氨茶碱的血药浓度测定实验报告.docx

本文格式为Word版，下载可任意编辑氨茶碱的血药浓度测定实验报告 氨茶碱的血药浓度测定及药动学参数计算 一、【目的】掌管血清中氨茶碱血药浓度的紫外测定法，掌管血清中茶碱提取法，验证氨茶碱的动力学模型，掌管二房室动力学模型的参数计算方法用有机溶剂将血清中的氨茶碱提出，用紫外测定法根据标准曲线测出氨茶碱浓度，用残差法运用计算机举行数据处理、曲线描绘及参数计算，从而验证氨茶碱动力学模型，使大家对药动学研究有一初步的了解 二、【原理】氨茶碱为临床常用平喘药，由茶碱与乙二胺缩合而成，在体液中可分开出茶碱在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提出茶碱，并同时沉淀血清蛋白，再用碱液把茶碱从有机溶剂中提出（见图1）测量λ274和λ298处的吸光度（A274为茶碱和本底，即溶剂、血清的吸光度，A298为本底的吸光度）茶碱的吸收度为△A = A274 ?A298，使用UV1601双波长分光光度计测定（见图2） 取 血 试 管 酸 性 分 离 管 碱 性 分 离 管 NaOH 含茶碱的上层液 血液 血清抽提液 图1．茶碱的抽提过程 图2 氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环举行组织分布，达成平衡后转入消释相。

时量曲线呈二房室动力学模型，公式为C = Ae-t +Be-t，曲线由分布相Ca = Ae-t和消释相Cb =Be-α β α β t 两片面组成，其对数表达式分别为log Ca = (-αlog e) t + log A 和log Cb = (-βlog e) t + log B（见图3），在对数坐标上由于分布相较早趋近于零，故可先在时量曲线终末段直线回归法求出消释相对数表达式log Cb = (-βlog e) t + log B，然后用差数法求出Ca = C - Cb，再次运用直线回归法求出分布相对数表达式log Ca = (-αlog e) t + log A，最终得到全体的参数A、α、B和β，从而得到时量曲线C = Ae-t +Be-t α β 1 分布相log Cr = (-αlog e) t + log A Log B 消释相log Cex = (-βlog e) t + log B 图3．二房室模型的时量曲线 三、器材：玻璃试管、离心管、注射器、吸管、离心机、微量进样器、UV1601双波长分光光度计。

药品与试剂：氨茶碱标准液，0.1 N HCl，0.1 N NaOH，异丙醇：氯仿抽提液(5：95)动物：家兔，体重2.5～3 kg 四、【方法步骤】 1． 动物测验：给药、不同时段取血，测定一系列血药光密度（ΔAt） 取健康家兔一只，用二甲苯涂擦兔耳以扩张血管，静脉注射肝素750IU/kg抗凝，取空白血约0.5ml经4min后一耳缘静脉注射氨茶碱(2分钟内注射完)，另一耳缘静脉在不同时段取血，取血时间（x）如表22500转/分开心5分钟分开血清，各管均取血清0. 25 ml于试管中，加0.1 N盐酸溶液0.1 ml、抽提液2.5 ml，振摇混合，2500转/分开心10分钟，吸取氯仿液(下层)2 ml置另一试管中，参与0.1 N NaOH溶液2ml，振摇混匀，2500转/分开心10分钟，吸取碱液(上层)，以空白血为参比，测定一系列ΔAt，结果填入表2的第一和其次列 操作流程如图4： 图4．ΔAt操作流程 2 2.标准管加样 取试管5支，依次参与0.1mg/ml的茶碱标准液20、40、60、80和100 ?l，然后各管参与0.1 N NaOH溶液使总容积为4 ml，那么浓度依次为0.5、l.0、l.5、2.0、2.5 ?g/ml，测定各管△A，填入表1。

五、【数据处理】 （1） 利用Excel求药物光密度（Y）与浓度（X）之间的回归关系Y = A’ + B’X 表１．标准管加样 标 准 管 号 茶碱标准液 (ml) 0.1N NaOH 溶液 （ml） 茶碱浓度X（?g/ml） 光密度Y （△A） 回归方程 1 0.02 3.98 0.5 0.039 2 0.04 3.96 1.0 0.077 3 0.06 3.94 1.5 0.116 4 0.08 3.92 2.0 0.160 5 0.10 3.9 2.5 0.198 Y=0.0802X-0.0023 Excel模板已经做好，仅需要在标准直线工作表中的其次列填入相应的△A值，Excel便自动绘出茶碱光密度——浓度回归直线（见图5），并标明其表达式Y = A’ + B’X，给出相应的统计参数截距A’=-0.002、斜率B’=0.080和相关系数R’=1.000 图5 （2）计算不同时段血药浓度，求时量曲线C = Ae-t +Be-t及药动参数 α β 不同时间点x (min)及其相应血药光密度（ΔAt）已经填入了表2的第一和其次列，在Excel模板“血药浓度计算”工作表中已预先拷入了表2，那么相应血药浓度Ct (μg/ml)和血 3 药浓度对数值 y自动在第三和第四列求出血药浓度和二房室模型的药动参数，有以下几步： 表2．不同时段血药光密度（ΔAt）记录 x (min) 13 22 40 85 244 372 0.109 0.094 0.078 0.061 0.050 0.041 ΔAt Ct (?g/ml) Ct =( ΔAt - A' ) / B'*4/0.2 27.76 24.01 20.02 15.79 13.04 10.80 y (log C) y = LOG10(Ct) 1.443 1.380 1.302 1.198 1.115 1.033 1） 利用回归直线表达式计算每个ΔAt相应的血药浓度，绘制药时曲线，将浓度转换为对数 坐标，找出远端呈直线分布的N个点，电脑拟合给出消释相曲线Cex=Be-βt [对数表达式为log Cb = (-βlog e) t + log B]，给出相应的统计参数截距log B、斜率-βlog e和相关系数r ,给出药动参数B = 17.7594和β=0.0013。

由Cex=Be-βt算出Cex的其余各点，并以红色空心圆点标示于图中（如图6），其数值即为表3中的红色数字 图6． 4 表3．不同时段血药光密度（ΔAt）并残数法二室模型数值记录 x (min) 13 22 40 85 244 372 α Ct (?g/ml) 27.76 24.01 20.02 15.79 13.04 10.80 Cex (μg/ml) 17.46 17.25 16.85 Cr (μg/ml) 10.30 6.76 3.18 2） 求分布相曲线Cr = Ae-t [对数表达式为 log Cr = (-αlog e) t + log A]由于，Cr =C – Cex，所以用减法算出Cr曲线的各点可得出表3中的深蓝色数值，并以深蓝色三角方块标示于图7中电脑拟合分布相曲线公式，分别给出统计参数截距log A、斜率-αlog e和相关系数r 及分布相药动参数A=17.8660和α=0.0433（图7） 图7 3） 求时量曲线C = Ae-t +Be-α β t =17.866e-0.0433t +17.7594 e-0.0013t及二房室模型药动参数。

在Excel模板中计算链接导入已算好的药动参数A、α、B和β，将他们代入公式分别算出药动参数t1/2α、t1/2β、k21、k10、k12、V1、Vd和CL， D为初始给药剂量，需手工输入得图8如下： 药动参数 A α B β t1/2α 5 公 结果 式 17.8660 μg/ml 0.0433 min-1 17.7594 μg/ml 0.0013 min-1 16.0002 =1n2/α min-1 t1/2β k21 k10 k12 Vc =1n2/β =(Aβ+Bα)/(A+B) =αβ/k21 =α+β-K10-K21 D= 525.812 0.0223 0.0026 0.0198 min-1 min-1 min-1 min-1 30.00 mg/kg 0.8421 18.3031 =D/(A+B) [Z=β(A/α+B/β)= Vd = D/Z Cl =Vc×k10 AUC L/kg ] 1.6391 L/kg 0.0022 L/kg/min μ =A/α+B/β 13884.47 g/ml·min 4)药-时曲线下面积（梯形法） i 0 1 2 3 4 5 6 (ti+1-ti) 13.00 9.00 18.00 45.00 159.00 128.00 product 823.95 465.94 792.72 1611.47 4583.64 3051.57 采血时间 血药浓度 t (min) 0.00 13.00 22.00 40.00 85.00 244.00 372.00 C (μg/ml) (Ci+1+Ci) 35.63 63.38 27.76 51.77 24.01 44.04 20.02 35.81 15.79 28.83 13.04 23.84 10.80 10.80 AUC = 13855.8709 ( μg/ml·min) 六、【留神事项】 1. 静注氨茶碱务必快速完成；取血时防止损伤血管壁；取血困难时可抹二甲苯扩张血管；防止外来氨茶碱污染血样（对侧取样）；紫外分光光度计使用前需预热30min并激发氢灯。

2.振摇混匀药液时防止溅出并切实加样3.样品离心前需配平4.测量时若更换波长，务必重新调理0和100％ 七、【结果议论】 房室模型是抽象的数学模型，它的划分与解剖学部位或生理学功能无关药物转运速率一致或相近的部位可划分为同一房室房室模型可以分为一室模型、二室模型、多室模型大多数药物在体内的转运和分布符合二室模型即药物静脉注射入血后，首先快速进入血流量大的组织，如心、肝。