杨树桑黄生物学特性菌种制作菌种检验方法.docx

本文格式为Word版，下载可任意编辑杨树桑黄生物学特性菌种制作菌种检验方法 　附 录 A （模范性附录） 　杨树桑黄生物学特性 A.1 子实体 子实体多年生，硬木质，无柄，侧生菌盖扁半球形、马蹄形或不规矩形，腹面凸，长径 3 ~ 21 cm，短径 2 ~ 12 cm，厚 1.5 ~ 10 cm有黄色翻边，底部亦颜色鲜黄幼时外观有细绒毛，后脱落，有明显的龟裂，无皮壳，有假皮壳，有同心环棱盖面呈灰褐色、肝褐色至黑色，有光泽;边缘圆钝，龟裂少，有密生的短绒毛，干后脱落，呈肉桂色至咖啡色菌肉硬，木质，暗褐色，厚 0.5 cm 左右菌管多层，层次常不明显，老的菌管有白色菌丝充塞，管口面锈褐色至酱色，管口圆形，每1mm间4~5个刚毛顶端尖锐，基部膨大，（10 ~ 25）m （5 ~7）m 　A.2 菌丝体 菌丝为二体型菌丝系统，具有生殖菌丝和骨架菌丝气生菌丝多为骨架菌丝，黄色，微螺旋状，直径115 ~ 215m基内菌丝多为生殖菌丝，通明，多分支，（115 ~ 215）m （5 ~ 9）m，片面菌丝多短分支，分支端部膨大呈球形；骨架菌丝很少，壁厚，直径 510 ~ 515m 　A.3 孢子 孢子椭圆形，厚壁，黄色，光滑，（3.3 ~ 4.5）m（2.4 ~ 3.5）m。

　附 录 B 　 模范性附录） 　杨树桑黄菌种制作 B.1 感官检验 感官要求符合表 5 的规定 　表 表 5 　菌种感官要求 项 项 　目 查看方法 试管、菌种瓶（袋）、棉塞或硅胶塞、无棉塑料盖、斜面后面外观 肉眼查看 培养基上外观距瓶（袋）口距离、斜面长度、接种量、菌种外观 肉眼查看和测量 杂菌菌落、虫（螨）体 肉眼查看，或用 5 放大镜查看 子实体原基 随机抽取样本 100 瓶（袋），肉眼查看有无原基，并计算 B.2 微生物学检验 B.2.1 菌丝生长状态及锁状联合 用放大倍数不低于 10 40 的光学显微镜对培养物的水浸片举行查看，每一检样查看不少于 50 个视野 　B.2.2 细菌检验 将检验样本按无菌操作接种于 GB/T 4789.28 中 4.7 规定的养分琼脂培养基中，28 ℃ 下培养 1 d ~ 2 d，查看斜面外观是否有细菌菌落生长，必要时用显微镜检查 　B.2.3 霉菌检验 将检验样本按无菌操作接种于 PDA 培养基中，25 ℃ ~ 28 ℃ 下培养 3 d ~ 4 d，查看是否有菌丝形态菌落或有异味，必要时用水浸片镜检 　B.3 菌丝生长速度 B.3.1 母种 PDA 培养基，90 mm 直径培养皿，倾倒培养基 30 ~ 35 mL/皿，菌龄 10 d ~ 12 d 的菌种为接种物，用灭菌的 5 mm 直径打孔器在菌落周边一致菌龄处打接种物，接种后置于 25 ℃ ~ 28 ℃ 黑暗培养，并计算长满平板培养皿生长所需天数。

　B.3.2 原种和栽培种 在选定的培养基上接种后置于 25 ℃ ~ 28 ℃ 黑暗培养，并计算长满瓶（袋）所需天数 　B.4 母种制作 B.4.1 母种培养基配方 配方 1：马铃薯 200 g、葡萄糖 20 g、琼脂 20 g，水 1000 mL，pH 自然 　配方 2：马铃薯 200 g、葡萄糖 20g、酵母浸膏 2.0 g、硫酸镁 0.3 g、琼脂 20 g，水1000 mL，pH 自然 配方 3：马铃薯 200 g、葡萄糖 20 gL－ 1 、磷酸二氢钾 1 gL － 1 、维生素 B1 10mg，琼脂 20 g，水 1000ml，pH 自然 　B.4.2 制作方法 试管规格 18 mm180 mm 或 20 mm200 mm，无菌接种后在 25 ℃ ~ 28 ℃ 条件培养 10 d ~ 13 d 长满试管斜面，制作过程应符合 NY/T 528 的规定 　B.5 原种制作 B.5.1 原种培养基配方 配方1：细木屑 10％，玉米粒 60％，黄豆粒30％，pH中性 　配方2：细木屑 10％，玉米粒 45％，小麦粒 45％，pH中性 　配方3：细木屑 10％，玉米粒 30％，小麦粒 30％，黄豆粒30％，pH中性。

　B.5.2 制作方法 培养基原料质量应符合 NY 5099 的要求使用 750 mL 容积通明菌种瓶，或 16.5 cm38 cm 乙烯袋，在 25 ℃ ~ 28 ℃ 条件培养 40 d ~ 45 d 长满菌种瓶（袋） 　栽培种制作 B.5.3 栽培种配方 配方1：柞木屑 78％，麦麸 20％，石灰粉1%，石膏粉1%，pH中性 　配方2：柞木屑 78％，麦麸 15％，玉米粉5%，石灰粉1%，石膏粉1%，pH中性 　配方3：柞木屑 78％，麦麸 15％，黄豆粉2.5％，玉米粉2.5%，石灰粉1%，石膏粉1%，pH中性 　B.5.4 制作方法 培养基制作方法同 B.2.2 　附 录 C （模范性附录） 　杨树桑黄菌种检验方法 C.1 感官检验 感官检验要求符合表 5 的规定 　表 表 5 　菌种感官要求 项 项 　目 查看方法 试管、菌种瓶（袋）、棉塞或硅胶塞、无棉塑料盖、斜面后面外观 肉眼查看 培养基上外观距瓶（袋）口距离、斜面长度、接种量、菌种外观 肉眼查看和测量 杂菌菌落、虫（螨）体 肉眼查看，或用 5 放大镜查看 子实体原基 随机抽取样本 100 瓶（袋），肉眼查看有无原基，并计算 　C.2 微生物学检验 C.2.1 菌丝生长状态及锁状联合 用放大倍数不低于 10 40 的光学显微镜对培养物的水浸片举行查看，每一检样查看不少于 50 个视野。

　C.2.2 细菌检验 将检验样本按无菌操作接种于 GB/T 4789.28 中 4.7 规定的养分琼脂培养基中，28 ℃ 下培养 1 d ~ 2 d，查看斜面外观是否有细菌菌落生长，必要时用显微镜检查 　C.2.3 霉菌检验 将检验样本按无菌操作接种于 PDA 培养基中，25 ℃ ~ 28 ℃ 下培养 3 d ~ 4 d，查看是否有菌丝形态菌落或有异味，必要时用水浸片镜检 　C.3 菌丝生长速度 C.3.1 母种 PDA 培养基，90 mm 直径培养皿，倾倒培养基 30 ~ 35 mL/皿，菌龄 10 d ~ 12 d 的菌种为接种物，用灭菌的 5 mm 直径打孔器在菌落周边一致菌龄处打接种物，接种后置于 25 ℃ ~ 28 ℃ 黑暗培养，并计算长满平板培养皿生长所需天数 　C.3.2 原种和栽培种 在选定的培养基上接种后置于 25 ℃ ~ 28 ℃ 黑暗培养，并计算长满瓶（袋）所需天数 — 5 —。