质谱的几种工作模式：SIM-SRM-MRM

1、质谱都有几种工作模式：SIM,SRM,MRMSIM :单离子检测扫描(single ion monitoring)SRM :选择反应检测扫描(selective reaction monitoring)MRM :多反应检测扫描(multi reaction monitoring)质谱都有几种工作模式：1Full Scan:全扫描，指质谱采集时，扫描一段范围，选择这个工作模式后，你自 己来设定一个范围，比方：150500 amu。对于未知物，一定会做这种模式，因为只有Full Scan 了，才能知道这个化合物的分子 量。对于二级质谱MS/MS或多级质谱MSn时，要想获得所有的碎片离子，也得做全扫描。2SIM： Single Ion Monitor，指单离子监测，针对一级质谱而言，即只扫一个离子。对于已知的化合物，为了提高某个离子的灵敏度，并排除其它离子的干扰，就可以只 扫描一个离子。这时候，还可以调整一下分辨率来略微调节采样窗口的宽度。比方，要对 500 amu的离子做SIM，较高高分辨状态下，可以设定取样宽度为，这时质谱只扫500.5 amu。 还有些高分辨率的仪器，可以设定取样宽度更

2、小，比方0.2 amu，这时质谱只扫500.1 amu。 但对于较纯的、杂质干扰较少的体系，不妨设定较低的分辨率，比方取样宽度设为2 amu， 这时质谱扫描499501 amu，如果没有干扰的情况下，取样宽度宽一些，待测化合物的灵 敏度就高一些，因为噪音很低；但是有很强干扰情况下，设定较高分辨，反而提高灵敏度信 噪比，因为噪音降下去了。3SRM： Selective Reaction Monitor，指选择反应监测，针对二级质谱或多级质谱的某两级之间，即母离子选一个离子，碰撞后，从形成的子离子中也只选一个离子。因为两次 都只选单离子，所以噪音和干扰被排除得更多，灵敏度信噪比会更高，尤其对于复杂的、基 质背景高的样品。我们不妨把它看成二级质谱的SIM,上述关于SIM的特点也适用，即分辨率高些，抗 背景排干扰的能力就更强。4MRM： Multi Reaction Monitor，指多反应监测，其实就是多个化合物同时测定时， 多个SRM 一起做。那么特点就跟SRM是一样的。有的厂家并不区分SRM和MRM，因为只要一次实验 同是做几个SRM就是MRM方式了。定性，一定会用Full Scan，因

3、为想看到更多的离子。定量，倾向于用SIM或SRM/MRM，因为想提高已知信号的强度。背景基质越复杂， SRM/MRM就越好，尤其是分辨率设得高的SRM/MRM就越好。排模式TEMS全椭MSn （必SIMSRM/MRM高州描（翎 $ 5000）单鼬棉有无无荀且熟蝮高荀且熟蝮高无串联骊无荀高荀高无离子阱角且灵戏高有,高有有有有物OF无有有有Q-TOF角且灵戏高有,版鞍高无有一级质谱有的时候受仪器的分辨率影响，给出的质荷比不能准确定性，比方相同分子量的不 同分子，在仪器分辨率不够足够高的时候很难区分。串联质谱利用它们不同分子碎裂的碎片 不同来定性，并可以多级串联，直到你认为可以准确定性为止，当然也受一定条件影响。这 些你可以去参考一些专业的质谱书，上面都有讲解的。haotea430（站内联系 ta）受质谱的分辨率的影响，通俗的讲现在有些分辨率高的质谱分子量可以精确到小数点后面四 位，所以它对目标物质定性的准确性就高些了，二级质谱就是在一级的基础上将目标物质打 成碎片，以求进一步定性。nritw （站内联系ta）首先要清楚你说的准确的含义。如果你说的是准确测定分子量，那只能是一级质谱，也就是

4、测定准分子离子峰，准确性和分辨率有关，你会看到有高分辨质谱，比方飞行时间甚至盘旋 轨道等。如果你说准确测定结构，那只有质谱往往是不够的，还需要红外，紫外和核磁共振 信息。所谓二三级质谱就是把上一级质谱中某个离子单独挑出来，再打碎，看碎片情况，这 可以提供一定的结构信息。所以对于串联质谱，就需要一个质量分析器挑，后一个质量分析 器测碎片，这就是最常见的qqq。但是没听说串联很多个打到三级四级的，这个工作可以由 离子阱来做，你可以查查相关资料龙井不苦（站内联系TA）4 楼：Originally posted by nritw at 2011-09-24 1125:首先要清楚你说的准确的含义。如果你说的是准确测定分子量，那只能是一级质谱，也就是 测定准分子离子峰，准确性和分辨率有关，你会看到有高分辨质谱，比方飞行时间甚至盘旋 轨道等。如果你说准确测定结构，那只有质.你说的串联是不同的质谱，你说的QQQ 一般是三重四级杆质谱，质量分析器就是四级杆； 串联质谱还有Q-TOF，前面也是用四级杆选择离子，然后送入飞行时间质量分析器；离子阱 质谱是可以做多级串联的质谱，LTQ线性离子阱质谱理论可以无限

5、做多级串联质谱，一般认 为极限可以做到30级以上。当然FT-MS也可以进行离子选择，进行多级串联。一级质谱鉴定的方式主要指胎指纹图谱PMF），即利用质谱仪精确测量酶解片段的分子量 并搜库比较实现蛋白质的鉴定，二级质谱是在一级质谱的基础上再选择部分肽段做进一步的 破碎并对碎片进行深入分析和比较，鉴定出该肽段的序列并结合PMF的结果从而实现蛋白 质的鉴定。二级质谱能够得到部分肽短的序列，具有更高的可靠性。随着现在杂志对数据的 要求越来越严格，二级质谱鉴定是蛋白鉴定的大趋势，而且即使目前做一级质谱鉴定的结果， 也需要挑选部分PMF结果做二级质谱验证。2. 研究的物种不是模式生物怎么办？答：可以参考亲缘关系最近的模式生物做比对而实现蛋白质的成功鉴定，如果质 谱图很好而没有鉴定结果说明这是一个全新的蛋白，可以采用de-novo等技术 做深入分析与鉴定。3. 该如何评价质谱效果的好坏？答：做PMF 一般得分超过60分就算成功鉴定，而串联质谱，得分超过60 分或者虽然没有超过60分，但是有最少一条肽段的得分超过30分就算成功鉴 定。4. 一些特殊的质谱方法有什么用途？答：质谱的其它用途包括磷酸化位点

6、分析、蛋白测序、混合蛋白鉴定shotgun 技术以及分子量精确测定、二硫键位置分析等等。5. 用什么染色方法比较好？答：最好用考马斯亮蓝法进行染色，银染也可以，但鉴定成功率稍低，并且推荐 用串联质谱对银染蛋白进行鉴定可以大大提高鉴定成功率。6. 凝胶是否可以长期保存？该如何保持？对鉴定效果有影响吗？答：如果保存时间超过一个月，可以用保鲜膜包裹后放入冰箱保持，如果小于 个月，则可以常温保持，不会影响质谱鉴定效果。7. 质谱鉴定取胶点该如何取？有什么注意事项？答：取点的时候将的枪头前端剪去一点，用枪头将凝胶戳取下来并转移至离心管 中，用水将胶粒反复吸打冲洗两至三次，最后吸干离心管中所有水分封盖保存。 离心管最好用进口离心管，以免塑料污染；水最好用去离子水或者双蒸水；取点 的时候带好口罩与手套，以免角蛋白污染。四级杆质谱仪，顾名思义，就是用四级杆作为质量检测器的质谱仪。其实四级杆在各种质谱仪中广泛存在，它最基本的功能是离子传输通道，但同时也具备质量 分析器和裂解器的作用。单四级杆质谱，是用一个四级杆作为质量分析器，属于低分辩质谱，功能单一，定性和定量 能力都很一般。三重四级杆质谱，是由三个四

7、级杆组成，低分辩质谱，主要用于定量分析，是主流的定量分 析质谱，常用模式MRM。Q-Tof：单四级杆-飞行时间质谱，单四级杆作为离子传输通道和裂解器，后面配合飞行时间 质谱，用于高分辨质谱分析，定性效果好，也可用于定量分析。四极杆质量分析器原理PrintModified on 2011/07/28 14:31 by Administrator Categorized as MSKB, QMS 四极杆质量分析器原理Table of Contents Hide/Show四极杆是什么？四极杆技术精要四极杆的加工技术四极杆生产厂家离子在四极杆分析器内的运动四极杆与离子阱的精度差异古老的Mathieu方程，现代的解四极场的稳定区针尖上的舞蹈四极杆的扫描四极杆是什么？四极杆是四极杆质谱的核心，全称是四极杆质量分析器，quadrupole mass filter/analyzer(QMF、QMA)。它是由四根精密加工的电极杆以及分别施加于x、y方向两组高压高频射频组成的电 场分析器。四根电极可以是双曲面也可以是圆柱型的电极；高压高频信号提供了离子在分析 器中运动的辅助能量，这一能量是选择性的一一只有

8、符合一定数学条件的离子才能够不被无限制的加速，从而安全的通过四极杆分析器。四极杆技术精要”四极杆是一个古老的技术。早期1950年代的时候，德国物理学家Wolfgang Pau申请的专利 944,900 (1956)指出四个双曲面围成的电场可以筛选离子。双曲线的渐近线处于45度的位置， 电极的外形沿着x轴和y轴对称，四个电极的形状完全一致；高压高频射频信号分别加载在 水平和竖直的两对电极上，信号的幅度相同，相位相差180度，即反相。无线延伸的双曲线 四个电极的内部电势是很容易计算的：在每一个瞬间，四极杆内每一点的电势可以计算为：如 v =一心 + C.Ha 1rEQ-1这是一个马鞍面的电场:四极杆内部电场的等势面射频电压伴随着时间的改变，四极杆电场的强度和相位在发生着变化：EQ-2U是四极杆电极上的最大直流电压，而V是电极上的最大射频交流电压。离子就在这一变化 的电场中运动。这个电场的特点是：1. 沿着x和y轴对称2. 等电势面是一个马鞍面3. 0，0点电势为0V，而且是等电势马鞍面的鞍点4. 带电粒子在其中受到的x方向的作用力与粒子和x轴的距离成正比第四点是非常重要的性质，这说明四极杆

9、内部的电场在x或者y的方向具有像弹簧一样回覆 力，可以拴住离子的运动范围。四极杆的加工技术十由于实际试验中不可能使用无限大、无限长的电极，所以通常我们取四个电极内接圆半径 r0的2倍加工，并且长度一般在r0的50倍左右这样四个杆子之间的空隙视角仅有1度。目前，安捷伦公司的1997年以后的四极杆质谱仪均采用了石英镀金双曲面的四极杆； Finnigan公司的TSQ质谱中也采用了不锈钢的双曲面四极杆。在我国，中科科仪KYKY）的 四极杆气体分析器也采用了石英镀钼的双曲面四极杆，其性能相当于早期HP公司的产品， 但是精度略差一些。用于 制造四极杆的国产金属钼杆胚料四川ISciex公司的陶瓷镀金四极杆由于双曲面电极的四极杆加工难度较大，需要使用精密的三坐标磨床，后来逐渐被圆柱形的 电极替代，这样可以使用高精度无心磨床加工，仅相当于1维加工。这样四极杆的加工费用 会大大降低，为四极杆的普及起到了很重要的作用。圆柱型的四极杆同样可以制作高性能的 四极杆质谱，例如Sciex公司的三重四极杆便是陶瓷镀金的圆柱型四极杆。双曲线四极杆的加工精度不如圆柱型四极杆，而且圆柱型四极杆的成本更低。圆柱型四极杆电场的边沿会引入微量的高阶场效应，起初人们一直主观的认为不纯洁的四极 杆会导致四极杆性能的下降。但是近10年来高阶场的研究指出，引入12%的八极场反而 会增强四极杆质谱的性能。这一点Sciex公司的研究人员有很多研究。目前常见的圆柱型四极杆长度在100300mm之间，半径r0在216mm之间，圆柱型电极 的半径r和场半径r0的比通常在甚至更高一些。四极杆是非常精密的部

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