洗净晾干，用牛皮纸包严，灭菌备用或用一次性的无菌物品代替。长柄 取样匙，放于长的玻璃筒内(或不锈钢长筒内)，盖严，干热灭菌备用。手术镊、手术剪洗净、 擦干。用双层纱布将 1 把剪刀与 1 个镊子间隔包扎在一起，放于带盖的容器(瓷盒或铝制饭盒) 内，盖严，用牛皮纸包扎，湿热灭菌备用。 5.2 无菌室的管理 5.2.1 无菌室的清洁 5.2.1.1 无菌室的缓冲间内应有衣架挂钩、口罩、消毒鞋和无菌工作服，无菌

3、室 及缓冲间均应设有紫外灯和日光灯或空气净化装置。 5.2.1.2 无菌室内应准备好消毒用 75%酒精棉球、试剂瓶、酒精灯、镊子、打火机。 5.2.2 无菌室的无菌程度要求 无菌室在消毒处理完毕后，应检查空气中的菌落数。用内径 90mm 的平皿， 无菌操作注入溶解的并冷至约 45的卵磷脂土温 80 琼脂培养基，在 371 培养 48 小时，对操作过程进行无菌验证。同时取无菌平皿 3 只，在无菌室以 平均位置放置，打开平皿盖，在空气中暴露 5 分钟，盖好，置 371培养 48 小时，取出检查，3 只平皿生长的菌落数平均不得超过 3 个，单只平皿内 不得超过 4 个。无菌室内空气中菌落数的测定每周进行一次。 5.2.3 进入无菌室的操作要点 5.2.3.1 关闭紫外灯，根据试验程序，将消毒过的用具物品搬入无菌室，将超净 工作台通风机打开，超净工作台紫外灯同时打开 3045 分钟，在缓冲区准备好 工作服、帽、鞋，再将无菌室紫外灯打开 3045 分钟后关闭，再通风 15 分钟。 5.2.3.2 操作人员用肥皂洗净双手，进入无菌室缓冲间，随手关门，换上无菌的 工作衣帽、鞋，并戴好口罩，用 75%

4、酒精棉球擦洗双手，进入无菌操作间。 5.2.3.3 无菌室温度宜控制在 1828，湿度在 45%65%（温湿度计应该用无水 *生物科技有限公司 编编号号*-QC-006*-QC-006 微生物检验操作规程微生物检验操作规程 版版次次A A0 0 页页码码共共 1818 页页第第 3 3 页页 的）。 5.2.3.4 严格执行超净工作台使用操作规程，使用过程中如发现意外立即切断电 源，报修理人员修理，工作完毕后关闭风机，切断电源。 5.2.3.5 无菌室应每周和每次操作前用 0.25%新洁尔灭或其它适宜消毒液擦拭操 作台及可能污染的死角。每次操作完毕后，同样用上述消毒液擦拭工作台面，切 断电源，按规定清洗所有用具、器皿。 5.2.3.6 为防止污染， 进入无菌室的人员不得化妆和佩戴饰物， 且非当班检验人员 不得进入无菌室。 5.2.3.7 规定紫外灯最大使用时限为 1000 小时，为使无菌室紫外灯在使用期限内 使用，每次使用无菌室内的紫外灯需填写紫外灯使用时数及更换管制 表，每次更换紫外灯时需在记录表内注明更换日期。 5.3 空气沉降菌的测定 5.3.1 检测条件：被检测的区域已经过消毒

5、，在动态下进行。 5.3.2 检测原则：检测用的培养皿必须进行无菌验证，通常采用倒入营养琼脂的平 皿 371培养 23 天后证明无菌污染。准备与操作过程应采取一切措施防 止人为因素对样本的污染。 5.3.3 采样前准备：测试人员必须穿戴好符合不同洁净级别的工作服、帽、鞋，整 个操作过程要求戴严口罩，双手必须用 84 消毒液浸泡消毒或 75%酒精消毒。 5.3.4 检测方法：在各关键空气质量控制点与气流扰动极小的地点采用皿盖斜扣的 方式，使培养基表面暴露规定时间后再将皿盖盖上后倒置，封盖时要求将皿 盖从斜扣方向推合上， 不宜双手或袖口经过培养基上方。 所有采样点应远离回风口， 采样点的位置离地 0.81.5m 左右（略高于工作面）。采样的同时应记录房间的温 度和相对湿度。 *生物科技有限公司 编编号号*-QC-006*-QC-006 微生物检验操作规程微生物检验操作规程 版版次次A A0 0 页页码码共共 1818 页页第第 4 4 页页 5.3.5 采样点数目 5.3.5.1 一般生产区和洁净级别10000 级的厂房,室内面积100m的房间， 在房 间对角线选取 2 个采样点。室内面积

6、 100200m房间，应选取 4 个采样点。 5.3.5.2 洁净级别为 10000 级的厂房：室内面积100m的房间，在房间对角线选 取 3 个采样点，室内面积 100200 m房间，应选取 5 个采样点。 5.3.6 重点车间采样点布置： 5.3.6.1 更衣室：对角线布置，至少选取 2 个采样点，避免在推拉门的出口放置。 5.3.6.2 配料间：对角线布置，选择电子秤的台面、置物架、料抽 存放点、配料 缓冲区的台面。 5.3.6.3 乳化间：操作台面上下对角线布置，选择纯水系统的台面、出料附近的 台面、水相锅或油相锅的台面。 5.3.6.4 消毒间：对角线布置，选择远离推拉门的区域，选择适宜高度的台面上采 样。 5.3.6.5 洁净容器存放间：对角线布置，选择远离推拉门的区域。 5.3.6.6 储料间：对角线或 Z 字形布置，选择不同区域之间的过道进行。 5.3.6.7 灌装间：对角线或 Z 字形布置，选择输送带台面、灌装机台面，输送带之 间。 5.3.6.8 包装间：Z 字形或 V 字形布置，选择远离装箱工序的输送带台面、靠近灌 装间的输送带之间，不宜在包装箱上或成品货物出口处

7、采样。 5.3.7 采样方法（沉降法）：菌落总数将营养琼脂平皿（直径为 90mm）置于采样点， 暴露 5 分钟（洁净厂房可延长时间），然后 6 小时内送实验室，置于 371恒温 培养箱中培养 48 小时，霉菌和酵母菌总数是将虎红琼脂平皿（直径为 90mm）置于 采样点，暴露 5 分钟（洁净厂房可延长时间），然后 6 小时内送实验室，置于 27 *生物科技有限公司 编编号号*-QC-006*-QC-006 微生物检验操作规程微生物检验操作规程 版版次次A A0 0 页页码码共共 1818 页页第第 5 5 页页 1恒温培养箱中培养 72 小时， 记录每个平皿的菌落个数， 并求出全部采样点的平 均落菌个数，按下面公式计算 1m空气中的菌落总数： 菌落总数（CFU/ m）=50000N/AT 其中：N：平皿计数的平均菌落个数 A：平皿面积, cm 2 T：平皿暴露时间,min 注：若暴露时间为 5 分钟，所用平皿直径为 90 mm，则上式可简化为：菌落总数/ m=157N； 霉菌和酵母菌总数的算法同菌落总数的算法。 5.4 压缩空气检测 5.4.1 操作方法 菌落总数测定是将准备好经过无菌验

8、证的营养琼脂平皿带入灌装间后， 打开平皿上盖， 在 各个压缩空气的用气口打开压缩空气， 对着压缩空气吹平皿表面 3 分钟， 盖上培养皿上 盖后，将平皿放置于 371培养箱中培养 48 小时；霉菌和酵母菌总数的测定方法同 菌落总数的测定方法。 5.4.2 采样数目 每个用气口需采样三次。 5.5 物体表面微生物检测 5.5.1 物体表面的采样 在被检物体表面对角线设两点，各 25cm 2面积，用灭菌生理盐水的棉拭子，来回 均匀涂抹，并转动拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子放入 10mL 灭菌生理盐水 试管内振打 80 次，根据细菌的污染程度，可作适当稀释，取 2mL 分别注入两块 灭菌平皿内， 每皿 1mL， 倾注营养琼脂培养基， 混匀， 凝固后于 371培养 48h， 计数平板上细菌菌落数。 *生物科技有限公司 编编号号*-QC-006*-QC-006 微生物检验操作规程微生物检验操作规程 版版次次A A0 0 页页码码共共 1818 页页第第 6 6 页页 物体表面污染细菌菌落总数（CFU/ cm 2）=（N稀释度10）/A 其中：N：平皿计数的平均菌落数 A：取样面积, cm 2 对

9、员工工作服表面需做霉菌和酵母菌总数及致病菌 （粪大肠菌群、 铜绿假单胞菌 和金黄色葡萄球菌）的检测，致病菌检测方法同以下的检测步骤。 5.5.2 手部菌检的采样 被检人员五指并拢，用一浸湿生理盐水的棉拭子在右手指曲面，从指尖到指 端来回涂 2 次，转动拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子放入 10mL 灭菌生理 盐水试管内振打 80 次，根据细菌的污染程度，可作适当稀释，取 2ml 分别注 入两块灭菌平皿内，每皿 1mL，倾注营养琼脂培养基，混匀，凝固后于 371 培养 48h，计数平板上细菌菌落总数。 菌落总数（CFU/只手）=N稀释级度10 其中：N：平皿菌落数的平均数 对员工手部需做霉菌和酵母菌总数及致病菌（粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和 金黄色葡萄球菌）的检测，致病菌检测方法同以下的检测步骤。 5.5.3 包装容器微生物的检测 被采容器表面积小于 100cm 2取全部内面积，加适量无菌生理盐水到容器内， 盖紧盖子充分振摇，使容器内面积全部与灭菌生理盐水接触；被采容器表面 积大于 100cm 2，用无菌棉拭子均匀涂抹 100cm2面积范围，并转动拭子，剪 去手接触部位后，将棉拭子放入 10mL 灭菌生理盐水试管中，然后对采集的样 品振打 80 次，根据细菌的污染程度，可作适当稀释，取 2ml 分别注入两块灭 菌平皿内，每皿 1mL，倾注卵磷脂吐温 80 琼脂培养基，混匀，凝固后于 37 1培养 48h，计数平板上细菌菌落总数。 *生物科技有限公司 编编号号*-QC-006*-QC-006 微生物检验操作规程微生物检验操作规程 版版次次A A0 0 页页码码共共 1818 页页第第 7 7 页页 容器污染菌数（CFU/个）=平皿菌落数稀释级所加生理盐水量（mL） 5.6 采样 5.6.1 原料采样：小包装原料，随机抽取原小包装送至无菌室进行检样；大包装原 料，须用无菌容器采样，采样量一般 200 ml 或 g，送至无菌室进行检样。 5.6.2 半成品采样： 准备预先消毒过的器具， 在储料间

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