输血科作业指导书
34页1、人民医院输血科工作制度文件编号页 号第1页 共1页版本/修改次数第3版 第0次修改输血科作业指导书目录审 核 人批 准 人发布日期目 录文件编码 文件名 页码SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-001 目录 1SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-002 ABO血型鉴定 2SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-003 RH血型鉴定 12SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-004 凝聚胺(polybrene)试验 18SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-005 交叉配血试验 21SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-006 不规则抗体筛检和鉴定试验 27人民医院输血科工作制度文件编号页 号第2页 共10页版本/修改次数第3版 第0次修改 ABO血型鉴定审 核 人批 准 人发布日期ABO血型鉴定一、AOB血型鉴定【原理】 根据红细胞膜表面有无A抗原和(或)B抗原,将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验,通过正反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型,是指用标准抗A抗原或(和)B抗原;所谓反定型,是指用标准A细胞和B型细胞来测定血清中有无相应的抗A和(或)
2、抗B。【试剂】1、抗A(B型血)、抗B(A型血)及抗A+B(0型血)分型血清,可购自有合格证的商品。2、5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液,制备方法见附件。3、受检者血清。4、受检故里5%红细胞盐水悬液。【操作】1、试管法(1)取洁净小试管(10mm60mm)3支,分别标明抗A、抗B和抗A+B,分别滴加抗A、抗B和抗A+B分型血清各1滴于试管底部人民医院输血科工作制度文件编号页 号第3页 共10页版本/修改次数第3版 第0次修改 ABO血型鉴定审 核 人批 准 人发布日期再用滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴,混匀。(2)另取洁净小试管(10mm60mm)3支,分别标明A、B和O分别滴加A、B和O细胞,用滴管分别辊入受检者血清1滴于试管底部,再分别以滴管加入A、B和O型5%试剂红细胞悬液1滴,混匀。(3)立即以1000r/min离心1 min。(4)将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集或溶血现象,如肉眼未见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜观察。(5)观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度,此有且于A、B亚型、类B或cisAB的发现。(6)凝集强度
3、判断标准4+:红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。3+:细胞凝集成数小块,血清尚清晰。2+:红细胞凝块分散成许多小块,周围可见到游离红细胞。1+:肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。:镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞。MF:即混合凝集外观(mixed field),是指镜下可见少数红细胞凝集,而绝大多灵敏红细胞仍呈分散分布。-:阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。人民医院输血科工作制度文件编号页 号第4页 共10页版本/修改次数第3版 第0次修改 ABO血型鉴定审 核 人批 准 人发布日期2、玻片法(1)取清洁玻片1张(或白瓷板1块),用蜡笔划成方格,标明抗A、抗B和抗A+B,分别用滴管滴加抗A、抗B和抗A+B分型血清1滴相应的方格内,再各加受检者2%红细胞悬液1滴,混匀。(2)另取洁净玻片1张(或瓷板1块),用蜡笔划成方格,标明A细胞、B细胞和O细胞,用滴管各加受检者血清1滴,再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。(3)将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动,使血清与细胞充分混匀,连续约15min,肉眼观察有无凝集(或溶血)反应。如用玻片做试验时,也可用低倍镜观察
4、结果。3、微柱凝胶血型卡法。【附注】1、分散血清质量性能应符合商品合格试剂的要求,试验结束后应放置冰箱保存,以免细菌污染。2、试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混合,用生理盐水洗涤3次,以除去存在于血清中的抗体及可溶性抗原。3、试管、滴管和玻片必须清洁干燥,防止溶血。4、操作方法应按规定,一般应先加血清,然后再加红细胞悬液,人民医院输血科工作制度文件编号页 号第5页 共10页版本/修改次数第3版 第0次修改 ABO血型鉴定审 核 人批 准 人发布日期以便容易核实是否漏加血清。5、IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4为最强,但为了防止冷凝集的干扰,一般仍在室温(2024)下进行试验,37可使反应减弱。6、离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防止出现假阳性或假阴性。7、观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱排列的区别。8、判断结果后应仔细核对、记录,避免笔误。表1 ABO血型正反定型结果标准血清+受检者红细胞受检者血型受检者血清+试验红细胞抗A抗B抗A+BA细胞B细胞O细胞+-+A-+-+B+-O+-+AB-注:+:凝集或溶血;-:不凝集。【正反定型结果不致的
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