海藻酸钠固定化预实验.docx

本文格式为Word版，下载可任意编辑海藻酸钠固定化预实验 植物细胞固定化预测验 测验目的：熟谙海藻酸钠做固定剂下植物细胞固定化培养试验操作 测验材料：悬浮培养的植物细胞种子、250ml三角瓶5个、培养皿、 移液枪、电子称、电磁搅拌器、滴管或注射器、烧杯、纱布、漏斗、铁架台 测验步骤 1.测验打定：配制植物细胞液体培养基分装到4个250ml三角瓶中，每瓶70ml；配制确定量20g/LCaCl2溶液；配制40g/L的海藻酸钠溶液100ml并称量配制好的海藻酸钠溶液质量w1 2.灭菌 3.制备凝胶球 3.1取种子液用两层无菌纱布过滤，收集滤液 3.2静置滤液，用移液枪移去上层培养液至于事先打定好的无菌三角瓶中备用获得植物细胞 3.3取鲜重20g的细胞于配置好的无菌还在酸钠溶液中边参与边用电磁搅拌器搅拌 3.4用滴管或注射器吸取海藻酸钠--细胞混合液滴入无菌CaCl2溶液中形成直径3--5mm的凝胶球，放置30--60min后倒出CaCl2溶液，用无菌水充分洗涤凝胶珠 3.5称量胶球质量w=8*（20+w1）/20g参与到含70ml崭新培养基+10ml原培养基的三角瓶中，制作两瓶。

称量植物细胞鲜重8g参与到含70ml崭新培养基+10ml原培养基中做对照 4.在确定条件下举行摇瓶振荡培养，每5天取发酵液测定培养基组分消耗处境、代谢产物的生成速率等并查看记录胶球完整处境 植物细胞固定化培养原理及海藻酸钠浓度单因素试验方案 科学研究察觉，密集而有确定程度分化的、生长缓慢的细胞培养物，较分散而无布局的、生长急速的细胞培养物累积更多的次生代谢物其理由为:前者细胞所处的理化环境与其在整体植物中所处的环境类似，细胞因而能够发挥正常的代谢功能；而对后者而言，细胞在培养液中所处的环境既无极性，也无理化梯度故而设想把细胞固定在确定的支持物上，使它们之间紧密接触，并形成确定的理化梯度如此，既可以保障细胞的养分需要，又可制止由于代谢产物的累积而对细胞代谢造成反应抑制 物质生产大多利用处于稳定增殖期的细胞，由于固定化抑制生长发育，因此应考虑尽可能模拟稳定期等等 优点：细胞遗传性状较稳定、能长时间保持细胞活力、光合作用巩固、可反复使用、细胞利用率高、次生物质的合成和积累提高、有利于产物的释放、细胞抗剪切才能巩固、后处理难度小 难点：产物的释放以及如何操纵固定化细胞处于不分裂状态等。

由于用细胞固定化时是以高的细胞密度来保持高活性的，若能抑制细胞增殖来提高回响效率那么可弥补产物生合成所具有的缺点 Yoeman察觉当细胞进入缓慢生长状态时，其次生代谢产物的合成才能对比强这正是利用固定化细胞生产次生代谢产物的根本原理之一 1海藻酸钠浓度的选择 原理：Yoeman察觉当细胞进入缓慢生长状态时，其次生代谢产物的合成才能对比强这正是利用固定化细胞生产次生代谢产物的根本原理之一物质生产大多利用处于稳定增殖期的细胞，由于固定化抑制生长发育，因此应考虑尽可能模拟稳定期等等培养基中的初始总糖浓度都是一致的,经固定化细胞培养一段时间后,假设培养液中的总糖浓度较高,说明糖的通透性差,细胞耗糖较少,因而生长缓慢 试验设计： 将悬浮培养的细胞与确定浓度的海藻酸钠溶液（表1）混合平匀，包埋密度为0.2kg/L，再缓慢滴入确定浓度的CaCl2溶液中，放置30m in后倒出CaCl2溶液，用无菌水充分洗涤凝胶珠 在无菌条件下，将洗涤明净的固定化细胞凝胶珠以确定的接种量转入发酵培养基中，每一浓度三次重复，在确定条件下举行摇瓶振荡培养.以无固定剂等接种量的细胞培养为对照。

每天查看和记录细胞凝胶珠的完整处境30d后取样测定培养液中的总糖浓度 表1 海藻酸钠浓度 海藻酸钠浓度 g/L 培养液中总糖浓度 g/L 25 30 35 40 45 结果分析：培养基中的初始总糖浓度都是一致的，经固定化细胞培养一段时间后，假设培养液中的总糖浓度较高，说明糖的通透性差，细胞耗糖较少，因而生长缓慢.通过测定培养液中总糖浓度综合细胞凝胶珠的完整程度选择海藻酸钠最正确浓度 破囊液根本组成为0.2ｍｏｌ/ＬＮａＨＣＯ3和0.06ｍｏｌ/ＬＮａ3Ｃ6Ｈ5Ｏ7·2Ｈ2Ｏ,ｐＨ7.8～8.2将破囊液与壳聚糖/海藻酸钙微胶囊以体积比10∶1混合,30ｓ内可完成破囊操作 — 4 —。