输血科作业指导书

人民医院输血科工作制度文件编号页 号第1页 共1页版本/修改次数第3版 第0次修改输血科作业指导书目录审 核 人批 准 人发布日期目 录文件编码 文件名 页码SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-001 目录 1SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-002 ABO血型鉴定 2SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-003 RH血型鉴定 12SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-004 凝聚胺（polybrene）试验 18SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-005 交叉配血试验 21SXK-WHCDQRMYY-SOP-1-006 不规则抗体筛检和鉴定试验 27人民医院输血科工作制度文件编号页 号第2页 共10页版本/修改次数第3版 第0次修改 ABO血型鉴定审 核 人批 准 人发布日期ABO血型鉴定一、AOB血型鉴定【原理】 根据红细胞膜表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是指用标准抗A抗原或（和）B抗原；所谓反定型，是指用标准A细胞和B型细胞来测定血清中有无相应的抗A和（或）抗B。【试剂】1、抗A（B型血）、抗B（A型血）及抗A+B（0型血）分型血清，可购自有合格证的商品。2、5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见附件。3、受检者血清。4、受检故里5%红细胞盐水悬液。【操作】1、试管法（1）取洁净小试管（10mm×60mm）3支，分别标明抗A、抗B和抗A+B，分别滴加抗A、抗B和抗A+B分型血清各1滴于试管底部人民医院输血科工作制度文件编号页 号第3页 共10页版本/修改次数第3版 第0次修改 ABO血型鉴定审 核 人批 准 人发布日期再用滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。（2）另取洁净小试管（10mm×60mm）3支，分别标明A、B和O分别滴加A、B和O细胞，用滴管分别辊入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。（3）立即以1000r/min离心1 min。（4）将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集或溶血现象，如肉眼未见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜观察。（5）观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有且于A、B亚型、类B或cisAB的发现。（6）凝集强度判断标准4+：红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+：细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2+：红细胞凝块分散成许多小块，周围可见到游离红细胞。1+：肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。±：镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF：即混合凝集外观（mixed field），是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多灵敏红细胞仍呈分散分布。-：阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。人民医院输血科工作制度文件编号页 号第4页 共10页版本/修改次数第3版 第0次修改 ABO血型鉴定审 核 人批 准 人发布日期2、玻片法（1）取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明抗A、抗B和抗A+B，分别用滴管滴加抗A、抗B和抗A+B分型血清1滴相应的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混匀。（2）另取洁净玻片1张（或瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。（3）将玻片（或白瓷板）不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，肉眼观察有无凝集（或溶血）反应。如用玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。3、微柱凝胶血型卡法。【附注】1、分散血清质量性能应符合商品合格试剂的要求，试验结束后应放置冰箱保存，以免细菌污染。2、试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤3次，以除去存在于血清中的抗体及可溶性抗原。3、试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。4、操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，人民医院输血科工作制度文件编号页 号第5页 共10页版本/修改次数第3版 第0次修改 ABO血型鉴定审 核 人批 准 人发布日期以便容易核实是否漏加血清。5、IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4为最强，但为了防止冷凝集的干扰，一般仍在室温（2024）下进行试验，37可使反应减弱。6、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防止出现假阳性或假阴性。7、观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱排列的区别。8、判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。表1 ABO血型正反定型结果标准血清+受检者红细胞受检者血型受检者血清+试验红细胞抗A抗B抗A+BA细胞B细胞O细胞+-+A-+-+B+-O+-+AB-注：+：凝集或溶血；-：不凝集。【正反定型结果不致的原因】有技术性问题或红细胞和血清本身的问题，常见者有以下几种。1、标准血清效价太低、亲和和不强。如抗A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。人民医院输血科工作制度 ABO血型鉴定2、红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。3、受检者红细胞上抗原点过少，如亚型；或抗原性减弱，见于白血病或恶性肿瘤；以及类B呈cisAB等。4、受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。5、受检者血清中缺乏应有的抗A（或）抗B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。6、各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。7、由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集，往往是正反定型不符的原因。8、血清中有ABO血型以外的抗体，如自身抗I，常引起干扰。【正反定型结果不一致的解决办法】如发现ABO正反定型结果不一致，首先要重复做试验1次，严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察结果，可解决明显的问题，对一些疑难问题必须及时请示上级主管，并进一步检查。初步的检查步骤如下：1、 另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错标本造成的不符合。人民医院输血科工作制度 ABO血型鉴定2、将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗A、抗B、抗A+B及抗H做试验，可以得到其他有用的信息。3、对受检红细胞作直接抗人球蛋白试验，如结果是阳性，表示红细胞已被抗体致敏。4、用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗I，用O型（或ABO相合的）脐血红细胞检查。5、如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4放置30min，用显微镜检查核实。6、如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗A或抗B血清作吸收及放散试验，以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对80%HAB分泌型的人有用。7、如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水1滴混匀，往往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检者血清吕，再加试剂红细胞做试验，以免使血清中抗体被稀释。8、如受检者为A型血而疑为有类B抗原存在时，可用下列方法进行鉴别。（1）观察细胞与抗A及抗B的凝集强度，与抗A的反应要比与抗B的反应强。这种区别用玻片法做试验更为明显。（2）用受检者红细胞与自身血清做试验，血清中的抗B不凝集自人民医院输血科工作制度 ABO血型鉴定身红细胞上的类B抗原。（3）检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质或（和）B物质。（4）核对患者的诊断。类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。9、如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性、被酶激活的T或TK受体，或产生机制不太明了的Tn受体所引起。多凝集红细胞具有以下特点。（1）能被人和许多家兔的血清凝集。（2）能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。（3）不被脐带血清凝集。（4）通常不与自身的血清凝集。（5）如有条件可用外源凝集素加以鉴别。【附】A、B、O试验红细胞悬液的制备1、分别采取已知A、B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压紧红细胞配成不同浓度的红细胞悬液（表2）表2 红细胞悬液的配制人民医院输血科工作制度 ABO血型鉴定悬液浓度（%）压实红细胞（滴）盐水（滴）25102011112.0ml (40)0.8ml (16)0.4ml (8)0.2ml (4)2、为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。3、如条件许可，可分别制备A1、A2，及其他亚型的红细胞悬液，以供ABO亚型鉴定时参考。4、如欲将红细胞保存，应严格注意无菌技术采取血液，以ACD保存液按4：1抗凝，置4冰箱可保存3周，临用时取出一部分经盐水洗涤后配制成需的浓度。如以红细胞保存液保存，在4下可保存45周。红细胞保存液的配法：5.4%葡萄糖液640ml及109mmol/L枸橼酸钠264ml混合后，如新配的1%硫柳汞液1.8ml，经高压灭菌的（110，15min）溶液最后pH为7.4，使用时血液与保存液的容积比为61。二、A1和A2亚型鉴定【原理】根据ABO血型的血清学特点，A型和AB型可分为A1、A2、A1B、A2B亚型。抗-A（B型）血清中含有抗A和抗A1两种抗体；抗A可以凝集人民医院输血科工作制度 ABO血型鉴定所有A型和AB型红细胞，而抗A1只能与一部分A型和AB型红细胞反应。因此，凡与抗A1反应者被鉴定为A2或A1B型；不与抗A1反应而与抗A反应者被鉴定为A2或A2B型。【试剂】1、抗A1分型血清。2、受检者5%红细胞盐水悬液。3、已知A1和A2型5%红细胞盐水悬液。【操作】1、取洁净玻片两张，一张供测定受检者红细胞用，另一张供对照用，两者各标明A1和A2。2、将抗A1分型血清分别滴在受检者玻片上和对照的A1和A2部分各1滴。3、分别将受检者红细胞悬液以及对照用A1和A2红细胞悬液1滴滴在上述抗A1血清上，用玻棒将血清和红细胞悬液混匀。4、徐徐转动玻片，在室温下反应10min后观察结果。5、如A1对照红细胞凝集而A2对照红细胞不凝，则受检者红细胞凝集者为A1，不凝者为A2。【附注】1、A1与A2红细胞究竟为质的不同，还是量的不同，各有依据。因此，